Por medio de esta práctica aprendimos a utilizar los distintos medios de cultivo y sus diferentes nutrimentos y funciones ya que en algunos crecen determinadas bacterias impidiendo el crecimiento y desarrollo de otras, también utilizamos la incubadora para acelerar el crecimiento de bacterias deseadas las cuales las obtuvimos de heces fecales. Se llevaron a cabo anotaciones en cuadernos y bitácoras que fueron de la mano con la práctica conforme avanzábamos en ella. Por ultimo logramos cumplir el objetivo que fue detectar la morfología de colonias y bacterias al igual que aprender técnicas y métodos básicos para la preparación de medios de cultivo en los cuales se desarrollaron nuestras bacterias.

1. CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓ GICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS. N.128
Practica 2.Técnicas básicas para el cultivo de microorganismos: siembra
y estudio de bacterias
Sub-módulo 3. Ejecuta técnicas de identificación de Microorganismos con
base a las normas.
Integrantes. Barrón Arredondo Evelin, Batres Arias Viviana, Bernal Loera Alejandro, Cabral Román
Brandon Said, Cardona Adriana Fernanda, Cervantes de la Cruz Ángel, Chávez Castorena Edna
Paola, Chávez Ortega Miriam Vanessa, Chavira Teresa.
Facilitadora: Ing. Acosta Bezada Jessica Alicia.
Microbiología.
Se puede definir, sobre la base de su etimología, como la ciencia que trata de los seres vivos muy
pequeños, concretamente de aquellos cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo
del ojo humano.
Introducción:
El medio de cultivo, es la forma por la cual, a
base de un estilo de gel, en este caso, el
agar, que cuenta con nutrientes ya
establecido y necesario que permiten, en
condiciones favorables de pH y temperatura;
el crecimiento de Virus, Microorganismos,
células, tejidos vegetales e inclusive
pequeñas plantas.
Dependiendo de lo que se necesita, el medio
debe de contener y favorecer ciertas
condiciones específicas para cada tipo que
se espera cultivar. Generalmente los agares
se presentan de forma sólida y en ocasiones
líquidos, sólidos y semisólidos.
El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado más de 10.000
medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones
como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un
grado correcto de acidez o alcalinidad. Un
medio de cultivo debe contener los nutrientes
y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo
contaminante.
Antes de la observación de los medios de
cultivo, es necesaria la práctica de las
diferentes Tinciones para que sea
identificado.
Tinción de Gram; La tinción de este tipo más
extensamente utilizada es la tinción de Gram,
denominada así por el bacteriólogo danés
Hans Christian Gram, quien la desarrollo.
Sobre la base de su reacción a la tinción de
Gram, las bacterias pueden dividirse en dos
grupos, Gram positivas y gramnegativos.
Deben destacarse dos aspectos cruciales de
la tinción de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe
preceder al tratamiento de yodo. El
Yodo por sí solo tiene poca afinidad con las
células.
2) La decoloración debe realizarse con poco
agua para evitar que pierdan la
Tinción las células Gram positivas. El
proceso de decoloración debe ser corto y

2. Es esencial un cálculo preciso del tiempo
para obtener resultados
Satisfactorios.
Finalmente, el carácter de Gram positivo no
es siempre un fenómeno del todo o
Nada. Algunos organismos son más Gram
positivos que otros y algunos son
Gram variables, es decir, unas veces Gram
positivos y otras gramnegativos. La
Tinción de Gram es uno de los métodos de
tinción más importantes en el laboratorio
Bacteriológico.
Debido a su importancia en taxonomía
bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las
distintas bacterias, describiremos aquí con
cierto detalle la tinción de Gram. Las células
fijadas al calor sobre un portaobjetos se
tiñen primero con una solución de cristal
violeta (otros colorantes básicos no son tan
efectivos) y son lavadas después para quitar
el exceso de colorante. En este estado todas
las células, tanto las gramnegativos como las
Gram positivas, están teñidas de azul. El
portaobjetos se cubre entonces con una
solución de yodo (I2) – yoduro potásico (KI).
El ingrediente activo es aquí el yodo, el
yoduro potásico simplemente hace soluble el
yodo en agua. El yodo entra en las células y
forma un complejo insoluble en agua con el
cristal violeta. De nuevo tanto las células
Gram positivas como las gramnegativos se
encuentran en la misma situación. Se lleva a
cabo después de la decoloración, usando
bien alcohol o bien acetona, sustancias en
las que es soluble el complejo yodo – cristal
violeta. Algunos organismos (Gram
positivos) no se decoloran mientras que otros
(gramnegativos) lo hacen. La diferencia
esencial entre esos dos tipos de células está,
por lo tanto, en la resistencia a la
decoloración. Después de la decoloración las
células Gram positivas son todavía azules,
pero las gramnegativos son incoloras. Para
poner de manifiesto las células
gramnegativos se utiliza una coloración de
contraste. Habitualmente es un colorante de
color rojo, como la safranina o la fucsina
básica. Después de la coloración de
contraste las células gramnegativos son rojas
mientras que las
Gram positivas permanecen azules.
Resumen.
Lo que se realizó en la práctica fue; preparar
los Medios de cultivo con una serie de
indicaciones muy precisas ya que de esto
dependían todas las técnicas y procesos que
conlleva el medio de cultivo. Después de
realizar el Medio, se vacío en 9 cajas Petri,
que posteriormente se metieron a incubar.
Luego se inoculo con heces fecales de perro
y ayuda de un asa de platino. Se regresaron
a la incubadora para después hacer la
morfología de las colonias (contar). Por
último se realizó la tinción de Gram en las
bacterias esto sirvió para clasificarlas debido
al color que mostraron en la tinción. Es de
suma importancia destacar que los medios
de cultivo permiten el crecimiento de los
microorganismos y por lo que un control en
su fabricación, preparación, conservación y
uso, asegura la exactitud, confiabilidad de los
resultados obtenidos.
Abstract.
What was done was in practice; preparation

