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1. Práctica de Laboratorio N°02
Programa Académico: MEDICINA Experiencia curricular: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Semestre académico: 2024-01 Ciclo de estudios: V Tiempo de desarrollo: 3 horas
Temática: Acción de los agentes físicos, químicos y antibióticos sobre los microorganismos.
I. OBJETIVOS:
1. Valorar la acción de los agentes físicos sobre el crecimiento de las bacterias, en el control de los
microorganismos.
2. Valorar la acción de los agentes químicos sobre el crecimiento de las bacterias, en el control de los
microorganismos.
3. Interpretar el antibiograma por el Método Kirby-Bauer, fundamentando el efecto de los antibióticos
sobre el crecimiento de las bacterias.
II. INTRODUCCIÓN:
Apreciar el crecimiento y la muerte de las bacterias es fundamental para entender la interacción compleja
que existe entre bacterias patógenas y sus hospedadores. Si un sistema inmunitario intacto y la limitación de
nutrientes no restringen el crecimiento logarítmico de las bacterias, éstas vencerán con rapidez al hospedador
en la lucha por el alimento. El control ambiental del crecimiento microbiano con biocidas limita la exposición
a microorganismos potencialmente patógenos. Los métodos de esterilización, desinfección y pasteurización,
entre otros, son fundamentales en el control de bacterias y en consecuencia para preservar la salud humana.
Al final, comprender el crecimiento y la muerte microbianos es el primer paso hacia el control efectivo de las
enfermedades infecciosas.
La destrucción de las bacterias por medio del calor, radiación o sustancias químicas suele ser exponencial de
acuerdo con el tiempo; es decir, con cada incremento en tiempo se destruye una proporción fija de
organismos sobrevivientes. La destrucción exponencial corresponde a una reacción de primer orden o
hipótesis de “impacto único” en la que el cambio mortal afecta a un solo objetivo en el organismo y la
probabilidad de destrucción es constante en el curso del tiempo. Una consecuencia importante de la
destrucción exponencial con la mayoría de los procesos de esterilización es que la esterilidad no es un término
absoluto, sino que debe expresarse como una probabilidad.

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La finalidad del antibiograma es determinar la susceptibilidad de un microorganismo a un fármaco. Los
resultados se expresan en: sensible, intermedio o resistente, y esta categorización clínica está basada en los
valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) o halos de inhibición, los cuales ya están determinados por
distintos comités como: el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), el European Committee on
Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) y la Mesa Española de Normalización de la Sensibilidad y
Resistencia a los Antimicrobianos.
III. MATERIALES
1. Agua, jabón, papel toalla, guantes, mascarillas, mandilones.
2. 1 Placa Petri mostrando la acción de agentes químicos sobre Staphylococcus aureus, por el método
de Kirby-Bauer.
3. 1 Placa Petri mostrando la acción de agentes químicos sobre Pseudomonas aeruginosa, por el método
de Kirby-Bauer.
4. 1 antibiograma con antibióticos para Grampositivos.
5. 1 antibiograma con antibióticos para Gramnegativos.
6. 3 placas mostrando la acción de la temperatura (100°C) a 1 min, 5 min y 10 min, sobre Bacillus sp.
7. 3 placas mostrando la acción de la temperatura (100°C) a 1 min, 5 min y 10 min, sobre Escherichia
coli.
8. 1 Placa Petri sembrada con Staphylococcus aureus.
9. 1 Placa Petri sembrada con Escherichia coli.
10. 3 tubos de ensayo con caldo peptonado a pH 4.
11. 3 tubos de ensayo con caldo peptonado a pH 7.
12. 3 tubos de ensayo con caldo peptonado a pH 9.
13. 3 Gradillas y 3 cajas de fósforos.
14. 3 asas bacteriológicas y 3 mecheros.
15. Estufa a 37°C.
IV. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Los estudiantes deben cumplir con las Normas de Bioseguridad establecidas; para ello, deben tomar
en cuenta lo siguiente:
- Mandil o Bata abotonada, limpia y con su nombre completo bordado en la parte delantera superior
izquierda.
- Ropa que cubra todo los miembros inferiores y calzado cerrado que no queden expuestos los pies
- Uso de guantes, mascarillas y cofia, cuando lo indique el docente.

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- Los dispositivos electrónicos (celulares, tablets, laptops, smartwatch, etc.) sólo se usarán si el
docente lo considera necesario.
- Dentro del laboratorio, prohibido ingerir alimentos y bebidas de todo tipo; incluida agua, refrescos,
caramelos, galletas, etc.
- Mantener una actitud que no dañe los equipos o material de laboratorio.
- Mantener un comportamiento que no perjudique la salud física ni mental de sus compañeros.
- Otras normas estipuladas en el reglamento de Bioseguridad.
V. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Actividad 1: Acción de los agentes químicos sobre las bacterias (Método de Kirby-Bauer).
1. Se prepara el inóculo de bacterias, haciendo una suspensión de Staphylococcus aureus en agua
estéril, de tal modo que quede a una turbidez equivalente al tubo 0.5 del Nefelómetro de McFarland.
2. Inmediatamente, se siembra en agar Mueller Hinton,
sobre la superficie y ayudado de un aplicador (hisopo).
3. Luego, se colocan sobre la superficie del medio de
cultivo recién sembrado, discos de papel filtro
(distribuidos de forma equidistante) embebidos en
diferentes agentes químicos: Hipoclorito de Na, jabón
líquido, alcohol medicado (70°), alcohol yodado,
desinfectante de pisos, etc.)

