1. UNIVERSIDAD AUTONOMA DE
GUERRERO
UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICO
BIOLÓGICAS
APUNTES DE BACTERIOLOGÍA MÉDICA I
6° SEMESTRE DE QBP
ELABORO
QBP AIDA BARRIOS CASARRUBIAS
NOMBRE DEL ALUMNO___________________________________________
CHILPANCINGO, GRO. ENERO DEL 2009

2. INDICE PÁGINAS
I. INTRODUCCIÓN 1
1.1 El papel del microbiólogo en el laboratorio de Microbiología Médica 1
1.2 Seguridad en el laboratorio 10
1.3 Organización de un laboratorio de Microbiología Médica 15
II TAXONOMIA BACTERIANA 16
III MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE INTERÉS
MÉDICO 18
3.1 Microscopia 18
3.2 Morfología macroscópica 21
3.3 Aislamiento de Bacterias 23
3.4 Métodos rápidos para la identificación bacteriana 25
3.5 Métodos inmunológicos 32
3.6 Tipificación con bacteriófagos 35
3.7 Métodos moleculares 35
3.8 Métodos de identificación semiautomatizados y automatizados 36
IV PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE INTERÉS MÉDICO 37
Cocos Gram positivos 37
4.1 Micrococcus 37
4.2 Staphylococcus 40
4.3 Streptococcus 50
4.4 Enterococcus 59
Cocos Gram negativos 60
4.5 Neisseria 60
Bacilos Gram positivos 66
4.6 Corynebacterium 66
4.7 Lysteria 69
4.8 Bacillus 70
Micobacterias 73
4.9 Mycobacterium 73
Bacilos Gram negativos 80
4.10 Enterobacterias 80
4.11 Vibrio 104
4.12 Aeromonas y Plesiomonas 109
4.13 Bacilos Gram negativos no fermentadores 114

3. 4.14 Haemophilus 117
4.15 Legionella 119
4.16 Cocobacilos Gram negativos 122
4.17 Campylobacter y Helicobacter 132
Bacterias Anaerobias 142
4.18 Clostridium 144
4.19 Cocos anaerobios 149
4.20 Anaerobios gramnegativos no esporulados 151
Espiroquetas 156
4.21 Leptospira 156
4.22 Borrelia 157
4.23 Treponema 159
Micoplasmas y bacterias intracelulares obligadas 162
4.24 Micoplasma y Ureaplasma 162
4.25 Chlamydia 163
4.26 Rickettsia y Coxiella 164
BIBLIOGRAFÍA 166

4. BACTERIOLOGÍA MÉDICA I
I. INTRODUCCIÓN.
1.1 EL PAPEL DEL MICROBIOLOGO EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA MÉDICA.
Las funciones más importantes del microbiólogo son examinar y cultivar
muestras en busca de microorganismos, identificar con certeza las especies
involucradas en aislamientos importantes y llevar a cabo las pruebas de
susceptibilidad a antibióticos en caso de ser indicadas. Esto ayudará a los
médicos en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades infecciosas. Los
datos del microbiólogo también son importantes para evaluar el curso de una
terapia con antibióticos y para proveer información epidemiológica que permita
definir fuentes comunes de infección.
En la actualidad existe una Comisión Conjunta sobre Acreditación de las
organizaciones del Cuidado de la Salud de los Estados Unidos (JCAHO) y otras
comisiones locales, estatales y organizaciones de revisión en el grado de
eficiencia de los estudios, la atención y el manejo de los pacientes, porque ahora
se requiere que los hospitales y laboratorios tengan certificaciones de calidad y
formen comités de utilización de laboratorio para mejorar la calidad de la atención,
con la función de:
a) Evaluar todos los aspectos de la atención de pacientes dentro de cada
institución.
b) Establecer criterios y convenciones de calidad.
c) Institucionalizar controles para ensayar el grado de coincidencia con los
estándares.
d) Hacer recomendaciones para corregir cualquier práctica que se
encuentre fuera de las reglas establecidas.
La idea de establecer programas complejos de certificación de calidad que
involucren a todo un hospital ha tomado la forma de monitoreos en áreas
pequeñas para las cuales los problemas se han definido y la mejora es posible y el
personal de laboratorio debe seguir teniendo un papel activo en la tarea de
establecer los criterios y estándares de atención médica en relación con la
utilización del laboratorio.
El ciclo de diagnóstico que se muestra en la figura 2-1 proporciona un modelo
útil para entender el papel que juega el laboratorio de microbiología en la
certificación de calidad.
El ciclo de diagnóstico comienza cuando el paciente consulta al médico acerca
de los signos y síntomas que sugieren una enfermedad infecciosa. Dependiendo
de lo que encuentre el médico al revisar la historia clínica y realizar el examen
físico del paciente, se pueden indicar cultivos de uno o más sitios anatómicos.
1

