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  1. 1. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |1PRACTICA 13El virus de la Inmunodeficiencia humana – VIHDr. David Larreátegui R.Docente de Cátedra – Médico Especialista en Medicina Interna.13.1. INTRODUCCION E HISTORIA13.2. ORIGEN Y ESTRUCTURA DEL VIH13.3. HISTORIA NATURAL DEL VIH13.4. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LA INFECCION POR VIH-113.4.1. PRUEBAS SEROLÓGICAS13.4.2. PRUEBAS DE SCREENING13.4.3. PRUEBAS DE DETECCIÓN RAPIDA.13.4.4. PRUEBAS DE CONFIRMACION13.6. ALGORRITMO DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR VIH13.7. INMUNOCROMATOGRAFIA – PRUEBA RAPIDA – PRACTICA.13.8. MICROELISA – PRUEBA DE SCREENING – PRACTICA.}13.9. AUTOEVALUACION E INVESTIGACIONINTRODUCCION E HISTORIAEl VIH es el agente etiológico causal del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Estaenfermedad se describió por primera vez en 1981, en varones jóvenes homosexuales quepadecían Sarcoma de Kaposi y/o neumonía por Pneumociostis Jiroveci. El estudio de estospacientes reveló que presentaban un cuadro inmunológico caracterizado por la disminución delinfocitos TCD4+. Los estudios epidemiológicos posteriores implicaron en la enfermedad a unagente infeccioso transmisible por sangre, por productos sanguíneos, contactos sexuales, uso dedrogas de vía endovenosa y verticalmente de madre a hijos. La búsqueda de este agenteinfeccioso tuvo sus frutos en 1983 cuando Barre-Sinousi, Chairman y Luc Montagnier del InstitutoPasteur de París aislaron un retrovirus a partir de nódulos linfáticos de un paciente conlinfadenopatías, este retrovirus fue denominado virus de la Linfadenopatía (VLA) y era capaz dereplicarse y causar efectos citopáticos en células mononucleares en sangre periférica. 1 2 3Pocos meses después Gallo y cols, y Levy y cols , aislaron un retrovirus a partir de muestras conSíndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) al que denominaron VLTH-III, finalmente sedecidió denominar al virus como virus de la Inmunodeficiencia humana – VIH, 2 años más tardefue aislado un segundo tipo de virus VIH-2 que producía SIDA en paciente provenientes de ÁfricaOccidental 4. Actualmente se denomina VIH-1 a los virus genéticamente relacionados por los virusque cursan en Asia, América, Europa y ciertas partes de África. Mientras que se denomina VIH-2 alconjunto de virus relacionado con el virus descrito que es prevalente en África Central yOccidente. Desde su identificación hasta la actualidad el VIH se ha convertido posiblemente en
  2. 2. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |2uno de los agentes infecciosos que más rápidamente se ha estudiado y que más trabajo hagenerado en la historia de la Biomedicina y la Microbiología.En pocos años la infección por el VIH-1 se convirtió en una Pandemia y en la causa más frecuentede mortalidad al menos en el segmento etario entre los 20-40 años 7. Ya en 1984 cuando pudodisponerse de tests diagnósticos para detectar la presencia de infecciones (Detección deanticuerpos), se estableció claramente que el VIH-1 era el agente causante del SIDA (7) y que setrataba de una enfermedad de evolución lenta (Promedio de 7 a 10 años), antes de desembocaren una inmunodeficiencia severa y global (Aunque de predominio de la inmunidad celular), que secomplicaba con infecciones o neoplasias “Oportunistas”, que solía conducir a un desenlace 9uniformemente fatal en menos de 1 a 2 años a partir de aquel momento. .También desde el primer momento llamó la atención la paradoja de que una inmunodeficienciaprogresiva coexistía con una hiperactivación crónica del sistema inmunitario y que ahora sabemos 10,11.que es el mejor marcador para predecir la progresión de la enfermedadORIGEN Y ESTRUCTURA DEL VIHLos retrovirus constituyen una familia compleja de un virus ARN en la cual se distinguen 7 génerosuno de estos géneros es el de los Lentivirus en el que se encuadraría el VIH y donde su principalcaracterística es la infección crónica a una gran variedad de especies de mamíferos entre los quese encuentran los primates, ungulados y felinos. A los lentivirus procedentes de primates No-Humanos se les ha dado un nombre genérico de Virus de la Inmunodeficiencia del Simio VIS,debido a las similitudes genéticas y estructurales que estos comparten con los de laInmunodeficiencia Humana, los VIS presentan una gran diversidad y hasta la fecha se han podidoaislar en cerca de 40 especies distintas se han establecido depende de las especies