3. of culture media with a series of very precise
indications as this depended on all the
techniques and processes involved in the
culture medium. After making the Middle
East, was empty on 9 Petri dishes, which
were subsequently put to incubate. Then I
was inoculated with fecal eses dog and help
of a platinum loop. They were returned to the
incubator and then make the colony
morphology (count). Finally Gram staining
bacteria that served to classify because of the
color showed staining was performed. It is
important to emphasize that the culture media
allow the growth of microorganisms and thus
control in their manufacture, preparation,
storage and use, as to the accuracy,
reliability, and reliability of the result.
Materiales y Métodos
 9 Cajas Petri
 Portaobjetos
 Microscopio
 Cubreobjetos
 Gotero
 Asa
 3 Mecheros
 3 Mangueras
 1 Bascula
 1 Agitador
 1 asa de platino
 Papel canela
 1 Matraz de 500 ml
 Guante de asbesto
 Espátula
 Crisol
Reactivos y muestras.
 H2O
 Heces fecales.
 Agar nutritivo.
 Cristal violeta.
 Iodo-lugol.
 Alcohol-cetona.
 Zafranina.
 Aceite de inmersión.
Procedimiento:
o Se pesa la capsula de porcelana
para sumarle los correspondientes
9.2 gramos de Agar nutritivo que se
tiene que agregar a la preparación
del agar.
o Una vez que se tiene la cantidad de
agar deseada en la capsula, se vacía
en un matraz que contiene 400 ml de
agua.
o Se conecta una manguera a la llave
del gas y al mechero, se prende y se
calienta el matraz que contiene el
agar y el agua, agitándolo
consecutivamente.
o Una vez disuelto el agar se asegura
que el agar quede tornado de un
amarillo cristalino, cuando es así se
espera a que se enfrié un poco.
o Se arma un gorrito para el matraz de
papel para esterilizar.
o Dos días después los agares se
cuajaron, se conectan los mecheros
de Fitcher a las llaves de gas para
montar la olla de presión.
o Se incorpora en la olla
aproximadamente un litro y medio de

4. agua y se metieron los agares de
todos los equipos a baño María.
o Se cerró la olla adecuadamente, se
puso en la base y se prendieron los
mecheros para comenzar el proceso
de esterilización, a una temperatura
de 127ºC y a una presión de 12-15.
o Se sacaron las cajas Petri y los
agares ya esterilizados.
o Se prendieron 3 mecheros en forma
de triángulo, a aproximadamente 18
cm de distancia cada uno, en ese
espacio se vacío el agar en las cajas
Petri, y se cerró la caja igual dentro
del espacio.
o Al día siguiente se colocaron los
mecheros de igual manera, se
prendieron y se empezaron a estriar
los agares de EMB y nutritivo
preparados por todo el grupo.
o Se estrió cuatro veces dando cuatro
giros a la caja tomando una muestra
de hece fecal diluida con agua, con
el asa ya esterilizada.
o Una vez estriado el agar se cerró la
caja rápidamente y se apartó.
o Días después se armó de nuevo el
triángulo de los mecheros y se
prendieron para contar las colonias
que se formaron en los agares e
identificarlas de acuerdo a su
morfología.
o Luego se hizo el procedimiento para
teñir las bacterias utilizando la
técnica tinción de Gram y se observó
su forma y color a 100x en el
microscopio para identificar el tipo de
bacteria que se obtuvo después del
largo proceso.
Resultados.
Pudimos observar y diferenciar colonias y
bacterias. (ANEXOS 1 y 2)
Conclusiones.
Barrón Arredondo Evelin.
En la práctica pude observar muchas cosas
nuevas, pues nunca había trabajado con
medios de cultivo, con las asas, mucho
menos realizar las tinciones. Como bien
sabemos los medios de cultivo son una
mezcla de nutrientes que, en
concentraciones adecuadas y en condiciones
físicas óptimas, permiten el crecimiento de
los microorganismos. Por medio de esta
práctica al investigar los requisitos y realizar
la preparación de los medios de cultivo
(Nutritivo y EMB), logramos elaboración
satisfactoria de las mismos. Los M.C se usan
mucho en las industrias, tanto agropecuarias
y alimenticias como en la fabricación de
quesos y yogurts.
Al hacer la morfología de la colonia, nos
dimos cuenta que es de suma importancia
contar con precisión y mucha concentración,
pues esto se basa principalmente en contar
cada colonia y describir totalmente su
morfología (como son sus bordes, margen,
forma y color), ya que de esto depende saber
cuántas y de qué tipo de colonias crecieron
en el cultivo.
También realizamos la morfología de la
bacteria ya que es una de sus características

