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PRACTICA N° 10
DETERMINACIONES DE ACIDEZ TOTAL TITULABLE, ACIDEZ VOLÁTIL,
ACIDEZ FIJA Y pH. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS.
I. INTRODUCCIÓN: Los ácidos orgánicos presentes en los alimentos influyen
en el sabor, color y la estabilidad de los mismos. Los valores de acidez
pueden ser muy variables, por ejemplo, en el caso de las frutas, varían desde
0,2 a 0,3 %, en manzanas de poca acidez hasta de 6 % en el limón (al ácido
cítrico puede constituir hasta 60 % de los sólidos solubles totales de la
porción comestible). Los ácidos predominantes en frutas son: el cítrico (en la
mayoría de las frutas tropicales), el málico (Ej. manzana), el tartárico (Ej.
uvas y tamarindo). Los productos pesqueros, aves y productos cárnicos son
de acidez muy baja y el ácido predominante es el láctico y no los di o tri
carboxílicos característicos de los tejidos vegetales. Esta determinación
puede ser también importante en grasas y aceites, jugos de frutas y
vegetales, etc. Por ejemplo, el deterioro de granos y productos de molienda
va acompañado de un incremento de la acidez.
El contenido de ácidos volátiles es de importancia en productos fermentados
de frutas y cereales. En vinos constituye un buen índice de calidad; aunque
las levaduras forman algo de ácido acético durante la fermentación
alcohólica, particularmente en las etapas iniciales lo utilizan parcialmente: la
presencia de 0,1% o más de ácido acético es una buena indicación de
descomposición. La determinación de acidez volátil (cantidad y tipo) es
también útil, entre otros productos, en la determinación de la descomposición
de algunos productos enlatados de pescado.
El pH se define como - log [H3O+
] ó –log 1/[H3O+
]. Su determinación y control
es de gran importancia en las industrias de alimentos: en la utilización y
control de microorganismos y enzimas; en la clarificación y estabilización de
jugos de frutas y vegetales y de productos fermentados de frutas y cereales;
en la producción de mermeladas, jaleas y “jams” cuya textura está
determinada por la concentración del ion hidrógeno del gel pectina-azúcar-
71
ácido; en el color y retención del “flavor” de productos de frutas; en la
coloración de frutas con colorantes artificiales como eritrosina, etc. Resulta
particularmente importante en lo que se refiere a rigurosidad del tratamiento
térmico (tiempo y temperatura de procesamiento) en general, la velocidad de
destrucción térmica de las bacterias, particularmente las anaerobias
formadoras de esporas, se incrementa marcadamente cuando aumenta la
concentración de iones hidronio (el efecto no es tan pronunciado en el caso
de hongos y levaduras).
Alimentos con valores de pH menores de 4,5 son considerados “ácidos” y
con valores mayores, alimentos “no ácidos”. Para estos últimos la rigurosidad
del procesamiento térmico deberá ser mayor.
Las medidas electrométricas del pH han sustituido grandemente los otros
métodos, aún cuando en el AOAC todavía se incluyen métodos
calorimétricos para pan y otros productos de cereales.
El pH presente en el alimento será el resultado de los sistemas
amortiguadores naturales que predominen en el mismo. Los sistemas
amortiguadores (o “buffers”) son mezclas de ácidos (o bases) débiles y sus
sales. La “capacidad buffer” se ha definido como la resistencia al cambio de
pH que muestra una solución cuando se le somete a ganancia o pérdida de
ácido o álcali.
II. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: La determinación de acidez y de pH de
productos alimenticios líquidos tales como jarabes, jugos, vinos y bebidas
claras que no contienen cantidades apreciables de dióxido de carbono (CO2)
presenta pocos problemas. Para productos que contienen dióxido de carbono
disuelto u ocluido y otros casos específicos consultar AOAC (por Ej. en la
determinación de pH de productos de cereales tales como pan y otros
productos horneados y pastas, se prepara un extracto suspendiendo 10 g en
100 ml de agua y se mide el pH del líquido sobrenadante, decantado
previamente).