y sub-especiesde los tipos de primates a los cuales infectaban.El VIH se caracteriza también por presentar una elevada diversidad genética esta diversidad quereflejada en los análisis filogénicos de la secuencia nucleotídicas que se han realizado connumerosos virus aislados de diferentes procedencias geográficas. Estos análisis han llevado aclasificar al VIH en cuatro grandes grupos (M,N,O,P) y al VIH-2 en 8 (A,B,C,D,E,F,G)Las diferencias entre los 2 virus son mayor o igual al 40% 5. Dentro de cada uno de ellos hay variosgrupos con diferencias de mayor o igual al 30%. Los cuatro grupos del VIH-1 se denominanM,N,O,P 5, y dentro del M responsable de la mayoría de infecciones se distinguen subtipos yformas recombinantes con diferencias entre mayor y menor grado entre el 15 y 20 % de países delsub-tipo B este es el serotipo inmunitario mayormente patógeno a nivel global y mundial. Seguidopor el serotipo C que es el más fácilmente transmisible por las vías sexuales. 6.El virión del virus de la Inmunodeficiencia humana es aproximadamente esférico y mide entre 80 y120 nm de diámetro, está compuesto por 2 copias de ARN de cadena positiva única con untamaño de 749 pares de bases y que codifican para los genes del virus. Las cadenas de ARN estánrodeadas por una cápside cónica compuesta por 1.200 a 2.500 copias de la proteína viral p24 13.La cadena única de ARN se encuentra fuertemente asociada a las proteínas de la nucleocápside p6y p7 y a las enzimas necesarias para el desarrollo del Virion: Transcripatasa Reversa, Proteasa,Nucleasa e Integrasa. La nucleocápside se asocia con el ARN genómico protegiéndolo de ladigestión de las Nucleasas. La cápside está rodeada por una matriz compuesta de una asociaciónde la proteína viral p17 que garantiza la integridad de la partícula viral. La cápsida está rodeada
  3. 3. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |3por una envoltura que está formada por una Bicapa-Lipídica con origen de la célula huésped, y seproduce por la gemación y exocitosis de la cápside viral. Las proteínas de la envoltura viral seorganizan en espículas que son estructuras formadas por 3 glicoproteínas de superficie gp-120 y 3glicoproteínas transmembrana (gp-41) que sujetan la estructura al virus, se estima que el número 12,14,15de espículas por virión es de aproximadamente . Estas estimaciones se han vistoconfirmadas por estudios posteriores de crio-microscopía 16. La representación esquemática de lapartícula se muestra en la Figura 1. Fig-1 Estructura del VIH (Tomado de Motangier y cols – Instituto Pasteur).Hasta el 2006, la información estructural sobre la espícula y las características genéticas eranlimitada y provenía en gran parte de análisis de estudios cristalográficos sin embargoposteriormente se pudo aclarar esta temática. Demostrando que el ARN genómico se cpompne de7 elementos estructurales y nueve genes que codifican para 19 proteínas en total. Tres de estosgenes (Gag, Env, Pol) codifican las principales proteínas estructurales que se encuentran en todoslos retrovirus, mientras los 6 restantes genes no estructurales codifican las proteínas reguladorasde los procesos metabólicos del virus. Estos son genes únicos del VIH que controlan la capacidadpara infectar las células, producir nuevas copias de virus o inducir patogénesis.HISTORIA NATURAL DEL VIHLa infección por el VIH es un ejemplo único de infección viral persistente que causa replicaciónviral y enfermedades crónicas en el 100% de los casos. La persistencia a nivel molecular se explicapor diferentes mecanismos y la capacidad del virus para evadir de forma continua el sistema 12inmunológico es también multifactorial . El paradigma clásico es una primoinfección o infecciónaguda sintomática o asintomática seguido por un largo período promedio entre 7 a 10 añosclínicamente silente o solo con complicaciones menores que a menudo no se identificanrelacionadas con el VIH. Hasta que aparecen algunas de las infecciones o neoplasias“Oportunistas” aceptadas como definitorias de SIDA.Durante la infección aguda, la concentración del virus infeccioso circulante es muy elevada paraque en pocas semanas o meses, alcanzar una situación de equilibrio que suele oscilar entre las10.000 y 200.000 copias de ARN del VIH-1/ml de plasma. (Carga Viral). La cifra de linfocitos TCD4+circulantes que normalmente oscila entre 600 y 1200 células/ul suele experimentar un descensomoderado durante la infección aguda y luego más paulatino (promedio de 50 células/año). (Fig 2).