5. más importantes, estas características se
tienen que identificar mediante el
microscopio, para realizarlo utilizamos la
famosa “tinción de Gram” específicamente,
donde en el resultado teníamos que anotar
de que bacteria se trataba con toda su
descripción.
Por ultimo también pusimos en práctica los
métodos de envoltura de los materiales
utilizados, para esterilizar en la olla a presión
o autoclave, ya que al terminar la práctica
todo lo utilizado se esterilizo para evitar dejar
contaminados los materiales que seguiremos
utilizando en las siguientes prácticas.
En si todo lo que abarca los medios de
cultivo es muy interesantes e importantes de
alguna manera, pues se aprenden muchos
métodos y de eso métodos técnicas, de las
cuales podemos elegir en algunas ocasiones
cual utilizar según sea el caso.
Batres Arias Viviana.
Mi conclusión en general, de todo lo que
vimos en esta práctica es que debemos
saber cómo esterilizar para que nuestros
agares o cultivos no salgan con bacterias no
deseadas y que también al momento de
estriar lo debemos de hacer con mucho
cuidado para no romper nuestro agar pero
también rápido (no debemos hablar al
momento de estriar, debemos de esterilizar
bien la asa, lo debemos de mantener en el
triángulo de seguridad que está formado con
los mecheros y debemos mantener
precaución con ellos). Es importante saber
las formas, bordes y superficie de cada tipo
colonia para poder identificarlas al momento
de identificarlas para así no equivocarnos;
también debemos a ser todo con precaución
para no ocasionar accidentes y que todo
salga bien ya que si no se hace según las
instrucciones y con el cuidado necesario
podríamos ocasionar todo lo que se quiere
evitar y saldría mal la práctica. También es
importante saber acomodar el microscopio ya
que si no sabemos manejarlo no podremos
ver nuestras bacterias
Bernal Loera Alejandro.
Por medio de esta práctica se logró utilizar
las técnicas aprendidas a lo largo de
prácticas pasadas. Se logró aprender a
realizar algunos métodos que existen para
cultivar bacterias desde las técnicas de
vaciado, hasta la tinción de bacterias, de esa
manera pudimos observar sus características
que se ven a simple vista (macroscópicas)
como microscópicas y la interpretación de las
mismas, con lo que se observó de cada
bacteria pudimos conocer la morfología que
distingue de otras bacterias, por lo cual de
esta manera se puede identificar el método
de siembra correcta para análisis posteriores.
Por ultimo fuera de la práctica aprendimos a
respetar la vida microscópica.
Cabral Román Brandon Said.
Gracias a esta práctica podemos saber cómo
cultivar las bacterias sin afectarnos
respetando las normas de seguridad, saber
aplicar las técnicas de vaciado para saber
contar las colonias, borde, margen y color de
cada una de las bacterias, y asi poder llevar