72
III. ACIDEZ TOTAL TITULABLE.
A. Fundamento: En el procedimiento usual para determinar la
concentración total de ácidos, una alícuota de la solución que contiene el
ácido se titula con una solución estándar de álcali hasta el punto en el
cual una cantidad equivalente de la base ha sido añadida. Este punto final
puede detectarse mediante indicadores (cambio de color),
electrométricamente (pHmetro), etc.
B. Métodos.
1. Acidez total por titulación Electrométrica (Curva de
neutralización).
a. Fundamento: Gram (1950) indicó que una titulación
potenciométrica el punto final se encuentra, generalmente,
trazando un grafico de E (o pH) como una función de V (volumen
añadido). Algunas veces, sin embargo, el punto de máxima
pendiente no muestra el punto final exacto de la titulación como
en la titulación ΔV/ΔpH se grafica contra V y se observa el punto
de inflexión.
b. Reactivos:
NaOH 0,1 N.
c. Procedimiento:
1. Pipetear 10 ml de jugo de fruta o vino (en caso de que su
muestra sea vinagre medir 1 ml) en un vaso de precipitado de
250 ml que contenga 50 ml de agua libre de CO2.
2. Determinar el pH.
3. Agregar 1 ml de la solución estándar de NaOH 0,1 N y repetir
la lectura del pH
4. Continuar agregando volúmenes de 1 ml de base y
determinar el pH después de cada adición.
5. Cuando se aproxime el pH a 5 agregar 0,5 ml de la solución
de NaOH en lugar de 1 ml.
6. Continuar tomando medidas de pH hasta que estas sean
73
aproximadamente constantes.
d. Cálculos:
1. Trazar las curvas de neutralización de pH vs. ml de NaOH 0,1
N añadidos y pH/V vs. ml de NaOH 0,1 N añadidos.
2. De la curva obtener el volumen necesario para neutralizar la
muestra y calcular el porcentaje de acidez (como cítrico,
málico, tartárico o acético según la muestra).
2. Acidez total por volumetria:
a. Fundamento: El método se basa en determinar el volumen de
NaOH estándar necesario para neutralizar el ácido contenido en
la alícuota que se titula, determinando el punto final por medio del
cambio de color que se produce por la presencia del indicador
ácido-base empleado.
b. Reactivos:
1. Hidróxido de sodio (NaOH) 0,1 N.
2. Fenolfataleina al 1% en alcohol al 95%.
c. Procedimiento:
1. Pipetar 10 ml de jugo de fruta o vino (5 ml en caso de jugo de
limón o 1 ml de vinagre) a un erlenmeyer que contenga 100-
200 ml de agua hirviendo (500 ml o más si la muestra es
coloreada)
2. Continuar calentando por 30-60 segundos.
3. Dejar enfriar un poco y titular con NaOH 0,1 N usando 0,5 ml)
o más si la cantidad de agua es mayor) de fenolftaleína al
0,5% hasta coloración rosada.
4. Repetir el proceso para una segunda determinación.
d. Cálculos: Calcular el porcentaje de acidez como ácido cítrico,
málico, tartárico o acético según la muestra comparar los
resultados con los obtenidos en la titulación electrométrica.
NOTA: Para muestras muy coloradas resulta conveniente usar el
método electrométrico.
74
IV. ACIDEZ VOLÁTIL Y ACIDEZ FIJA.
A. Fundamento: El contenido de acidez volátil de productos fermentados
de frutas y cereales puede determinarse separando los ácidos volátiles
presentes (principalmente acético con trazas de formica): por evaporación
(después de lo cual se titula la acidez fija); por destilación directa a vapor
o extracción con solvente y titulando bien el destilado o el residuo (según
el método) con una solución estándar de álcali usando fenolftaleína como
indicador.
B. Reactivos:
1. Hidróxido de sodio (NaOH) 0,1 y 0,5 N
2. Fenolftaleína al 1% en alcohol al 95%.
C. Procedimiento:
1. Acidez total titulable: Los procedimientos descritos en esta sección
se obtuvieron de la AOAC (30.071; 30.072; 30.073).