  4. 4. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |4 Fig-2 HISTORIA NATURAL DEL VIH (Tomado de Jurema Oliveira – Instituto Infectológico de Brasil).Los eventos Oportunistas suelen aparecer con excepciones cuando la cifra de linfocitos cae pordebajo de 200 células/ul y sobre todo cuando cae por debajo de 100celulas/ul. El nuevoparadigma podría ser considerar a la infección por el VIH-1 como la historia de 2 infecciones en unmismo proceso, la primera como Infección aguda, que condiciona una depleción muy rápida,masiva y difícilmente reversible en los linfocitos TCD4+ memoria/efectores de las mucosas engeneral y de la mucosa intestinal en particular (GALT). Principalmente por un mecanismo citolíticodirecto del virus. Y la segunda o infección crónica es la historia de un sistema inmunitario “Herido”que a pesar de conservar unas reservas prácticamente intactas va “muriendo lentamente” noexclusivamente por las heridas de las infecciones aguda, ni en gran medida, por mecanismosdirectamente relacionados con la infección viral 14. Haciendo que muchos gérmenes patógenoscontrolados inicialmente por el sistema inmune se activen y causen enfermedad (Germenpatógeno), uno de estos ejemplos clásicos es la tuberculosis y la toxoplasmosis.DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LA INFECCION POR VIH-1El diagnóstico de la infección por el VIH solo puede establecerse de modo definitivo por medios delaboratorio ya que las manifestaciones clínicas son inespecíficas en cualquier estadío de laenfermedad. Las pruebas de laboratorio utilizadas para reconocer las infecciones por retrovirushumanos pueden clasificarse en directas e indirectas (Figura 3). Según persigan demostrar lapresencia del virus o de sus constituyentes (Proteínas y Ácidos nucleicos) o bien la respuestainmunitaria (Humoral o celular) por parte del huésped.FIGURA 3 Clasificación de los métodos de laboratorio para diagnóstico de infección por VIH.Métodos Directos Cultivo Viral Detección de Ácidos Nucleicos: PCR, bDNA, NASBA. Antigenemia (p24).Métodos IndirectosDetección de anticuerpos específicos. Pruebas Rápidas: Oral test. Pruebas de Screening: ELISA, Aglutinación, Inmunocromatografía. Pruebas de Confirmación y Suplementarias: WB,IFI. Investigación de inmunidad celular específica. Notas: bDNA (branched-DNA), ELISA (Enzimoinmunoanálisis), IFI (Inmunofluorescencia indirecta), WB (Western Blood), NASBA (Amplificación en la transcripción de ácidos nucleicos), PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa).
