microbiologia

1. FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QU INFLUENCIAS EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO
OBJETIVO:
Que el alumno aprenda a determinar cómo influyen algunos factores físicos y químicos del
medio ambiente en la velocidad de crecimiento de los microorganismos.
FUNDAMENTO
La identicación de microorganismos tanto cualitativa como cuantitativa en la
industria alimentaria lo observamos en cada momento de su producción.
MARCO TEORICO
Los microorganismos, como cualquier otro grupo de organismo en la naturaleza, resultan
enormemente influenciados por los agentes físicos, químicos y biológicos del medio
ambiente. La respuesta a condiciones favorables es el crecimiento y a condiciones adversas
permite el control de los microorganismos perjudiciales.
ESTUDIO DE ALGUNOS DE AGENTES FISICOS Y QUIMICOS
La temperatura
a) Determinación de la temperatura optima de crecimiento
Sembrar en múltiples tubos un pequeño inoculo de un cultivo joven. Incubar por separado en
estufas reguladas a temperaturas perfectamente controladas. Por ejemplo: 5ºC, 15ºC, 35ºC
,45ºC y 60ºC.
Leer la densidad del crecimiento y hacer una comparación relativa, particularmente en tiempo
suficientemente corto. Considerar como temperatura optima de crecimiento aquella que da la
mayor masa microbiana en el menor tiempo.
b) Determinación de las temperaturas mínimas y máxima de crecimiento:
Con el mismo procedimiento de siembra, incubación y lectura que el punto anterior,
considerar como la temperatura mínima de crecimiento aquella en la cua aparece un pequeño
vestigio de crecimiento en un periodo suficientemente largo y se nota crecimiento a la
temperatura inmediatamente inferior, y como la temperatura máxima de crecimiento aquella
que aparece un pequeño vestigio de crecimiento, pero a una temperatura inmediatamente
superior ya no se aprecia crecimiento.
C)Ubicación de un microorganismo en un grupo de temperatura
Considérense microorganismos Mesofilos si su temperatura optima de crecimiento está entre
los 20ºC y 45ºC.Termofilos, si su temperatura optima esta a una temperatura superior a los
45ºC y Psicofilos, si son capaces de formar colonias visibles a 0ºC en 7 días.

2. 2. El pH
De una manera semejante a los expresado en el punto en el punto anterior, para la
temperatura se pueden hacer determinaciones para determinar los puntos cardinales de pH
de un microorganismo cualquiera y asi conocer su pH optimo su pH minimo y su pH máximo.
La determinación mas simples se hace siguiendo el procedimiento siguiente:
Sembrar en multiples tubos de medio de cultivo, ajustados a un pH conocido, pequeños
inoculos de una cepa joven.(Los pHs que se pueden probar son : 4,0; 5,0 ; 6,0 ;7,0;8,0 y 9,0)
Incubar a la temperatura optima de crecimiento, por ejemplo , a 35ºC/24-48h.
Leer la densidad de crecimiento (turbidez) y hacer una comparación relativa, particularmente
en tiempos relativamente cortos.
Considerar como el pH optimo aquel que da mayor crecimiento en el tiempo mas corto,pH
minimo aquel que muestra un ligero crecimiento en un tiempo suficientemente largo, pero
que a un pH inmediatamente inferiror no muestra crecimiento en un tiempo suficientemente
largo , pero que un pH máximo aquel que presenta un ligero crecimiento en un tiempo
suficientemente largo, pero no muestra crecimiento a un pH inmediatamente superior.
3.-Las necesidades de oxigeno
Algunos microorganismos, llamados aerobios estrictos, necesitan para su crecimiento la
disponibilidad del oxigeno atmosférico en su medio ambiente,otros, los llamados anaerobios
estrictos, son capaces de crecer en presencia de oxigeno atmosférico, solamente crecen en un
ambiente reducido, en donde ciertos sustratos inorgánicos hacen las veces de últimos
aceptores de hidrogeno, en cambio, un tercer grupo de organismos, llamados anaerobios
facultativos, crecen tanto en un ambiente aerobio como en un anaerobio, sea en presencia o
en ausenciade oxigeno atmosférico, y un ultimo grupo de microorganismos, los
microaerofilicos, solo crecen en un ambiente en donde la tensión de oxigenosea bien reducida.
Para determinar las necesidades de oxigeno de un microorganismo se hace la prueba del tipo
respiratorio, la cual se hace de la siguiente manera:
Regenerar los tubos que tienen una cantidad suficiente de medio favorable para anaerobios,
como el BREWER ANAEROBIC AGAR, que están distribuidos hasta una atlura superior a los 10
cm.
Temperar el medio hasta cerca de 45ºC
Sembrar por picadura profunda un inoculo de cepa joven.
Solidificar en posición vertical con ayuda de un baño de agua fría.
Incubar a la temperatura optima de crecimiento, por ejemplo a 35ºC/24-48h.
Leer la posición de la masa microbiana