5. El recipiente con la muestra debe de estar rotulado en forma adecuada con el
nombre del paciente, lugar, fecha, hora de toma y debe indicar el tipo de muestra.
La orden de pedido debe incluir los hallazgos clínicos esenciales, un
diagnóstico presuntivo y cualquier información que pueda necesitar el personal de
laboratorio para aplicar procedimientos distintos de los de rutina para recuperar
microorganismos poco comunes o particularmente difíciles.
Los microbiólogos deben asumir la responsabilidad de ver que se respeten las
reglas y prácticas con las cuales se toman las muestras y se transportan al
laboratorio y que se elaboren informes precisos para asegurar la calidad de la
atención de los pacientes.
Los directores de laboratorio y los supervisores deben prestar atención a la
evolución de nuevas tecnologías que puedan proveer resultados más rápidos, con
mayor certeza y a menor costo. Una línea abierta de comunicación en ambos
sentidos debe mantenerse entre los médicos y el personal de microbiología, así
como también con su personal de apoyo en oficinas, clínicas y hospitales.
2

6. Los Centros de Control y Prevención de Enfermedades (CDC) son organismos
que recomiendan que el procesamiento de las muestras sea más rápido. El
objetivo es no sólo mejorar la calidad de la atención del paciente, sino también
establecer el diagnóstico precoz de una enfermedad infecciosa, de modo que
pueda reducirse la posibilidad de diseminación en la comunidad.
1.1.1. CONCEPTOS BÁSICOS SOBRE ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
Toda infección implica la presencia de microorganismos en un huésped
vivo. En la práctica, se considera que está presente una infección cuando
microorganismos invasores despiertan una respuesta observable del huésped. Un
microorganismo capaz de causar infección es denominado patógeno, el grado o
extensión (patogenicidad) hasta el cual un microorganismo puede causar daño a
un huésped infectado es conocido como virulencia.
Esta respuesta puede localizarse en el sitio de infección, o bien ser
generalizada o sistémica. La reacción local a la infección toma la forma de una
inflamación que es la alteración anormal de tejidos u órganos, causada por el daño
o la destrucción de los tejidos. La respuesta de inflamación local causada por
agentes infecciosos puede dividirse en infecciones agudas supurativas o
purulentas, crónicas y granulomatosas.
Una infección aguda supurativa despierta una respuesta inflamatoria en la
que se forma pus, que es un material líquido que contiene grandes cantidades de
neutrófilos segmentados que son los principales marcadores de una inflamación
aguda. Celulitis es el término usado con frecuencia para describir la participación
de tejidos subcutáneos laxos, en los cuales el exudado purulento se distribuye
entre las capas de tejidos involucrados.
Absceso es el término que se emplea cuando los neutrófilos segmentados
se localizan en el área periférica de una inflamación supurativa. Necrosis hace
referencia a la muerte celular o a destrucción de tejidos en el sitio de formación de
pus.
Una infección crónica es una infección de larga duración, en la que la
respuesta inflamatoria celular incluye linfocitos, células plasmáticas y monocitos.
La infección granulomatosa es un tipo de infección crónica en la que se
forma un granuloma que puede ser definido como colecciones locales de
macrófagos grandes activados o histiocitos, que tienen incrementada su
capacidad de fagocitosis y digestión de partículas extrañas. Estas células son
llamadas también “epitelioides” porque tienen cierto parecido con las células
epiteliales escamosas.
Algunos macrófagos se agregan con frecuencia para formar una célula
gigante multinucleada. En ciertos granulomas, puede encontrarse en los tejidos un
tipo particular de necrosis llamada necrosis caseosa, en la cual el tejido tiene una
3

