La turbidimetría y la nefelometría son métodos de análisis cuantitativo que miden la luz transmitida o dispersada por una suspensión. La turbidimetría mide la luz transmitida y se utiliza para concentraciones altas, mientras que la nefelometría mide la luz dispersada y es más sensible para concentraciones bajas. Ambos métodos se usan comúnmente para analizar la calidad del agua y controlar procesos de tratamiento, así como para cuantificar proteínas y otros analitos.

1. TURBIDIMETRÍA Y NEFELOMETRÍA

2. DEFINICIONES
• TURBIDIMETRÍA: ES LA MEDICIÓN DE LA LUZ
TRANSMITIDA A TRAVÉS DE UNA SUSPENSIÓN, TIENE LA
VENTAJA DE PERMITIR LA VALORIZACIÓN CUANTITATIVA,
SIN SEPARAR EL PRODUCTO DE LA SOLUCIÓN. LAS
MEDICIONES, PUEDEN EFECTUARSE CON CUALQUIER
ESPECTROFOTÓMETRO.

3. • NEFELOMETRÍA: MIDE LA LUZ DISPERSADA EN
DIRECCIÓN DISTINTA A LA LUZ EMITIDA
(GENERALMENTE CON ÁNGULOS QUE OSCILAN ENTRE
15 Y 90º). UTILIZA COMO INSTRUMENTO EL
NEFELÓMETRO. SE SUELE UTILIZAR PARA
CONCENTRACIONES MÁS DILUIDAS. PERMITE MAYOR
SENSIBILIDAD CON CONCENTRACIONES MENORES DE
PARTÍCULAS SUSPENDIDAS. CONSTITUYE UN MÉTODO
MÁS EXACTO PARA LA MEDIDA DE LA OPACIDAD.

5. FINALIDADES: ¿PARA QUÉ SE UTILIZA?
• SE UTILIZAN NORMALMENTE EN EL ANÁLISIS DE LA
CALIDAD QUÍMICA DEL AGUA, PARA DETERMINAR LA
CLARIDAD Y PARA EL CONTROL DE LOS PROCESOS
DE TRATAMIENTO. TAMBIÉN PARA LA
DETERMINACIÓN DE IONES SULFATO.

6. • TURBIDIMETRÍA:
• -SE UTILIZA PARA EL ANÁLISIS DE FIBRINÓGENO,
TRIGLICÉRIDOS, COMPLEJOS AG-AC Y OTRAS
SUSTANCIAS.
- APLICABLE CUANDO LA DISPERSIÓN ES
SUFICIENTEMENTE GRANDE (CONCENTRACIÓN ALTA DE
PARTÍCULAS).

7. • NEFELOMETRÍA:
• - PREFERIBLE PARA CONCENTRACIONES BAJAS DE
PARTÍCULAS, YA QUE LA DISPERSIÓN ES MENOR Y LA
DISMINUCIÓN DE INTENSIDAD DEL HAZ INCIDENTE ES
PEQUEÑA.
• - SE SUELE UTILIZAR PARA MEDIR
CONCENTRACIONES ESPECÍFICAS DE COLONIAS DE
BACTERIAS EN ALGÚN MEDIO DE CULTIVO, O DE
MUCHAS PROTEÍNAS UTILIZANDO EL PRINCIPIO DE
DISPERSIÓN LUMINOSA MOLECULAR.

10. FUNDAMENTO
TURBIDIMETRIA
• LA TURBIDIMETRÍA PUEDE REALIZARSE EN ESPECTROFOTÓMETROS DE
VISIBLE O VIOLETA. CUANDO LA CONCENTRACIÓN DE PARTÍCULAS EN
SUSPENSIÓN SE MIDE POR TURBIDIMETRÍA, LA SUSPENSIÓN SE PONE EN UNA
CUBETA SIMILAR A UN TUBO DE ENSAYO, QUE PERMITE REALIZAR LAS
MEDIDAS DE LAS ENERGÍA INCIDENTES Y TRANSMITIDAS. LA FUENTE DE
RADIACIÓN MÁS FRECUENTEMENTE USADAS ES LA LÁMPARA DE WOLFRAMIO,
PERO PUEDEN UTILIZARSE OTRAS FUENTES DE RADIACIÓN VISIBLE. SI
PONEMOS EN LA CUBETA SUSPENSIONES COLOREADAS SE DEBE USAR
UN FILTRO PARA EVITAR QUE INFLUYA SOBRE LOS RESULTADOS DANDO
VALORES EXCESIVAMENTE ALTOS. LOS TURBIDÍMETROS PUEDEN
INCORPORAR CUALQUIER DETECTOR QUE SEA SENSIBLE A LA LONGITUD
DE ONDA TRANSMITIDA.