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4. De forma similar, a los pasos 1, 2, y 3, se procede
para evaluar a Escherichia coli.
5. Ambas Placas Petri se incuban a 37°C por 24 horas.
6. En grupo de 3 estudiantes, harán la lectura del efecto que tienen los agentes químicos sobre el
crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli; para ello, medirán los diámetros de las zonas
de inhibición de cada disco con agente químico. Compararán las medidas con la Escala de Duraffourd
y valorarán la acción que presentan cada uno de los agentes químicos.
RESULTADOS ESPERADOS
Actividad 2: Acción de los agentes físicos sobre las bacterias
Acción de la temperatura sobre las bacterias esporuladas y no esporuladas.
1. Se toman 3 tubos cultivados con Bacillus sp y 3 tubos cultivados con Escherichia coli.
Bacillus sp. Escherichia coli

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2. Se llevan los 6 tubos al bañomaría a 100°C y se
dejan para que la temperatura actúe sobre las
bacterias: por 1 min. (un tubo de cada
bacteria); por 5 min. (un tubo de cada
bacteria); y por 10 min. (un tubo de cada
bacteria).
3. Después que enfrían los tubos, cada uno se siembra en placas Petri con agar nutritivo. Luego se
incuban a 37°C por 24 horas.
Escherichia coli Bacillus sp.
4. En grupo de 3 estudiantes, harán la lectura del efecto que tiene la temperatura sobre el crecimiento
de Bacillus sp. y Escherichia coli; para ello, observarán el crecimiento de colonias en el agar nutritivo.
Compararán la cantidad de colonias que crecieron y valorarán la acción que presenta la temperatura
sobre las bacterias.
RESULTADOS ESPERADOS
Escherichia coli Bacillus sp.
Acción del pH sobre las bacterias.
1. Se toman 3 tubos con caldo peptonado, un tubo a pH 4, uno a pH 7 y uno a pH 9, respectivamente.
2. Se siembra Escherichia coli en los 3 tubos y se lleva a incubar a 37°C por 24 horas.
3. En grupo de 3 estudiantes, harán la lectura del efecto que tiene el pH sobre el crecimiento de
Escherichia coli; para ello, observarán el crecimiento en el caldo peptonado.

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RESULTADOS ESPERADOS
pH 4 pH 7 pH 9
Actividad 3: Acción de los antibióticos sobre las bacterias. Antibiograma.
1. Se prepara el inóculo de la bacteria grampositiva Staphylococcus aureus en agua estéril, de tal modo
que quede a una turbidez equivalente al tubo 0.5 del Nefelómetro de McFarland.
2. Inmediatamente, se siembra en agar Mueller Hinton, sobre
la superficie y ayudado de un aplicador (hisopo).
3. Luego, se colocan sobre la superficie del medio de cultivo
recién sembrado, discos de sensibilidad con el Pull de
antibióticos para grampositivos (distribuidos de forma
equidistante).
4. De forma similar, a los pasos 1, 2, y 3, se procede para
evaluar a la bacteria gramnegativa Pseudomonas
aeruginosa. Para esta bacteria se utiliza el Pull de discos de
sensibilidad para gramnegativas.
5. Ambas Placas Petri se incuban a 37°C por 24 horas.
6. En grupo de 3 estudiantes, harán la lectura del efecto que tienen los antibióticos sobre el crecimiento
de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa; para ello, medirán los diámetros de las zonas
de inhibición de cada disco con antibiótico. Compararán las medidas con las tablas establecidas en el
Estándar M100 del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)
http://em100.edaptivedocs.net/dashboard.aspx y valorarán la acción que presentan cada uno de los
antibióticos.

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RESULTADOS ESPERADOS
Table 2B-1. Zone Diameter and MIC Breakpoints for Pseudomonas aeruginosa

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Table 2C. Zone Diameter and MIC Breakpoints for Staphylococcus spp.

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VI. ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
1. Investiga y describe la utilidad que tienen los agentes químicos empleados en los hospitales de
nuestra ciudad, como desinfectantes y antisépticos para el control microbiano.
2. Describe los diferentes métodos para la identificación de la susceptibilidad bacteriana.
3. Otro que indique el docente.
VII. BIBLIOGRAFÍA:
1. Procop GW, Koneman EW. Koneman. Diagnóstico Microbiológico. Texto y Atlas en color. 7ma ed.
Barcelona: Lippincott Williams and Wilkins. Wolters Kluwer Health; 2018. 1956 p.

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2. Forbes B, Bailey WR, Scott EG, Sahm DF, Weissfeld AS, Trevino EA, Rondinone S. Bailey & Scott.
Diagnóstico microbiológico. 12 ed. Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana; 2009. 1026 p.
3. Jorgensen JH Pfaller MA Carroll KC American Society for Microbiology editores. Manual of clinical
microbiology [Internet]. 11a ed. Washington DC: ASM Press; 2015. 2 p. Disponible en:
https://search.ebscohost.com/login.as?direct=trueamp;db=e000xwwamp;AN=1020289amp;lang=e
samp;site=ehost-live