Titular la muestra de según el procedimiento III. B.2 (usar NaOH 0,5 N
en lugar del 0,1 N)
2. Acidez no volátil (fija):
1. Medir 10 ml de vinagre en una cápsula de porcelana de 200 ml.
2. Evaporar casi a sequedad
3. Añadir 5-10 ml de agua y evaporar nuevamente
4. Repetir hasta realizar 5 evaporaciones (por lo menos)
5. Añadir aproximadamente 200 ml de agua recientemente hervida y
titular con NaOH 0,1 N usando fenolftaleína como indicador.
3. Acidez volátil: Se determina por cálculo, sustrayendo del % de
acidez total titulable el % de acidez no volátil (o fija).
V. DETERMINACIÓN DE pH.
Procedimiento: Una vez preparada la muestra de acuerdo al procedimiento
requerido proceda a realizar la determinación del pH de la muestra.
75
1. Calentar y calibrar el medidor de pH (pHmetro) de acuerdo a las
instrucciones del aparato.
2. Los electrodos deben mantenerse sumergidos en agua destilada y
lavarse cuidadosamente, antes y después de usar, con agua destilada
(secar el exceso sin frotar el electrodo).
3. Para la calibración usar soluciones buffer pH 7 y 4.
4. Agitar la muestra después de la lectura y repetirla hasta que dos
lecturas coincidan cercanamente.
B. Cálculos: Usando constante de disociación del ácido predominante de
su muestra, calcule el pH teórico de la misma. Comparar el valor teórico
con el obtenido experimentalmente.
VI. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS (“BUFFERS”):
De acuerdo a los fundamentos teóricos de preparación de soluciones
amortiguadoras calcular las cantidades de reactivos que debe pesar o medir
para preparar 100 ml de buffer de concentración y pH asignados con
anterioridad por el profesor.
Chequear en el pH metro junto con el profesor o el auxiliar docente, el pH
experimental de la solución preparada por usted.
NOTA: Entregar los cálculos antes de realizar la practica. Conservar copia
para entregarla como guía en el laboratorio.
76

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Trabajo de bioquimica
 

Practica10 acidez titulable

  • 1. PRACTICA N° 10 DETERMINACIONES DE ACIDEZ TOTAL TITULABLE, ACIDEZ VOLÁTIL, ACIDEZ FIJA Y pH. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS. I. INTRODUCCIÓN: Los ácidos orgánicos presentes en los alimentos influyen en el sabor, color y la estabilidad de los mismos. Los valores de acidez pueden ser muy variables, por ejemplo, en el caso de las frutas, varían desde 0,2 a 0,3 %, en manzanas de poca acidez hasta de 6 % en el limón (al ácido cítrico puede constituir hasta 60 % de los sólidos solubles totales de la porción comestible). Los ácidos predominantes en frutas son: el cítrico (en la mayoría de las frutas tropicales), el málico (Ej. manzana), el tartárico (Ej. uvas y tamarindo). Los productos pesqueros, aves y productos cárnicos son de acidez muy baja y el ácido predominante es el láctico y no los di o tri carboxílicos característicos de los tejidos vegetales. Esta determinación puede ser también importante en grasas y aceites, jugos de frutas y vegetales, etc. Por ejemplo, el deterioro de granos y productos de molienda va acompañado de un incremento de la acidez. El contenido de ácidos volátiles es de importancia en productos fermentados de frutas y cereales. En vinos constituye un buen índice de calidad; aunque las levaduras forman algo de ácido acético durante la fermentación alcohólica, particularmente en las etapas iniciales lo utilizan parcialmente: la presencia de 0,1% o más de ácido acético es una buena indicación de descomposición. La determinación de acidez volátil (cantidad y tipo) es también útil, entre otros productos, en la determinación de la descomposición de algunos productos enlatados de pescado. El pH se define como - log [H3O+ ] ó –log 1/[H3O+ ]. Su determinación y control es de gran importancia en las industrias de alimentos: en la utilización y control de microorganismos y enzimas; en la clarificación y estabilización de jugos de frutas y vegetales y de productos fermentados de frutas y cereales; en la producción de mermeladas, jaleas y “jams” cuya textura está determinada por la concentración del ion hidrógeno del gel pectina-azúcar- 71
