La cromatografía es un método ampliamente utilizado para separar, identificar y cuantificar los componentes de mezclas complejas. Involucra el uso de una fase estacionaria y una fase móvil. Los componentes se separan según su interacción diferencial con las fases y su velocidad de migración. La constante de distribución describe la partición de un soluto entre las fases. La cromatografía es útil para aplicaciones como HPLC y cromatografía de gases.

2. CROMATOGRAFIA
 Es un método muy empleado para la
separación, identificación y determinación de los
componentes químicos de mezclas complejas.
 Ningún otro método de separación es tan poderoso
ni tiene tantas aplicaciones como la cromatografía

3. DESCRIPCION GENERAL DE LA
CROMATOGRAFIA
 Es difícil definir con rigor el termino “cromatografía”
porque el concepto se aplica a una gran variedad de
sistemas y técnicas. Sin embargo, todos estos
métodos tienen en común el empleo de una fase
estacionaria y una fase móvil.

4.  Fase estacionaria:
En cromatografía, la fase estacionaria está fija en
una columna o en una superficie plana.
 Fase móvil:
En cromatografía, la fase móvil se desplaza sobre o
a través de la fase estacionaria, acarreando una
mezcla en la que se encuentra el analito. La fase
móvil puede ser gas, liquido o fluido supercrítico.

5.  Los componentes de una mezcla se pasan a través
de una fase estacionaria mediante el flujo de una
fase móvil y las separaciones están basadas en las
diferencias de la velocidad de migración entre los
componentes de la fase móvil

6.  Los métodos cromatogràficos son de dos tipos
fundamentales.
1.-En la cromatografía en columna la fase
estacionaria se mantiene dentro de un tubo angosto
y la fase móvil se hace pasar por el tubo, con
presión o por gravedad.
CLASIFICACION DE LOS METODOS
CROMATOGRAFICOS

7.  2.- En la cromatografía plana la fase estacionaria
está sujeta por una placa plana o en los poros
de un papel. En este caso la fase móvil se
mueve a través de la fase estacionaria por
acción capilar o por la influencia de la gravedad.

8.  CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

9. Figura 1. Clasificación de métodos cromatogràficos en columna

10.  Como se muestra en la primer columna de la
tabla 1, los métodos de cromatografía en
columna se clasifican de acuerdo con la
naturaleza de la fase
móvil, específicamente, líquidos, gases y fluidos
supercríticos. La segunda columna de la tabla
muestra que hay cinco tipos de cromatografía
liquida y dos tipos de cromatografía de gases
que difieren en la naturaleza de la fase
estacionaria y en los tipos de equilibrio entra las
fases.

11.  En la figura 1 se muestra como se resuelven, por
elución, en una columna empacada, dos
componentes de una muestra, A y B. La columna
consta de un tubo angosto empacado con un sólido
inerte finamente dividido cuya superficie constituye
la fase estacionaria.

12.  La fase móvil ocupa los espacios que quedan entra
las partículas del empaque. Al inicio se
introduce, por la parte superior de la columna, una
solución de la muestra que contiene una mezcla de
A Y B en la fase móvil, en forma de una capa
angosta, en donde losa dos componentes se
distribuyen entre las dos fases, como se muestra en
la figura 1, en el tiempo t0

14.  La porción de la muestra contenida en la fase móvil
se mueve hacia abajo en la columna, en donde se
efectúa la partición entre la fase móvil y la fase
estacionaria (tiempo t1).

15.  El aislamiento de las especies separadas se logra
pasando una cantidad suficiente de fase móvil a
través de la columna para hacer que las bandas
individuales salgan hacia el extremo, en donde se
pueden recolectar o detectar ( tiempos t3 y t4)

16. CROMATOGRAMAS
 Un cromatograma es un gráfico de alguna función
de concentración del soluto contra el tiempo o
volumen de elución.

17.  Si durante la elución se coloca en el extremo de la
columna un detector que responda a la
concentración del soluto y se hace un gráfico de la
señal como función del tiempo , se obtiene una serie
de picos, como se muestra en la parte inferior de la
figura 1.

18.  En este grafico, denominado cromatograma, es útil
tanto para análisis cualitativo como cuantitativo. La
posición de los picos en el eje del tiempo se puede
utilizar para identificar los componentes de la
muestra; el área bajo los picos proporciona una
medida cuantitativa de la cantidad de cada especie.

19. VELOCIDADES RELATIVAS DE
MIGRACION DE LOS SOLUTOS
 La eficiencia de una columna cromatogràfica para
separar dos solutos depende, en parte, de las
velocidades relativas a las cuales se eluyen dos
especies. Estas velocidades están determinadas por
la relación de la concentración del soluto en cada
una de las dos fases.

20. CONSTANTE DE DISTRIBUCION
 Todas las separaciones cromatogràficas se basan
en las diferencias de la cantidad de la distribución
del soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Para la especie A de soluto, el equilibrio implicado
se describe con la ecuación:
A( móvil ) A( estacionaria)

21.  La constante de equilibrio Kc, para esta reacción, se
denomina constante de distribución, que se define
como:
Kc= [A]E = CE
[A]M CM
En donde los términos entre corchetes son las
actividades del soluto A en las dos fases. Por lo
general se sustituye por Cs, la concentración molar
del soluto en la fase estacionaria, y CM , su
concentración analítica molar en la fase móvil.

22. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA
 La cromatografía es una herramienta útil y versátil
para la separación de especies químicas muy
relacionadas. Además, se puede emplear para la
identificación cualitativa y la determinación
cuantitativa de las especies ya separadas.
 *Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).
 *Cromatografía de gases.

23. GRACIAS POR SU ATENCION