  5. 5. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |5PRUEBAS SEROLÓGICASLa investigación de anticuerpos en suero es la metodología más frecuentemente utilizada para laidentificación de los individuos de VIH. La presencia de anticuerpos anti-VIH lejos de reflejar unaexposición erradicación inmune del virus en el pasado, indica más bien el estado de portadoractual.Existen diferentes tipos de pruebas para la detección de anticuerpos frente al VIH. El diseño dealgunas de ellas permite realizar gran número de análisis a la vez son las denominadas pruebas deScreening. En cambio, otras son de realización más compleja aunque proporcionan mayorespecificidad se utilizan para la confirmación de la reactividad en una prueba inicial de Screening.La seropositividad define mediante la demostración de anticuerpos frente a las proteínas viralescon reactividad repetida en las pruebas de Screening y además, con algunas de las pruebas deconfirmación 1.PRUEBAS DE SCREENINGEl enzimoinmunoanálisis (ELISA) es el método más utilizado como prueba de Screening losantígenos provienen del lisado viral de un cultivo (ELISA de primera generación) o biencorresponden a proteínas recombinadas (ELISA de segunda generación), que reproducen epitoposde virus, los EIA de segunda generación son más sensibles y , sobre todo, más específicos que losde segunda generación. Además, las pruebas de ELISA pueden estar diseñadas de modo indirectoo competitivo según el mecanismo por el que se reconoce la precisión de anticuerpos en lamuestra problema. En general los ELISA indirectos son más sensibles y los ELISA competitivos sonmás específicos.En los últimos años se han desarrollado nuevas técnicas de ELISA que son más sensibles yespecíficas que las ELISA iniciales. Utilizan como antígenos especiales, proteínas recombinantes opéptidos sintéticos de 10 a 40 aminoácidos específicos del VIH-1 (en ocasiones, en asociación conotros del VIH-2). Las dos técnicas son ELISA de tipo sándwich (Tercera generación) y ELISA decaptura (Cuarta generación). Estas pueden detectar todas las subclases de anticuerpos y no solo laIgG. Esto explica su mayor sensibilidad para reconocer la primoinfección por VIH-1, cuando la IgMes el primer marcador de la seroconversión, así como para el diagnóstico de la infecciónpediátrica, que cursa con IgM e IgA solo si el niño está infectado. Además del ELISA de captura esun método de gran especificidad. Permitiendo la detección simultánea de antígeno y anticuerpos,con una media de 8 días antes que los de tercera generación.En la actualidad existen más de 130 pruebas comerciales para la detección de anticuerpos frenteal VIH-1 en suero. En general las pruebas aprobadas para los bancos de sangre gozan de excelentesensibilidad superior al 99,5%.PRUEBAS DE DETECCIÓN RAPIDA.Existen diversos métodos para la detección rápida de anticuerpos frente al VIH. Las pruebas deinmunoadherencia (dot-blot) son más frecuentes aunque también se han desarrollado ensayos deaglutinación. 2. En general todas ellas gozan de buena sensibilidad, especificidad yfundamentalmente acortan ventajas en aquellos lugares en donde los test diagnósticos habitualesson de difícil incorporación. La gran mayoría tienen la capacidad de detectar las distintas variantesde VIH-1 y VIH-2, por lo que su uso en África y Sud-América cada vez es más extendido,especialmente para diagnósticos urgentes.La FDA aprobó hace pocos años la utilización de ensayos OralQuick con saliva para su distribuciónde venta libre en farmacias, este ensayo aporta la ventaja de que únicamente requiera la muestra
  6. 6. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |6 de la saliva para su uso, sin embargo no se pude olvidar que un diagnóstico positivo tiene que serconfirmado por ELISAs especializados.PRUEBAS DE CONFIRMACIONEl Western-Blood (WB) es el método más empleado para la confirmación de resultados obtenidoscon las pruebas de Screening. Permite discriminar frente a qué antígenos virales se dirigen losanticuerpos presentes en la muestra problema, Otras metodologías de confirmación como laInmunofluorescencia indirecta (IFI) presenta gran complejidad y gran subjetividad, lo que dificultasu utilización sistemática como pruebas de confirmación 1.En 1990 la OMS redacta la nomenclatura vigente de las bandas de proteínas del western blood yestableció los siguientes criterios para su