13. INSTRUMENTOS

15. • EL HAZ INCIDENTE SE CONVIERTE EN LUZ POLARIZADA EN UN PLANO
MEDIANTE EL POLARIZADOR PRIMARIO. DESPUÉS DE ATRAVESAR LA MUESTRA
EL HAZ SE DIVIDE EN DOS, MEDIANTE UN ESPEJO SEMI-PLATEADO, Y SE
DETECTA CON DOS FOTOTUBOS SEPARADOS. CUANDO LA DISOLUCIÓN DE LA
MUESTRA NO TIENE PARTÍCULAS EN SUSPENSIÓN, LA FOTOCÉLULA 1 DA UNA
RESPUESTA MÁXIMA Y LA FOTOCÉLULA 2 DA UNA RESPUESTA MÍNIMA NULA. LA
RELACIÓN ENTRE LA SEÑAL 2 Y LA SEÑAL 1 ES UNA MEDIA DE LA
CONCENTRACIÓN DE LAS PARTÍCULAS EN SUSPENSIÓN. AL AUMENTAR LA
CONCENTRACIÓN DE LAS PARTÍCULAS EN SUSPENSIÓN EN LA MUESTRA,
AUMENTA LA SEÑAL DE LA FOTOCÉLULA 2 Y DISMINUYE LA DE LA FOTOCÉLULA
1 Y POR ESTO LA RAZÓN DE LAS DOS SEÑALES PERMITE UNA MEDIDA
SENSIBLE DE LA TURBIDEZ. ESTE SISTEMA DE DOBLE HAZ MINIMIZA EL
PROBLEMA DEBIDO A LA ABSORCIÓN POR LAS PARTÍCULAS DE LA DISOLUCIÓN
PERO TIENE EL INCONVENIENTE DE QUE NO PUEDE USARSE CUANDO LA
DISOLUCIÓN CONTIENE SUSTANCIAS ÓPTICAMENTE ACTIVAS. ESTE
INSTRUMENTO PUEDE USARSE TANTO PARA MUESTRAS INDIVIDUALES COMO
PARA CONTROL EN CONTINUO DE CORRIENTES DE FLUIDOS.

16. DIFERENCIAS TURBIDIMETRIA Y
NEFELOMETRÍA
• LA NEFELOMETRÍA SE BASA EN LA MEDICIÓN DE
RADIACIÓN DISPERSA, EN CAMBIO LA
TURBIDIMETRÍA EN LA MEDICIÓN DE LA INTENSIDAD
DE UN HAZ DISMINUIDO.

17. TURBIDIMETRÍA VS NEFELOMETRÍA
• TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS DISPERSANTES
• PARA NEFELOMETRÍA, LA INTENSIDAD DE LA RADICACIÓN DISPERSADAA 90° SERÁ MAYOR
CUANTO MENOS SEA EL TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS. PARA PARTÍCULAS MAYORES, LA
INTENSIDAD DE LA DISPERSIÓN A 90°DISMINUYE. CUANDO SE USA UNA FUENTE DE
RADICACIÓN DE UV/VIS, EL TAMAÑO DE PARTÍCULA OPTIMO
• PARA NEFELOMETRÍA ES DE 0.1 A 1 ΜM. PARA TURBIDIMETRÍA, FENÓMENO MENOS
DEPENDIENTE DE LA Λ,
• EN CAMBIO EL TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS ES MENOS IMPORTANTE; EN ESTE CASO LA
SEÑAL ES LA DISMINUCIÓN RELATIVA DE LA RADIACIÓN TRASMITIDA. DE HECHO, LAS
MEDIDAS TURBIDIMETRICAS SON AUN POSIBLES CUANDO EL TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS
DISPERSANTES PRODUCEN UN AUMENTO DE LA REFLEXIÓN Y REFRACCIÓN (AUNQUE LA
RELACIÓN LINEAL ENTRE LA SEÑAL Y LA CONCENTRACIÓN DE LAS PARTÍCULAS
DISPERSANTES NO PUEDE MANTENERSE MUCHO MÁS).

18. SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA
• CON ESTA SELECCIÓN SE MINIMIZA LAS POSIBLES
INTERFERENCIAS:
• 1.TURBIDIMETRIA: COMO SE MIDE LA RADIACIÓN TRASMITIDA A
TRAVÉS DE LA MUESTRA, ES NECESARIO EVITAR LA
ABSORCIÓN DE LA RADIACIÓN POR LA MUESTRA.
• 2.NEFELOMETRÍA: LA ABSORCIÓN DE LA RADIACIÓN INCIDENTE
NO ES UN PROBLEMA EXCEPTO SI INDUCE FLUORESCENCIA EN
LA MUESTRA. SIN UNA MUESTRA FLUORESCENTE NO HAY
NECESIDAD DE SELECCIÓN DE Λ, Y PUEDE USARSE UNA
FUENTE DE LUZ BLANCA.

19. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
• LA INTENSIDAD DE LA RADIACIÓN DISPERSADA ESTÁ INFLUENCIADA POR LA
FORMA Y TAMAÑO DE LAS PARTÍCULAS. PARA UN ANÁLISIS CUANTITATIVO ES
NECESARIO, POR LO TANTO MANTENER LA DISTRIBUCIÓN DELAS PARTÍCULAS
UNIFORMEMENTE EN LA MUESTRA Y LOS PATRONES. LA MAYORÍA DE LOS
MÉTODOS DE TURBIDIMETRÍA Y NEFELOMETRÍA DEPENDE DE LA FORMACIÓN
DE PARTÍCULAS POR PRECIPITACIÓN.

20. ¿PARA QUÉ SE UTILIZA?
• SE UTILIZAN NORMALMENTE EN EL ANÁLISIS DE LA
CALIDAD QUÍMICA DEL AGUA, PARA DETERMINAR LA
CLARIDAD Y PARA EL CONTROL DE LOS PROCESOS
DE TRATAMIENTO. TAMBIÉN PARA LA
DETERMINACIÓN DE IONES SULFATO.

21. TURBIDIMETRÍA
• SE UTILIZA PARA EL ANÁLISIS DE FIBRINÓGENO,
TRIGLICÉRIDOS, COMPLEJOS AG-AC Y OTRAS
SUSTANCIAS
• APLICABLE CUANDO LA DISPERSIÓN ES
SUFICIENTEMENTE GRANDE (CONCENTRACIÓN ALTA
DE PARTÍCULAS).

22. NEFELOMETRÍA:
• PREFERIBLE PARA CONCENTRACIONES BAJAS DE PARTÍCULAS, YA QUE LA
DISPERSIÓN ES MENOR Y LA DISMINUCIÓN DE INTENSIDAD DEL HAZ
INCIDENTE ES PEQUEÑA.
• SE SUELE UTILIZAR PARA MEDIR CONCENTRACIONES ESPECÍFICAS DE
COLONIAS DE BACTERIAS EN ALGÚN MEDIO DE CULTIVO, O DE MUCHAS
PROTEÍNAS UTILIZANDO EL PRINCIPIO DE DISPERSIÓN LUMINOSA
MOLECULAR.

23. APLICACIÓN
• INMUNOPRECIPITACIÓN
• LA INMUNOPRECIPITACIÓN CUANTIFICADA POR
TURBIDIMETRÍA O NEFELOMETRÍA SE EMPLEA HOY EN LOS
LABORATORIOS DE AUTOINMUNIDAD PARA DETERMINAR
EL FACTOR REUMÁTIDE.
 TANTO EN LOS REACTIVOS COMO EN EL SUERO PUEDEN
EXISTIR PARTÍCULAS QUE PRODUZCAN UNA DISPERSIÓN
DE LUZ NO DESEADA EJ. LIPOPROTEÍNAS,
QUILOMICRONES TAMBIÉN PUEDE INTERFERIR LA
SUCIEDAD. ·-
 LA INTENSIDAD DE LA LUZ DISPERSADA. LAS PROTEÍNAS
SUELEN TENER UN PICO DE ABSORCIÓN EN EL
ULTRAVIOLETA Y LOS CROMÓGENOS DEL SUERO ENTRE
400-425NM; POR TODO ELLO SE SUELE TRABAJAR A