7. consistencia similar a la del queso. La presencia de células gigantes
multinucleadas con necrosis caseosa es característica de la tuberculosis pero
dichas células también pueden ser vistas en otras infecciones.
Una infección oportunista es cuando un agente microbiano, que
comúnmente no causa enfermedad, provoca inflamación en un huésped
inmunocomprometido o debilitado.
Otros términos usados para describir la interacción entre los microbios y el
huésped infectado son comensalismo, simbiosis y parasitismo.
El comensalismo o colonización es la relación en la cual los
microorganismos viven sobre un huésped o en su interior, de una forma en la que
ninguno de los dos se benefician ni se perjudican por ejemplo los Streptococcus α-
hemolíticos que colonizan el tracto respiratorio superior y una variedad de
especies de Staphylococcus y levaduras que habitan en la piel.
La simbiosis es una relación en la cual los microorganismos viven sobre o
dentro de un huésped de modo que ambos obtienen ventajas y se benefician
mutuamente, una bacteria simbiótica es Escherichia coli que coloniza el intestino y
obtiene nutrientes y energía del huésped, y la bacteria sintetiza la vitamina K,
necesaria para prevenir los trastornos de la coagulación.
El parasitismo es la relación en la cual un microorganismo vive sobre o
dentro de un huésped y obtiene beneficios a expensas del huésped por ejemplo,
Salmonella typhi, Corynebacterium diphtheriae, Bordetella pertussis son bacterias
parásitas que viven dentro de los tejidos del huésped, provocan fiebre tifoidea,
difteria y tos convulsa respectivamente, en detrimento del huésped y en ocasiones
hasta producen la muerte.
Un saprófito es un microorganismo que vive de la materia orgánica muerta,
en general no son patogénicos para los seres humanos, excepto en casos de
inmunosupresión o enfermedades crónicas debilitantes.
Los microorganismos pueden infectar al huésped por rutas exógenas
(inhalación, ingestión, contacto directo o inoculación) o endógenas (sucesivas
rupturas en las barreras naturales, cambios en la virulencia de la flora normal o
cambios en los mecanismos de defensa del huésped.
Signos y síntomas de infecciones generales.
En la fase aguda de la infección, el paciente puede experimentar fiebre alta,
temblores, sonrojamiento (vasodilatación) y aumento de la frecuencia del pulso.
Los pacientes con infecciones subagudas o crónicas pueden presentar signos
mínimos y vagos como temperatura baja intermitente, pérdida de peso y fatiga.
Las reacciones tóxicas a productos bacterianos pueden producir reacciones de
piel eccematosas (inflamación de la piel no contagiosa y pruriginosa) o
4