interpretación: la positividad en el WB para VIH-1requiere la presencia de al menos 2 bandas de la envoltura; la negatividad resulta de la ausenciade bandas y los restantes patrones se consideran indeterminados. (Fig. 5).FIGURA 5. Causas de Wester Blood Indeterminado para VIH-1. Infección por VIH-2 Seroconversión para el VIH-1. Pacientes en estadíos muy avanzados de la enfermedad. Niños de madres seropositivas. Reactividad inespecífica.ALGORRITMOS DIAGNÓSTICOS PROPUESTOS PARA LA INFECCIÓN POR VIHUna prueba de ELISA reactiva en una ocasión para anticuerpos frente al VIH-1 debe ser repetida enla misma muestra antes de ser valorada como tal. Todas las muestras de ELISA repetidamentereactivas deben ser confirmadas con WB. Diversos estudios han demostrado que la sensibilidad yla especificidad del ELISA comercialmente son superiores al 98%, si bien, el número de falsospositivos en un grupo de bajo riesgo de infección (como los donantes) quizá no sea insignificante.Estos falsos positivos se han descrito en especial en individuos con enfermedades autoinmunes yen pacientes con historias de múltiples gestaciones o transfusiones, relacionados con la existenciade anticuerpos frente a algunos antígenos HLA de clase II. La utilización de pruebas de ELISAdiseñados con antígenos recombinantes o péptidos sintéticos ha reducido de manera considerablelas reacciones cruzadas y prácticamente en la actualidad una prueba de ELISA positivo esdiagnóstico de infección por VIH.En la Figura 6. Se recoge el algoritmo diagnóstico recomendado para el diagnóstico de la infecciónpor el VIH, es necesario tener en cuenta el tipo de población estudiada, ya sea donantes de sangreo población de bajo recurso ya que se han descrito falsos positivos en el WB. Aunque dichametodología es la más generalizada para la confirmación de la reactividad inicial en una prueba deScreening puede considerarse otro tipo de estrategias diagnósticas como la confirmaciónmediante LIA, en casos con resultados indeterminados.En la Figura 7. El diagnóstico de la infección aguda por el VIH ha adquirido una especial relevanciasegún se ha ido avanzando en el conocimiento de la enfermedad. El conocer por un lado lascaracterísticas virológicas de las cepas (fundamentalmente la presencia de mutaciones deresistencia y el subtipo viral) que son responsables de las nuevas infecciones y por otro lado lasventajas que representa la instauración de terapia antiretroviral en este período ha hecho que se
  7. 7. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |7adopten nuevas estrategias diferentes a fin de diagnosticar estas infecciones. Estas incluyenademás de la realización de viremia plasmática para los casos previos a la seroconversión lautilización de test de ELISA especiales y estándar para el diagnóstico de la enfermedad ante unaccidente laboral o un contacto sexual de riesgo. FIGURA 7. ALGORITMO DIAGNOSTICO DEL VIH EN LABORATORIO.DESARROLLO DE LA PRÁCTICAPRUEBAS DE SCREENINGELISA INDIRECTO.Consta de las siguientes etapas: 1. Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio. 2. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados. 3. Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. 4. Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antígenos. 5. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. 6. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea. 7. Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.ELISA es una prueba de alta sensibilidad (99,5%), por lo que ante la mínima presencia deanticuerpos del virus de VIH, e incluso de elementos similares, arrojará un resultado positivo. Estamisma sensibilidad puede dar como resultado "falsos positivos" ante otros virus similares. Si laprueba de ELISA sale negativa, no se hacen más pruebas, especificidad (99.2%). Valor predictivopositivo (98.3%) y valor predictivo negativo (99.4%).
