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Infecciones entericas
- 1. Universidad de Chile Facultadde Medicina Instituto de Ciencias Biomédicas ICBM Programa de Microbiología y Micología Cecilia Toro U., PhD 2012 Principales causas de mortalidad en niños menores de 5 años World Health Report, 2005 • Diarrea acuosa • Diarrea con sangre (disentérica) • Fiebre entérica Manifestaciones Clínicas de Infecciones entéricas
- 2. La diarrea esun síndrome clínico de etiología diversa. La diarrea se define como : • un incremento del volumen (aumento en la cantidad de heces), • mayor fluidez (se hacen más líquidas) o • mayor frecuencia del movimiento intestinal Cuando estos síntomas son repentinos y están acompañados de dolor de estómago o retortijones, náuseas o vómitos, se habla de SINDROME DE DIARREA AGUDA (SDA) En general, AUTOLIMITADO Manifestaciones clínicas de la deshidratación Consecuencias de una diarrea: Deshidratación Las señales de deshidratación en bebés y niños pequeños son las siguientes: • boca y lengua secas • llanto sin lágrimas • pañal seco durante 3 horas o más • fiebre alta • tener mucho sueño Bacterias Gram Negativo Familias Bacilos Gram Negativo Aerobios o Facultativos Enterobacteriaceae Vibrionaceae Aeromonaceae Campylobacteriaceae Helicobacteriaceae Pseudomonaceae Pasteurellaceae
- 3. Géneros (>20) Especies(>100) Escherichia E. coli Klebsiella K. pneumoniae Salmonella S. enteritidis Shigella S. flexneri Citrobacter C. freundii Enterobacter E. cloacae Morganella M. morganii Proteus P. mirabilis Serratia S. marcescens Yersinia Y. enterocolitica Hábitat : • ambiental organismos ubicuos (suelo, agua, vegetación) • comensal (intestino de animales y hombre) Cultivo : crecimiento rápido (18-24 horas) medios selectivos para muestras desde sitios no estériles Identificación en el lab : Pruebas bioquímicas Pruebas serológicas Familia Enterobacteriaceae Estos géneros se han clasificado según: • sus propiedades bioquímicas (baterías bioquímicas), • estructura antigénica (serotipificación) e • hibridación y secuenciación de su material genético Clasificación Comensales: enterobacterias inocuas para el hospedero, algunos son patógenos oportunistas Klebsiella pneumoniae Serratia marcecens Proteus mirabilis Enterobacter E. coli Patógenos: enterobacterias que producen enfermedad en el intestino - Shigella - Salmonella typhi , S. enteritidis - Yersinia enterocolitica - E. coli diarreogénicas Enterobacterias Patologías asociadas 30-35% Sepsis 70% Infección tracto urinario (E. coli, Proteus) Infecciones gastrointestinales: Diarrea con o sin sangre Características microbiológicas Enterobacterias • Bacilos • Gram (-) • No forman esporas • Anaerobios facultativos • No poseen la enzima citocromo oxidasa • Fermentan la glucosa Lactosa (+) Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Serratia Lactosa (-) Salmonella, Shigella, Yersinia ENDOTOXINAS: activa el complemento, produce fiebre, coagulación intravascular diseminada, shock y finalmente muerte. EXOTOXINAS: toxinas formadas por proteínas Ej. enterotoxinas, toxinas Shiga y similares a Shiga, y las hemolisinas. CÁPSULA: estructura polisácarida que le confiere protección contra la fagocitosis, dada su naturaleza hidrofílica. FACTORES DE ADHERENCIA: fimbrias que le permiten reconocer una estructura en la célula epitelial y facilitan la colonización. RESISTENCIA A LA ACCIÓN BACTERICIDA DEL SUERO Factores de virulencia
- 4. Clasificación serológica Flagelo (antígeno H) Peptidoglicán Fimbrias Cápsula (AntígenoK ) LPS (Antígeno O) PATÓGENOS INTESTINALES Yersinia spp. Shigella spp. Salmonella (algunos serotipos de la especie enterica) E. coli diarreogénicos Enterobacterias Campylobacter spp Clostridium difficile Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus No Enterobacterias Shigella • Shigella es un bacilo Gram negativo entérico • Es inmóvil • Su único hospedero natural conocido es el hombre • Se clasifican en 4 especies: S. sonnei, S. flexneri, S. dysenteriae, S. boydii • Es el agente etiológico de la Shigelosis Agar SS Cuadro clínico z Diarrea líquida, fiebre z Diarrea con sangre, mucus y pus z Puede haber alteraciones del Sistema Nervioso Central, como convulsiones y compromiso de conciencia
- 5. Ciclo infectivo z Ingestióna través de alimentos contaminados (se requiere 10-100 bacterias como dosis infectiva) z Sobrevida a las barreras del tracto digestivo z Liberación de toxinas citotóxicas y neurotóxicas (S. dysenterieae) z Invasión y destrucción de las células epiteliales del colon Diagnóstico: Coprocultivo (Confirmatorio) - medios selectivos (McConkey, SS) - Presencia de leucocitos fecales (Presuntivo) Muestra: Deposición recién emitida - hisopado rectal, pañal - Uso de medio de transporte (Cary Blair) Tratamiento: Uso de antibióticos reservado para casos muy severos - Disminuyen la severidad y duración de la enfermedad - Disminuye tiempo de excreción de la bacteria Shigelosis Vigilancia de Resistencia Antimicrobiana en cepas de Shigella en Chile 