8. hemorrágicas, o una variedad de síntomas neuromusculares, cardiorrespiratorios
o gastrointestinales.
Los signos locales de infección se pueden observar por medio de
enrojecimiento y calor localizados y la producción de una masa hinchada y
tumoral, dolor(3).
1.1.2. TOMA DE MUESTRAS.
En la mayoría de las instituciones y comunidades se cuenta con patólogos,
microbiólogos y técnicos médicos para asistir a los médicos en la selección de las
muestras apropiadas para cultivo, y en el pedido de pruebas para lograr la máxima
recuperación o la detección de microorganismos. Los especimenes importantes de
diversas zonas de infección se mencionan en la Fig. 13.2
La toma apropiada de una muestra para cultivo es posiblemente el paso
más importante en la confirmación final de que un microorganismo es responsable
de un proceso de enfermedad infecciosa.
Una muestra mal tomada no sólo puede resultar en la recolección fallida de
microorganismos importantes, sino también conducir a una terapia equivocada y
aun dañina si el tratamiento es dirigido hacia un comensal o contaminante. Por
ejemplo que del esputo de un paciente con neumonía se ha recuperado Klebsiella
pneumoniae, una causa válida de neumonía humana. Es sabido que Klebsiella
pneumoniae coloniza también la nasofaringe. Si en este caso el esputo ha sido
recuperado inadecuadamente y consiste sobre todo en saliva, la recuperación de
Klebsiella pneumoniae puede no reflejar la verdadera causa de la neumonía, sino
simplemente la colonización nasofaríngea. El tratamiento de Klebsiella
pneumoniae puede ser inadecuado y resultar efectivo por casualidad, sólo si la
especie bacteriana causante de la neumonía tiene un patrón de susceptibilidad
similar al de Klebsiella pneumoniae. Si el verdadero agente causal fuera
Pseudomonas aeruginosa, la terapia seleccionada podría haber sido errónea.
ZONAS DE TOMA DE MUESTRA Y FLORA NORMAL
Zonas del cuerpo que son normalmente estériles:
Sangre, médula ósea, líquido cefalorraquídeo, líquidos de las serosas, tejidos,
vías respiratorias inferiores y vejiga.
Zonas del cuerpo con flora comensal normal: boca, nariz y vías respiratorias
superiores, piel, tracto gastrointestinal, tracto genital femenino, uretra.
CONCEPTOS BÁSICOS PARA LA RECOGIDA DE MUESTRAS
Tomar las muestras apropiadas; p. ej., sangre y líquido cefalorraquídeo ante la
sospecha de meningitis.
Recoger la muestra en el momento adecuado, durante la fase aguda de la
5

9. enfermedad; p. ej., frotis de sangre en el paludismo
Si fuera posible, obtener la muestra antes de que el enfermo reciba
antimicrobianos.
Obtener material suficiente y un número adecuado de muestras; p. ej.,
sangre/suero suficiente para más de una pareja de hemocultivos.
Evitar cualquier contaminación por:
a) la flora normal; p. ej., en la orina de micción media
b) equipo no estéril.
Usar los recipientes correctos y los medios de transporte adecuados.
Transportar las muestras al laboratorio rápidamente.
6

10. Recomendaciones fundamentales en la toma de muestra:
a) La muestra debe ser material del sitio real de infección, y tiene que ser
tomada con el mínimo de contaminación de los tejidos, órganos o
secreciones adyacentes. Por ejemplo los hisopados de garganta en
búsqueda de Streptococcus deben tomarse, evitando el contacto del hisopo
con áreas de la orofaringe. La contaminación de esputo o de muestras del
tracto respiratorio inferior con secreciones orofaríngeas también debe ser
minimizada.
b) Otro ejemplo en que los resultados del laboratorio pueden ser engañosos
son: las fallas en el cultivo de la parte profunda de una herida o seno
drenante sin tocar la piel adyacente, la limpieza inadecuada del tejido
7