  8. 8. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |8 AUTOEVALUACION E INVESTIGACION 1. Que prueba realizaría para identificar a pacientes con VIH en una población amplia de riesgo? Inmunocromatogrfia HIV 1 y HIV2. Micro Elisa VIH 1 y 2 Western Blood. Carga Viral Microelisa Rápido VIH1 y VIH2. 2. Enumere los 3 genes estructurales más importantes del VIH. 3. Enumere al menos 10 enfermedades, comorbilidades o signos clinicos que frecuentemente se encuentran asociadas a los pacientes portadores de VIH antes de la fase de SIDA? 4. Qué criterios debe reunir un paciente para iniciar TARV (Terapia Anti-retro Viral). 5. Enumere al menos 10 enfermedades que frecuentemente se encuentran asociadas a los pacientes con SIDA? PROCEDIMIENTO PARA HIV1/2 ELISA Etapa 1 Añadir al MIC, 60ul del control WCON: Solución de trabajo de conjugado en las celdas a usar Añadir 30ul del control NEGATIVO-NC, POSITIVO- PC y 30ul de muestra en cada celda de reacción, excepto en el blanco Mezclar cuidadosamente(solución cambia de color),cubrir MIC con cintas adhesivas. Incubar el plato a 37+/- 1ºC, por 90’ Lavar el plato Ciclo de 8 veces. Solución Wash 350ul Etapa 2 Añadir 50ul de Sustrato Añadir 50ul de Sustrato de Solución A en cada de Solución B en cada celdilla celdilla
  9. 9. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH Página |9 Cubrir MIC con cintas adhesivas. Incubar el plato por 30 minutos de 18 a 25ºC en la obscuridad Añadir 100ul de STOP (2N H2SO4) en cada celdilla. Mezclar cuidadosamente Determinar la Absorbancia a 450nm, y usando una longitud de onda de referencia de 620nm.BIBLIOGRAFIA1. Global report 2010. Geneva: UNAIDS, 2010.(http://www.unaids.org/globalreport/documents/20101123_GlobalReport_full_en.pdf.)2. Branson BM. State of the art for diagnosis of HIV infection. Clin Infect Dis 2007;45:Suppl 4:S221.3. Eshleman SH, Khaki L, Laeyendecker O, et al. Detection of individuals with acute HIV-1 infection using theARCHITECT HIV Ag/Ab Combo assay. J Acquir Immune Defic Syndr2009;52:121-124.4. Hladik F, McElrath MJ. Setting the stage: host invasion by HIV. Nat Rev Immunol2008;8:447-457.5. Fiebig EW, Wright DJ, Rawal BD, et al. Dynamics of HIV viremia and antibody seroconversion in plasmadonors: implications for diagnosis and staging of primary HIV infection. AIDS 2003;17:1871-1879.6. Weiss HA, Dickson KE, Agot K, Hankins CA. Male circumcision for HIV prevention: current research andprogrammatic issues. AIDS 2010;24:Suppl 4:S61-S697. Emau P, Jiang Y, Agy MB, Tian B, Bekele G, Tsai CC. Post-exposure prophylaxis for SIV revisited: animalmodel for HIV prevention. AIDS Res Ther 2006;3:29-29.8. Keele BF, Giorgi EE, Salazar-Gonzalez JF, et al. Identification and characterization of transmitted and earlyfounder virus envelopes in primary HIV-1 infection.
  10. 10. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH P á g i n a | 109. Lee HY, Giorgi EE, Keele BF, et al. Modeling sequence evolution in acute HIV-1 infection. J TheorBiol 2009;261:341-360.10. Palmer S, Wiegand AP, Maldarelli F, et al. New real-time reverse transcriptase-initiated PCR assay withsingle-copy sensitivity for human immunodeficiency virus type 1 RNA in plasma. J Clin Microbiol 2003;41.11. Damond F, Avettand-Fenoel V, Collin G, et al. Evaluation of an upgraded version of the Roche CobasAmpliPrep/Cobas TaqMan HIV-1 test for HIV-1 load quantification. J Clin Microbiol 2010;48:1413-1416.12. Sickinger E, Jonas G, Yem AW, et al. Performance evaluation of the new fully automated humanimmunodeficiency virus antigen-antibody combination assay designed for bloodscreening. Transfusion 2008;48:584-593.13. Haase AT. Targeting early infection to prevent HIV-1 mucosal transmission. Nature2010;464:217-223.14. Hladik F, Sakchalathorn P, Ballweber L, et al. Initial events in establishing vaginal entry and infection byhuman immunodeficiency virus type-1. Immunity 2007;26:257-270.15. Boggiano C, Littman DR. HIVs vagina travelogue. Immunity 2007;26:145-147.16. Zhang Z, Schuler T, Zupancic M, et al. Sexual transmission and propagation of SIV and HIV in resting andactivated CD4+ T cells. Science 1999;286:1353-1357[Erratum, Science 1999;286:2273.]17. Zhang ZQ, Wietgrefe SW, Li Q, et al. Roles of substrate availability and infection of resting and activatedCD4+ T cells in transmission and acute simian immunodeficiency virus infection. Proc Natl Acad Sci.18. Li Q, Duan L, Estes JD, et al. Peak SIV replication in resting memory CD4+ T cells depletes gut laminapropria CD4+ T cells. Nature 2005;434:1148-1152.
  11. 11. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAPráctica 13 – VIH P á g i n a | 11 Universidad Central del Ecuador Facultad de Ciencias Médicas Escuela de medicina PRE-REQUISITOS DE MICROBIOLOGIANOMBRE: DOCENTE:FECHA: AYUDANTE:PARALELO: GRUPO:PREGUNTA 1.PREGUNTA 2PREGUNTA 3PREGUNTA 4

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