3. Considerar como microorganismos aerobios estrictos los que crecen solo en la superficie de los
tubos, pero no en la superficie.Aerobios estrictos los que crecen en el fondo de los tubos, pero
no en la superficie.Anaerobios facultativos los que crecen tanto en el fondo como en la
superficie del tubo; y microaerofilicos, los que crecen mejor a una altura inferior al borde del
medio de cultivo, como se representa en la figura siguiente:
4.- Resistencia al calentamiento
Las temperaturas superiores a la temperatura máxima de crecimiento son letales para los
microorganismos.Mientras mas grande sea la diferencia de temperaturas mayor será el efecto
letal y mientras mayor sea el tiempo de permanencia a las altas temperatura temperaturas
también el efecto letal será mayor.La resistencia de los microorganismos al calentamiento
depende de la especie y del numero de células o agrupaciones y de las condiciones de cultivo
como temperatura de crecimiento, medio de cultivo, pH , entre otros.
La manera de probar la resistencia a las altas temperaturas de los microorganismos en el
laboratorio es tratando al calor los cultivos microbianos a diferentes temperaturas por un
tiempo constate y luego incuband los tubos para que los microorganismos sobrevivientes se
multipliquen.
Considerar al microorganismo como resistente a la temperatura de calentamiento si aparece
turbidez en el tubo y como no resistente si no aparece turbidez.
5.-Determinacion de la acción germicida de algunos agentes químicos.
La acción germicida de algunos compuestos químicos se determinan poniendo en contacto el
microorganismo con una solución del agente químico y después de un periodo de tiempo se
controla la viabilidad del microorganismom, sembrándolo en un medio de cultivo adecuado.
6.- Determinacion de la acción de los Antibioticos
El antibiograma o prueba de sensibilidad de un microorganismos, frente a varios
antibióticos.Colar varios diferentes e incubar a la temperatura mas favorable para el
crecimiento microbiano.La falta de un crecimientoen zona alrededor del disco significa que el
antibiótico tiene un efecto letal o inhibidior hacia el microorganismo.

4. PARTE EXPERIMENTAL
Materiales
- Tubos de ensayo
- Asa de klolle
- pipeta
- Placa petri
EQUIPO
- Estufa
INSUMO
- Discos
- Cloruro de sodio
- Glucosa
- Solución de fenol al 5%
Por temperatura
- Sembrar en múltiples tubos pequeños inóculo de un cultivo joven
- Incubar por separado en estufas reguladas a temperaturas
perfectamente controladas . 5C°,15°C,35C°,45C° y 60C°.
RESULTADOS
La temperatura optima la del tubo del 15ªC, es la que se da mayor
masa microbiana en menos tiempo que las demás.
El orden para la determinación de las temperaturas máximas y minimas
es la siguiente es 60ºC, 5ºC, 35ºC, 15ºc .
AGAR NUTRITIVO
5C° 15C
°
35C° 36C
°
45C° 60C°
C°

5. Por pH
- Sembrar en múltiples tubos de medio de cultivo ,ajustados a un pH
conocido ,pequeños inoculos de una cepa joven
- Incubar a una temperatura optima de crecimiento 35°c/24-48h
RESULTADOS
El ph optimo de crecimiento fue de 6 es de mayor crecimiento en
menor tiempo .
Por resistencia al calentamiento
- Sembrar en caldo nutritivo alícuotas de 0.1ml de un cultivo joven
,en 6 tubos con 5ml de medio de cultivo.
- Calentar en baños de agua, regulados a temperaturas
controladas, cada uno de los tubos por un periodo de 10 min.
- Incubar a 35C°/ 24-48h.
50C° 60C° 70C° 80C° 90C° 100C°
4 5 6 7 8 9
pH Minimo pH Optimo pH Maximo
4 6 7
pH
Adicion de 1ml cultivo
5ml de medio de cultivo

6. RESULTADOS:
El orden fue el siguiente 100 – 70 – 90 – 80 – 60 – 50 .
X NECESIDAD DE OXIGENO
- Regenerar los tubos que tienen una cantidad suficiente de medio
favorable para anaeróbicos , como el BREWER ANAEROBIC AGAR ,que
están distribuidos hasta una altura superior a los 10cm.
- Temperar el medio hasta cerca de 45C°
- Sembrar por picadura profunda un inoculo de cepa joven.
- Solidificar en posición vertical con ayudad de un baño de agua fría
- Incubar a la temperatura optima de crecimiento , 35C°/24-48h
Resultados:
Influencia a altas temperatura
Determinacion de halófilismo
Sembrar microorganismo en placas con medio de cultivo favorable,preparado
con diferentes de cloruro de sodio : 0%,10%,15%,20%
Incubar a temperaturas optimas 35C°/3 , 5 , 8 , 15 DIAS

7. DETERMINACION DE LA OSMOFILIA
Sembrar microorganismo en placas con medio de cultivo favorable,preparado
con diferentes de cloruro de sodio : 0%,10%,30%,50% ,60%
Incubar a temperaturas optimas 35C°/3 , 5 , 8 , 15 DIAS
RESULTADOS
X AGENTES QUIMICOS
Colocar 0.5ml de inoculo de un cultivo fresco en 5ml de solución de fenol al
0.5%.
Agitar y dejar actuar durante 1 min.
Tomar una asada de la mezcla y sembrar aun tubo con caldo nutritivo,
marcado convenientemente.
A los 2.5 minutos de realizada la mezcla; repicar nuevamente a otro tubo con
caldo nutritivo , marcado convenientemente
A los 5 minutos proceder igual que el paso anterior
A los 10min. Realizar una ultima siembra semejante
Incubar todos los tubos a la temperatura optima de crecimiento por ejemplo a
35C°/24 a 48h

8. Resultados:
X ACCION DE ANTIBIOTICOS
- Sembrar por extencion en superficie 0.1ml de inoculo de una cepa
joven , distribuyéndolo uniformemente
- Aplicar inmediatamente los discos con antibióticos a una distancia
superior a 1.5cm entre uno y otro .
- Incubar las placas a la temperatura optima de crecimiento a 35°C /24h
- Leer la zona de inhibición que rodea al disco, midiendo en milímetros el
diámetro del halo de inhibición.