11. periuretral y del perineo antes de tomar una muestra limpia de orina de una
mujer, la contaminación de una muestra de endometrio con secreciones
vaginales y el fracaso en llegar a la profundidad de los abscesos con agujas
aspirantes o cánulas. Los hisopos no son recomendables para la
recuperación de la mayoría de las muestras y debería ser fomentado el uso
de agujas de aspiración y catéteres.
c) Deben establecerse los momentos óptimos para la toma de muestra, a fin de
contar con las mejores oportunidades de recuperación de microorganismos
causantes de enfermedad por ejemplo en la fiebre tifoidea la evolución del
proceso infeccioso en esta enfermedad es un ejemplo de la importancia del
momento apropiado para la toma de la muestra, el microorganismo causante
puede ser recogido de la sangre durante la primera semana de la
enfermedad.
d) El cultivo de materia fecal u orina suele ser positivo durante la segunda y
tercera semana de la enfermedad. Los cultivos de rutina de garganta,
esputo, orina y heridas deberían limitarse a uno cada 24 horas. Para
confirmar el diagnóstico de tuberculosis pulmonar, deben obtenerse a
primera hora de la mañana, en tres días sucesivos, muestras de esputo de
tos profunda.
e) Una vez que este diagnóstico quede establecido, las tomas repetidas de
esputo deben ser una vez por semana para controlar la eficacia de la
terapia.
f) Debe obtenerse una cantidad de muestra suficiente para llevar a cabo las
técnicas de cultivo solicitadas. Para asegurar una óptima recolección de los
microorganismos debe utilizarse una serie adecuada de dispositivos de
recuperación, envases para muestra y medios de cultivo.
g) Para la toma de muestras deben usarse recipientes estériles provistos de
tapas herméticas para prevenir derrames o contaminaciones durante el
transporte.
h) Es común usar hisopos para la toma de muestra, sin embargo, por lo general
son inferiores a otros métodos para la toma de muestra por lo que se debe
evitar en lo posible su uso ya que los hisopos de algodón pueden contener
ácidos grasos residuales, y el alginato de calcio puede emitir productos
tóxicos que inhiban ciertas bacterias delicadas, por lo tanto, puede indicarse
el uso de hisopos con puntas de dacrón o poliéster. No debe permitirse que
las muestras permanezcan en contacto con los hisopos más de lo
necesario.
Excepto con hisopos de garganta, en los cuales el secado parece no afectar
la recuperación de Streptococcus, los hisopos deben ser colocados en medio de
transporte o en una cámara húmeda que prevenga el secado y la muerte de las
8

12. bacterias. Para la mayoría de las especies bacterianas ha sido demostrada
buena recuperación de estos tubos hasta las 48 horas o más.
El uso de tubos de cultivo con medios de transporte semisólidos Stuart o
Amies son adecuados. La recuperación de microorganismos de los hisopos
puede ser estimulada si se coloca el hisopo en 0.5 a 1.0 ml de solución salina
estéril o caldo triptona se soya y se agita por 20 segundos antes de la
inoculación.
Para la recuperación de bacterias anaerobias se recomienda aspirar la
muestra con aguja y jeringa, una vez tomada la muestra debe protegerse de la
exposición del oxígeno ambiental y del secado hasta que pueda ser procesada
en el laboratorio. Existen recipientes adecuados para el transporte de muestras
anaeróbicas, los cuales están disponibles en el comercio como jeringas y agujas
para aspiración, tubo con caldo tioglicolato, hisopo de cubierta plástica y bio-
bolsa o bolsa de plástico.
Otra recomendación importante es reducir al mínimo la demora entre la toma
de muestra y la inoculación de los medios. Por ejemplo si se utilizan hisopados
rectales para la recuperación de especies de Shigella de pacientes con
disentería bacilar, el material tomado debe ser inoculado directamente sobre la
superficie de medio MacConkey o en caldo de enriquecimiento para gram
negativos, también las secreciones uretrales o cervicales para la recuperación
de Neisseria gonorrhoeae deben ser inoculados directamente en un agar
chocolate.
La manipulación e interpretación de los resultados se basa en el conocimiento
de la flora normal figura 28.8 y de los posibles contaminantes.
9

13. 1.2 SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
Si bien es responsabilidad legal del hospital y de los administradores de
laboratorios brindar un ambiente de trabajo seguro, los empleados también
deben asumir la responsabilidad de adherir a las normas de seguridad
delineadas en el Manual de Seguridad del Laboratorio, a fin de llamar la
atención del supervisor acerca de cualquier riesgo o potenciales riesgosos que
10

