Este documento describe los pasos para identificar bacterias anaerobias. Se divide en 3 fases: 1) morfología y tinción de Gram, 2) pruebas de sensibilidad y bioquímicas para identificar el género, y 3) métodos adicionales para identificar la especie. Explica pruebas como aerotolerancia, catalasa, indol, nitratos, urea, lecitinasa y lipasa para diferenciar entre géneros bacterianos.

2. INTRODUCCION
Los anaerobios se presentan cultivos mixtos
tanto microaerófilas o facultativas.
La identificación implica una serie de pasos o fases que
que plantea las pruebas siguientes

3. FASES DE LA IDENTIFICACION
Se diferencias tres faces de identificación de las bacterias anaerobias.
Fase 1 Se relaciona la morfología
,aerotolerancia y la tinción (tinción de
Gram)
Fase 2 Identificación del genero.
• Pruebas de sensibilidad: esta se
realiza con discos de papel filtro
impregnados con antimicrobianos; se
realiza la lectura en 24 a 48 horas.
• Pruebas bioquímicas: se realizan de
acuerdo al tipo de microorganismo
Fase 3 Identificación definitiva, que incluye
genero y la especie.
Requiere pruebas de la fase 2
Y una serie de
métodos adicionales.

4. TINCION GRAM
Se deben observar características morfológicas y de Tinción que son
sugestivos de las bacterias anaerobias:
Bacilos Gram negativos decolorados o mal teñidos.
Es importante observar :
• La forma
• El tamaño
• La disposición de las bacterias
• Número relativo de microorganismos presentes
• Presencia de esporos
• Rasgos morfológicos como ramificación, filamentos, cuerpos esféricos,
extremos en punta y formas granulares.

5. PRUEBA DE AEROTOLERANCIA
Esta se realiza en colonias que hayan crecido en una ambiente anaeróbico.
Se transfiere cada colonia de la placa de aislamiento anaerobio a una placa de
agar sangre aerobio, se incuba de 12 a 18 horas. En una atmosfera de CO2 del 5 al
10% en aerobiosis.
Dependiendo del crecimiento del microorganismo en aerobiosis nos indica si es
anaerobio estricto o anaerobio facultativo
1 AEROBIO ESTRICTO
2 ANAEROBIO FALCULTATIVO
3 ANAEROBIO AEROTOLERANTE
4 ANAEROBIO ESTRICTO

6. PRUEBAS BIOQUIMICAS
• CATALASA
• INDOL
• NITRATOS
• UREA
• LECITINASA
• LIPASA

7. CATALASA PRUEBA DEL INDOL
La catalasa, va a degradar el Pone de manifiesto la presencia de la encima
peroxido de oxigeno que se Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta
produce como consecuencia de la presente degradará el triptofano y liberará al
acumulación de oxigeno. medio Indol, para revelar su presencia
el resultado será positivo si se usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se
observa la producción de formará un anillo rojo en la superficie, sino
pequeñas burbujas. este será amarillo. Para esto sembramos en
caldo con triptofano.

8. NITRATOS A NITRITOS UREA
POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO
Algunos microorganismos utilizan el nitrato en Pone de manifiesto la actividad de la
una vía alternativa como fuente de energía, enzima ureasa, para degradar la urea en
reduciéndolo a nitrito o a nitrógeno libre. Esta dos moléculas de amoniaco. El medio
propiedad es una característica importante en lleva como indicador Rojo fenol, que se
la diferenciación de muchos grupos torna amarillo cuando es negativo y rosa
bacterianos. cuando es positivo.
Medio de cultivo
Se utiliza caldo nutritivo adicionado de nitrato
potásico.

9. LECITINASA LIPASA
Se basa en la capacidad que tienen ciertas
bacterias de descomponer las grasas en ácidos
grasos y glicerol, por acción de la enzima
lipasa.
Se utiliza el agar yema de huevo,
Interpretación de los resultados
Una reacción lipasa positiva está indicada por
un brillo oleoso,
La reacción puede ser retardada
La presencia de lipasa se demuestra por una
coloración azul alrededor de las colonias.
La prueba de la lecitinasa pone de manifiesto
la producción de dicha enzima por
determinados microorganismos, capaces de
actuar sobre la lecitina, sustancia orgánica
nitrogenada y fosfatada, contenida
principalmente en la yema de huevo.