  • 2. ácido; en el color y retención del “flavor” de productos de frutas; en la coloración de frutas con colorantes artificiales como eritrosina, etc. Resulta particularmente importante en lo que se refiere a rigurosidad del tratamiento térmico (tiempo y temperatura de procesamiento) en general, la velocidad de destrucción térmica de las bacterias, particularmente las anaerobias formadoras de esporas, se incrementa marcadamente cuando aumenta la concentración de iones hidronio (el efecto no es tan pronunciado en el caso de hongos y levaduras). Alimentos con valores de pH menores de 4,5 son considerados “ácidos” y con valores mayores, alimentos “no ácidos”. Para estos últimos la rigurosidad del procesamiento térmico deberá ser mayor. Las medidas electrométricas del pH han sustituido grandemente los otros métodos, aún cuando en el AOAC todavía se incluyen métodos calorimétricos para pan y otros productos de cereales. El pH presente en el alimento será el resultado de los sistemas amortiguadores naturales que predominen en el mismo. Los sistemas amortiguadores (o “buffers”) son mezclas de ácidos (o bases) débiles y sus sales. La “capacidad buffer” se ha definido como la resistencia al cambio de pH que muestra una solución cuando se le somete a ganancia o pérdida de ácido o álcali. II. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: La determinación de acidez y de pH de productos alimenticios líquidos tales como jarabes, jugos, vinos y bebidas claras que no contienen cantidades apreciables de dióxido de carbono (CO2) presenta pocos problemas. Para productos que contienen dióxido de carbono disuelto u ocluido y otros casos específicos consultar AOAC (por Ej. en la determinación de pH de productos de cereales tales como pan y otros productos horneados y pastas, se prepara un extracto suspendiendo 10 g en 100 ml de agua y se mide el pH del líquido sobrenadante, decantado previamente). 72
  • 3. III. ACIDEZ TOTAL TITULABLE. A. Fundamento: En el procedimiento usual para determinar la concentración total de ácidos, una alícuota de la solución que contiene el ácido se titula con una solución estándar de álcali hasta el punto en el cual una cantidad equivalente de la base ha sido añadida. Este punto final puede detectarse mediante indicadores (cambio de color), electrométricamente (pHmetro), etc. B. Métodos. 1. Acidez total por titulación Electrométrica (Curva de neutralización). a. Fundamento: Gram (1950) indicó que una titulación potenciométrica el punto final se encuentra, generalmente, trazando un grafico de E (o pH) como una función de V (volumen añadido). Algunas veces, sin embargo, el punto de máxima pendiente no muestra el punto final exacto de la titulación como en la titulación ΔV/ΔpH se grafica contra V y se observa el punto de inflexión. b. Reactivos: NaOH 0,1 N. c. Procedimiento: 1. Pipetear 10 ml de jugo de fruta o vino (en caso de que su muestra sea vinagre medir 1 ml) en un vaso de precipitado de 250 ml que contenga 50 ml de agua libre de CO2. 2. Determinar el pH. 3. Agregar 1 ml de la solución estándar de NaOH 0,1 N y repetir la lectura del pH 4. Continuar agregando volúmenes de 1 ml de base y determinar el pH después de cada adición. 5. Cuando se aproxime el pH a 5 agregar 0,5 ml de la solución de NaOH en lugar de 1 ml. 6. Continuar tomando medidas de pH hasta que estas sean 73