14. se puedan encontrar durante las actividades laborales, y buscar
inmediatamente atención médica en caso de cualquier daño relacionado con el
trabajo.
Desde la aparición de la epidemia del síndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA) se han realizado esfuerzos extraordinarios para prevenir
infecciones por VIH adquiridas en el laboratorio. Las prácticas y los
procedimientos siguen de cerca de aquellos que han sido establecidos para
prevenir la diseminación en el laboratorio del virus de la hepatitis B (VHB)
Según datos publicados recientemente relacionados a los riesgos de
transmisión del VIH y VHB, el riesgo de adquirir VIH luego de un pinchazo con
una aguja que se ha utilizado en un paciente es del 0,5%, en contraste, adquirir
una infección por VHB luego de un pinchazo con una aguja que ha sido usada
en un portador de VHB varía entre 6 y 30 %. Se estima que cada año un total
de 12,000 trabajadores de la salud se infectan accidentalmente con VHB, y 250
de ellos mueren por complicaciones de la enfermedad, en tanto que de 700 a
1200 se transforman en portadores.
1.2.1 Precauciones Universales.
1. La sangre y los fluidos corporales de todos los pacientes deben ser
manipulados como material infeccioso. Se debería presumir que todos los
pacientes están infectados con VIH u otros patógenos transmitidos por la
sangre.
2. Todas las muestras de sangre y de fluidos corporales deberían ser
colocados en recipientes bien construidos, con tapas de seguridad, para
prevenir el derrame de líquidos durante el transporte.
3. Todas las personas que procesen muestras de sangre o de fluidos
corporales (si manipulan el extremo superior de tubos de vacío) deberían
usar guantes y una protección para el rostro (o una máscara con anteojos o
antiparras) para protegerse de las salpicaduras.
4. Los trabajadores deben cambiarse los guantes y lavarse las manos cuando
terminen de procesar las muestras.
5. Los trabajadores no deben pipetear nunca con la boca sino usar aparatos
mecánicos.
6. El empleo de agujas y jeringas debería estar limitado a las situaciones en
las que no hay otra alternativa.
11

15. 7. Las superficies de trabajo de los laboratorios deben ser descontaminadas
con un germicida químico adecuado luego de un derrame de sangre o de
otros fluidos corporales y cuando se terminan las actividades laborales.
8. Los materiales contaminados utilizados en las pruebas de laboratorio deben
ser descontaminados antes de volver a procesar muestras, o ser colocados
en bolsas y eliminados, de acuerdo con las políticas institucionales.
9. Todas las personas deben lavarse las manos luego de terminar las
actividades del laboratorio, y quitarse las prendas protectoras antes de salir
del laboratorio.
10. Una vez que ha ocurrido una exposición, se debe tomar una muestra de
sangre al trabajador, con su consentimiento para evaluar la presencia de
antígenos de superficie de hepatitis B (HbsAg) y anticuerpos de VIH.
Cuando ha estado expuesto a un individuo con hepatitis, el trabajador que
previamente no había estado expuesto deberá recibir las series de vacunas
y una sola dosis de inmunoglobulina contra hepatitis B (HBIG) dentro de los
siete días de exposición. Si el trabajador había estado expuesto
previamente, debería estudiarse la presencia de anticuerpos a HbsAg y
dársele una dosis de vacuna y una dosis de inmunoglobulina si el nivel de
anticuerpos de la muestra de sangre del trabajador es inadecuada.
11. Ante cualquier exposición a la sangre de un individuo con SIDA, o positivo
para la infección por VIH, se asesorará al trabajador respecto del riesgo de
infección y se evaluará clínica y serológicamente para la evidencia de
infección por VIH tan pronto como sea posible. El trabajador debe informar
y procurar una evaluación médica ante cualquier enfermedad febril (fiebre o
erupción) que lo afecte dentro de las 12 semanas siguientes a la
exposición. Se debe volver a estudiar a los trabajadores seronegativos a las
6 semanas, a las 12 semanas y a los 6 meses de la exposición, para
determinar si ha habido transmisión. Durante el periodo de seguimiento los
trabajadores deben evitar actividades que puedan tener como resultado la
transmisión del virus (donación de sangre, relaciones sexuales sin
protección.
Otras infecciones adquiridas en el laboratorio puede ser brucelosis
(Brucella), leptospirosis (Leptospira), tuberculosis (Mycobacterium) entre otras.
Según reportes de investigaciones sobre las 10 infecciones más frecuentes
adquiridas en el laboratorio fueron: brucelosis, fiebre Q, fiebre tifoidea,
tularemia, tuberculosis, tifus, hepatitis infecciosa, encefalitis equina
venezolana, coccidioidomicosis y psitacosis.
Se aconseja a los trabajadores de laboratorio no tomar riesgos
innecesarios. El descuido, la negligencia y las prácticas poco seguras pueden
causar daños serios no sólo a los individuos, sino también a los colaboradores
o a los pacientes.
12