24. • MUY FRECUENTEMENTE, PARA CUANTIFICAR PROTEÍNAS CONCRETAS, SE
UTILIZAN ANTICUERPOS QUE REACCIONAN CON DICHAS PROTEÍNAS DE LA
MUESTRA, EN ESTE CASO SE HABLA DE INMUNO TURBIDIMETRÍA E INMUNO
NEFELOMETRÍA. CUANDO SE PONEN EN CONTACTO UN AG Y UN AC
ESPECÍFICO CONTRA ESE ANTÍGENO AMBOS REACCIONAN Y FORMAN UN
COMPLEJO AG-AC. INICIALMENTE LOS COMPLEJOS SE FORMAN RÁPIDAMENTE
PERO, EXISTE UNA SEGUNDA FASE DE CRECIMIENTO DE COMPLEJOS MÁS
LENTA Y, ES PRECISAMENTE EN ÉSTA FASE EN LAQUE APARECE LA
DISPERSIÓN DE LA LUZ. ASÍ, EN LA INMUNO TURBIDIMETRÍA E INMUNO
NEFELOMETRÍA SE MIDE LA DISPERSIÓN DE LA LUZ PROVOCADA POR LOS
COMPLEJOS AG-AC. EN OCASIONES LOS AC SE UNEN A BOLITAS DE LÁTEX
PARA AUMENTAR EL TAMAÑO DE LOS COMPLEJOS (INMUNO-ANÁLISIS
POTENCIADOS).

25. INMUNODIFUSIÓN RADIAL
• EN ESTE CASO SE AÑADE UN ANTISUERO ESPECÍFICO A LA
AGAROSA QUE, A SU VEZ, SE VIERTE SOBRE PLACAS. SE
FORMAN POZOS EN EL GEL Y SE COLOCAN EN ELLOS
ESTÁNDARES DE PROTEÍNAS Y PROBLEMAS(ANTÍGENOS).
EL ANTÍGENO DIFUNDE EN EL GEL DURANTE VARIAS HORAS
Y VA REACCIONANDO CON EL AC. EN LA ZONA DE
EQUIVALENCIA SE PRODUCE UN ANILLO DE PRECIPITACIÓN

26. INMUNODIFUSIÓN DOBLE O TÉCNICA DE
OUCHTERLONY
• SE FORMAN POZOS EN EL GEL DE AGAROSA, GENERALMENTE EN PATRÓN DE
ROSETA. SE DEPOSITAN ANTISUEROS ESPECÍFICOS EN LOS POZOS
CENTRALES Y LOS ESTÁNDARES DE PROTEÍNAS Y LOS PROBLEMAS EN LOS
POZOS CIRCUNDANTES. AL DIFUNDIR LAS MUESTRAS EN EL GEL, DONDE EL
ANTICUERPO Y EL ANTÍGENO ALCANZAN LA EQUIVALENCIA, SE FORMAN
BANDAS DE PRECIPITADOS INSOLUBLES. LA POSICIÓN Y FORMA DELA BANDA
SE DETERMINAN SEGÚN LA CONCENTRACIÓN DEL ANTÍGENO Y DEL
ANTICUERPO, Y SUS TAMAÑOS. LA DISTANCIA DE LAS BANDAS CON RESPECTO
AL ANTICUERPO ES DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE
ANTÍGENO PRESENTE.

27. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS EN ORINA Y
DE ANTICUERPOS EN SUERO

30. BIBLIOGRAFIA
WILLAR. METODOS INSTRUMENTALES DE ANALISIS
http://es.slideshare.net/neftaliperezperez/turbidimetra-y-nefelometra
http://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria#scribd
http://www.buenastareas.com/ensayos/Nefelometr%C3%ADa-y-Turbidimetr%C3%ADa/3947672.html
http://es.slideshare.net/abzhamozarth/expo-turbidimetria-y-nefelometria
http://es.wikipedia.org/wiki/Nefelometr%C3%ADa