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje A M P S X T T E T C A F A M O X I / C L A V G E N T A C I P R O A C N A L I Intermedio Sensible Resistente 0% 50% 100% Porcentaje A M P S X T T E T C A F A C N A L I A M O X I / C L A V G E N T A C I P R O Intermedio Sensible Resistente 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje A M P T E T C A F A M O X I / C L A V S X T G E N T A C I P R O A C N A L I Antibióticos Intermedio Sensible Resistente 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje A M P T E T C A F S X T A M O X I / C L A V A C N A L I G E N T A C I P R O Antibióticos Intermedio Sensible Resistente 1995-1997 2004-2007 S.sonnei S.flexneri Salmonella • Salmonella es un bacilo Gram negativo entérico • Es móvil • Se encuentra en casi todos los animales • Se clasifica en 2 especies: S. enterica y S. bongori y más de 2000 serotipos • Es el agente etiológico de: enteritis bacteremia fiebre entérica portador asintomático Agar SS S. Typhi
- 6. Mecanismo de transmisión: •Para S. Enteritidis : Ingestión de aguas o alimentos contaminados: carnes de ave mal cocinadas y huevos crudos • Para S. Typhi : Es muy importante la transmisión por manipuladores de alimentos, y por ingesta de verduras y frutas que crecen a ras de suelo • Se necesita una dosis alta (106-8 bacterias) Ciclo infectivo z Ingestión a través de alimentos contaminados z Sobrevida a las barreras del tracto digestivo z Invasión de las células epiteliales del intestino delgado a nivel de las Placas de Peyer z Sobrevida en los macrófagos del retículo endotelial intestinal Si es S. Enteritidis destrucción del epitelio Si es S. Typhi traslado de la bacteria a los órganos linfoides : bazo e hígado COPROCULTIVO Muestra: Deposición o Hisopado rectal Siembra: Agar Mac Conckey Agar SS Agar XLD Incubación:18-24 horas 37ºC, aerobiosis Siembra Siembra Agar Mac Conkey Agar SS Rosadas Transparentes Transparentes Negras Rosadas Lactosa (+) Lactosa (-) Batería TSI Batería TSI Bioquímica LIA Bioquímica LIA MIO MIO Urea Urea Citrato Citrato 18 – 24 horas 37ºC , aerobiosis 18 – 24 horas 37ºC , aerobiosis E.coli Salmonella - Shigella Shigella Salmonella E.coli Serotipificación Antibiograma
- 7. E. coli Diarreogénicos ™E.coli enterotoxigénico ECET ™E. coli enteropatogénico ECEP ™E. coli enterohemorrágico ECEH ™ E. coli enteroinvasivo ECEI ™ E. coli enteroagregativo ECEAg ™ E. coli difusamente adherente ECAD Categorías: E. coli enterotoxigénico ECET • Contagio por alimentos o aguas contaminadas... • Asociada “diarrea de viajero” • Se adhiere en forma específica al epitelio del intestino delgado mediante Fimbrias, denominadas Factores de colonización (CS), codificados en plasmidios. • Toxinas STI y STII (termoestables; codificadas en un transposón) y LTI y LTII (termolábiles). STI: Estimula la salida de Cl- y/o inhibe absorción de NaCl. STII: Se cree que estimularía la salida de HCO3 -. LTI: Función homóloga a la toxina del cólera. LTII: Rara en el humano. • No existe daño al epitelio Daño del epitelio intestinal por “Attachment and effacement” E. coli enteropatogénico ECEP • Contagio por alimentos y aguas contaminadas. • La diarrea se produce generalmente en niños pequeños < 2 años. • La bacteria se adhiere al epitelio del intestino delgado y destruye las microvellosidades. • Los factores de virulencia están codificados en la “isla de patogenicidad LEE” y en plasmidio. • Se produce diarrea acuosa y reducción de la absorción. E. coli enterohemorrágico ECEH • Contagio por alimentos contaminados, (hamburguesas). • Es la única categoría de E.coli diarreogénica zoonótica. • Presenta la más baja dosis infectiva (<100 bacterias). • Causa desde diarreas leves hasta colitis hemorrágica. • Es el agente infeccioso más importante de la insuficiencia renal aguda y SHU en niños. • Posee toxinas stx1 y stx2 codificadas en profagos. Se une a las células epiteliales del colon, produciendo el mismo reordenamiento del citoesqueleto que las ECEP.
- 8. FACTORES DE VIRULENCIA DEECEH SISTEMA DE SECRECION TIPO III INTIMINA (eae) stx1 y/o stx2 hlyA HEMOLISINAS ISLA DE PATOGENICIDAD LEE TOXINAS TIPO SHIGA ECEH Toxina Shiga Reord citoesqueleto Reord citoesqueleto ECEP ECET Toxinas LT y ST Diagnóstico de estas bacterias patógenas????? Diagnóstico mediante Técnicas Moleculares !!!!!!! • PCR • Southernblot • Colony blot PCR múltiple para la detección de los genes eaeA, stx1, stx2, lt, stI y stII. Los genes fueron amplificados para cepas controles de E. coli diarreogénicos y cepas de pacientes con SHU, y de pacientes pertenecientes a un brote. Carriles: 1. marcador de peso molecular; 2 y 3, E. coli C600J (stx1+) ; 4 y 5, E. coli C600W (stx2+); 6 y 7, E. coli 933J (stx1+, stx2+) ; 8, 9 y 10, E. coli 2348/69 (eae+); 11, 12 y 13, E. coli H10407 (lt+, stII+); 14, E. coli stp+; 15, SHU-32; 16, SHU-14; 17, B2P2(2); 18, control negativo; 19, marcador de peso molecular. eaeA stx2 stx1 lt stII 1500 pb 600 pb 100 pb 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 1200 pb “LAVADO DE MANOS”