16. 1.2.2. NORMAS Y REGULACIONES GENERALES DE SEGURIDAD.
Las siguientes consideraciones generales que pueden hacer menos
riesgoso el trabajo en laboratorios de microbiología:
1. Cada empleado debe ser instruido acerca de la ubicación y la
operación de cada uno de los equipos de seguridad y las
instalaciones, tales como mantas ignífugas, extinguidores, duchas y
lavaojos. Cada uno de éstos debe ser fácilmente accesible en el
laboratorio.
2. El equipo de protección personal (guantes quirúrgicos, guardapolvos,
etc.) debe utilizarse cuando sea indicado. Los guardapolvos deben
usarse cerrados (abotonados) en todo momento, y es necesario
quitárselos al abandonar el laboratorio.
3. Los hábitos y el arreglo personal deben tenerse muy en cuenta. El
cabello largo debe estar atado, de modo que no interfiera en los
reactivos o los equipos. Se prohíbe la aplicación de cosméticos dentro
del área de trabajo. Las sandalias y los zapatos abiertos no brindan
adecuada protección a los pies, y no son aceptables. Está prohibido
fumar en el laboratorio. No deben llevarse a la boca los dedos, lápices
y otros implementos. Hay que restringir las payasadas y las bromas
pesadas.
4. Los lentes de contacto, especialmente los blandos, absorben ciertos
solventes y pueden ser peligrosos ante derrames y salpicaduras. Se
aconseja no usarlos en el laboratorio o usar anteojos de seguridad
cuando se trabaja con material cáustico o infeccioso.
5. No está permitido comer o almacenar alimentos o bebidas en el
laboratorio o en los refrigeradores del laboratorio. Se debe designar
un refrigerador específico para almacenar la comida de los
empleados.
6. El personal de laboratorio con enfermedades recientes de la piel,
infecciones respiratorias agudas y otras enfermedades contagiosas
debe evitar el contacto con los pacientes.
1.2.3. PRECAUCIONES SISTEMATICAS DE SEGURIDAD.
Centrifugación.
1. Antes de centrifugar cualquier material, revisar los tubos por si están
estrellados. Reemplazar periódicamente los colchones de goma en el fondo
de los rotores, y retirar cualquier vidrio roto que pueda haber quedado.
13