6. este tipo de prácticas con la atención y la
calidad con las que se deben hacerse.
Cardona Barboza Adriana Fernanda.
Mi conclusión es que gracias a esta práctica
que realizamos en el laboratorio (en mi caso
investigaciones y observación de videos)
donde comenzamos por saber envolver los
materiales para esterilizar correctamente, en
autoclave por medio de baño maría, también
se pudo saber cómo funciona un medio de
cultivo, y cual es una de las maneras
adecuadas de preparar un medio, el cual
debía estar esterilizado, para así poder
inocular correctamente nuestros
microorganismos sin contaminante alguno
por medio de una asa, la cual también debía
esterilizarse, e inocular por medio de un
método de estriado en nuestro agar ya
preparado . así como también es importante
el saber contar las colonias que crecieron en
nuestro medio de cultivo, y así como
también aplicamos la técnica de tinción de
Gram etc. En si todo esto es de suma
importancia para nosotros poder obtener la
muestra deseada y saber identificar que
tipos de bacteria es, su tipo de tinción etc.
Cervantes De la Cruz Ángel.
Un medio de cultivo, es la base para dar
paso al crecimiento de microorganismos y
bacterias, cuando se realiza es necesario
conocer los fundamentos antecesores acerca
del manejo e información sobre los riesgos,
que se dan cuando se trata sobre el cuidado
de la vida.
El manejarlos, y desarrollar mediante, las
técnicas de estriado, se vuelve vital para
lograr tener un éxito más práctico sobre lo
que está puesto en cuestión. El triángulo de
seguridad que provee la protección con el
mechero, y guantes y cubre bocas, para
evitar el contacto con las bacterias con las
que se estaba tratando, (En este caso, la “E.
Coli”).
La morfología bacteriana y de colonia, es un
trabajo que aunque lo bastante laborioso,
toma una práctica que nos desarrolla
habilidades especiales, fuera de las
microbiológicas, entre ellas la paciencia, y un
desarrollo más amplio de la vista y el análisis.
En esta práctica nuevamente se tomó la
esterilización como un medio de prevención
para los objetos de cristal, y también para
acabar con las bacterias ya establecidas:
Correcta envoltura, y preciso manejo de la
olla de presión/auto clave.
Chávez Castorena Edna Paola
Mi conclusión es que aprendimos a cómo
hacer agares y que es trabajar con seres
vivos y tener cuidado con ellos, aprendimos a
como trabajar con medidas de seguridad y
técnicas de estriado trabajamos con heces
fecales de perro para poder hacer nuestro
estriado supimos esterilizar y saber
identificar nuestras bacterias si son Gram
positivas o gramnegativos
Chávez Ortega Miriam Vanessa

7. Por conclusión tengo que los agares son una
parte muy importante y fundamental en
microbiología ya que al momento del cultivo
de agar nutritivo teníamos como objetivo la
identificación de Gram positiva o ya sea
Gram negativa comenzamos con la
preparación para luego vaciar y colocar en la
incubadora, y esperar un tiempo
determinado, comenzar a estriar con heces
fecales de un animal dentro de tres mecheros
bunsen en forma de triángulo con una
distancia aproximada de 18 cm terminando
este proceso para concluir empezar a teñir y
así la determinación las bacterias de Gram,
aprendimos a trabajar con vida y las normas
estrictas que se necesitaban para su
supervivencia y las medidas de seguridad.
Chavira Teresa Edith
NO PRESENTO CONCLUSION.
Discusión.
Por medio de esta práctica aprendimos a
utilizar los distintos medios de cultivo y sus
diferentes nutrimentos y funciones ya que en
algunos crecen determinadas bacterias
impidiendo el crecimiento y desarrollo de
otras, también utilizamos la incubadora para
acelerar el crecimiento de bacterias
deseadas las cuales las obtuvimos de heces
fecales.
Se llevaron a cabo anotaciones en cuadernos
y bitácoras que fueron de la mano con la
práctica conforme avanzábamos en ella.
Por ultimo logramos cumplir el objetivo que
fue detectar la morfología de colonias y
bacterias al igual que aprender técnicas y
métodos básicos para la preparación de
medios de cultivo en los cuales se
desarrollaron nuestras bacterias.
Bibliografía APA:
 Villegas, Elci (2014) “Introducción a
los Medios de Cultivo. Microbiología”
(http://www.webdelprofesor.ula.ve/
nucleotrujillo/elciv/clases_microbiolo
gia/unidad_1.pdf)
Anexos.
ANEXO 1
Forma Bacteria
Portaobjetos 1
E. coli (bacilos rosa)
y S.,aureus (cocos
violeta)
Portaobjetos 2
estreptococos

8. Portaobjetos 3
estreptococos
Portaobjetos 4
Diplococos
Portaobjetos 5
estreptococos
COLONIA FORMA COLOR SUPERFICIE BORDE No
nutritivo *1 irregular
Amarillo,
blanco
plana ondulado 442
nutritivo *2 Irregular
Amarillo
pálido
convexa rizado 39
Nutritivo *3
Umbilicada
Amarillo
Plana
umbilicada
Entero 290
EMB *1 Filamento
Violeta
naranja
Elevada Entero 150
EMB *2 Irregular Morado Umbeliforme Rizado
EMB *3 Filamentosa Rosa violeta Umbeliforme Entero 250
ANEXO 2