  • 4. aproximadamente constantes. d. Cálculos: 1. Trazar las curvas de neutralización de pH vs. ml de NaOH 0,1 N añadidos y pH/V vs. ml de NaOH 0,1 N añadidos. 2. De la curva obtener el volumen necesario para neutralizar la muestra y calcular el porcentaje de acidez (como cítrico, málico, tartárico o acético según la muestra). 2. Acidez total por volumetria: a. Fundamento: El método se basa en determinar el volumen de NaOH estándar necesario para neutralizar el ácido contenido en la alícuota que se titula, determinando el punto final por medio del cambio de color que se produce por la presencia del indicador ácido-base empleado. b. Reactivos: 1. Hidróxido de sodio (NaOH) 0,1 N. 2. Fenolfataleina al 1% en alcohol al 95%. c. Procedimiento: 1. Pipetar 10 ml de jugo de fruta o vino (5 ml en caso de jugo de limón o 1 ml de vinagre) a un erlenmeyer que contenga 100- 200 ml de agua hirviendo (500 ml o más si la muestra es coloreada) 2. Continuar calentando por 30-60 segundos. 3. Dejar enfriar un poco y titular con NaOH 0,1 N usando 0,5 ml) o más si la cantidad de agua es mayor) de fenolftaleína al 0,5% hasta coloración rosada. 4. Repetir el proceso para una segunda determinación. d. Cálculos: Calcular el porcentaje de acidez como ácido cítrico, málico, tartárico o acético según la muestra comparar los resultados con los obtenidos en la titulación electrométrica. NOTA: Para muestras muy coloradas resulta conveniente usar el método electrométrico. 74
  • 5. IV. ACIDEZ VOLÁTIL Y ACIDEZ FIJA. A. Fundamento: El contenido de acidez volátil de productos fermentados de frutas y cereales puede determinarse separando los ácidos volátiles presentes (principalmente acético con trazas de formica): por evaporación (después de lo cual se titula la acidez fija); por destilación directa a vapor o extracción con solvente y titulando bien el destilado o el residuo (según el método) con una solución estándar de álcali usando fenolftaleína como indicador. B. Reactivos: 1. Hidróxido de sodio (NaOH) 0,1 y 0,5 N 2. Fenolftaleína al 1% en alcohol al 95%. C. Procedimiento: 1. Acidez total titulable: Los procedimientos descritos en esta sección se obtuvieron de la AOAC (30.071; 30.072; 30.073). Titular la muestra de según el procedimiento III. B.2 (usar NaOH 0,5 N en lugar del 0,1 N) 2. Acidez no volátil (fija): 1. Medir 10 ml de vinagre en una cápsula de porcelana de 200 ml. 2. Evaporar casi a sequedad 3. Añadir 5-10 ml de agua y evaporar nuevamente 4. Repetir hasta realizar 5 evaporaciones (por lo menos) 5. Añadir aproximadamente 200 ml de agua recientemente hervida y titular con NaOH 0,1 N usando fenolftaleína como indicador. 3. Acidez volátil: Se determina por cálculo, sustrayendo del % de acidez total titulable el % de acidez no volátil (o fija). V. DETERMINACIÓN DE pH. Procedimiento: Una vez preparada la muestra de acuerdo al procedimiento requerido proceda a realizar la determinación del pH de la muestra. 75
  • 6. 1. Calentar y calibrar el medidor de pH (pHmetro) de acuerdo a las instrucciones del aparato. 2. Los electrodos deben mantenerse sumergidos en agua destilada y lavarse cuidadosamente, antes y después de usar, con agua destilada (secar el exceso sin frotar el electrodo). 3. Para la calibración usar soluciones buffer pH 7 y 4. 4. Agitar la muestra después de la lectura y repetirla hasta que dos lecturas coincidan cercanamente. B. Cálculos: Usando constante de disociación del ácido predominante de su muestra, calcule el pH teórico de la misma. Comparar el valor teórico con el obtenido experimentalmente. VI. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS (“BUFFERS”): De acuerdo a los fundamentos teóricos de preparación de soluciones amortiguadoras calcular las cantidades de reactivos que debe pesar o medir para preparar 100 ml de buffer de concentración y pH asignados con anterioridad por el profesor. Chequear en el pH metro junto con el profesor o el auxiliar docente, el pH experimental de la solución preparada por usted. NOTA: Entregar los cálculos antes de realizar la practica. Conservar copia para entregarla como guía en el laboratorio. 76