17. 2. Asegurarse de que la centrífuga esté perfectamente balanceada antes de
usarla. Controlar los anillos de los rotores y los portatubos, para asegurarse
que los pesos coincidan.
3. Esperar que la centrífuga se detenga completamente antes de abrir la tapa
para retirar las muestras. Utilizar sólo el freno para detener la rotación en
forma rápida y completa.
4. Si se rompiera un tubo dentro de la centrifuga, primero desactivar el
aparato, esperar por lo menos 20 minutos antes de quitar la tapa y después
colocarse máscara y guantes, limpiar y desinfectar minuciosamente el
interior de la centrífuga,
5. Como parte del programa de mantenimiento sistemático, cada centrífuga
debe ser limpiada minuciosamente con un desinfectante adecuado el día
que sea usada. Se debe dar mantenimiento preventivo a todos los
componentes del aparato, cuatrimestral o semestral, según sea apropiado.
Agujas y material de vidrio.
1. Desechar todo material de vidrio que esté quebrado o estrellado y
colocarlos en recipientes adecuados.
2. Recoger los vidrios rotos con escobillón y pala; no hacerlo con las manos.
3. Los artículos de vidrio no deben ser arrojados a la pileta ni echarlos sueltos
a un cesto de desperdicios en el que se arrojen artículos de papel. Pueden
producir cortes de dedos y manos de quienes recogen la basura.
4. Las agujas y lancetas usadas deben colocarse en recipientes apropiados
para agujas usadas, que se eliminan de manera segura.
5. Evitar, siempre que sea posible, quitar o intercambiar las agujas de las
jeringas. La práctica de cambiar las agujas antes de descartar la sangre
extraída de la vena dentro de las botellas de cultivo ha sido abandonada
por la mayoría de los hospitales.
Manejo de muestras y derrames.
1. Las muestras se deben recolectar en recipientes sólidos, con cierres
adecuados para evitar derrames y pérdidas. Todas las muestras deben
considerarse potencialmente peligrosas.
2. Los cortes en las manos deben ser protegidos adecuadamente con bandas
adhesivas. Usar guantes desechables si la actividad implica contacto con
sangre, suero, plasma u otras muestras.
3. Si una muestra presenta evidencias de rotura, derrame o suciedad dentro
del recipiente que la contiene, ponerse guantes y transportar lo más que
sea posible de la muestra a un segundo recipiente estéril. Transcribir
también toda la información pertinente del viejo al nuevo recipiente,
14

18. 4. Las muestras contaminadas con sangre deben ser rechazadas. Manipule
sólo con guantes dichas muestras si es necesario procesarlas en forma
urgente. Notifique al solicitante que dicho material contaminado representa
un peligro para la salud.
5. Lávese las manos minuciosamente con agua y jabón varias veces al día, en
particular después de manipular muestras y antes de retirarse a comer o
tomar un café.
6. Inunde con solución desinfectante cualquier área donde haya ocurrido un
derrame de sangre o suero. Utilizando guantes, emplee toallas de papel o
esponjas de gasa para absorber el líquido, y luego practique un lavado
minucioso con agua y jabón. Guarde en bolsas todo el material
contaminado, para eliminarlo como residuo infeccioso.
Manipulación de desperdicios.
1. Para eliminar muestras de sangre u orina depositarlos en recipientes
adecuados para su tratamiento y eliminación.
2. Es preciso utilizar bolsas de peligro biológico (que así deben de estar
rotuladas) para eliminar todas las muestras potencialmente contaminadas:
tubos con sangre, recipientes de muestras, pipetas, puntas, frascos de
reacción, tapones, etc. Dejar suficiente espacio en la parte superior de la
bolsa, para que ésta pueda ser cerrada fácilmente y asegurada con una
banda elástica.
3. El material de vidrio o cortante debe ser eliminado en recipientes
adecuados, de paredes sólidas. Una vez llenos, estos recipientes deben
sellarse con cinta adhesiva y disponerse en cajas de desperdicios
apropiadamente rotuladas, para su adecuada eliminación.
4. Las bolsas de peligro biológico llenas deben ser llevadas a las áreas de
desecho con la frecuencia necesaria para evitar acumulaciones.
5. Sumerja el material de vidrio contaminado en solución desinfectante.
Enjuague minuciosamente con agua y autoclave antes de utilizarlo otra vez.
1.3 Organización de un laboratorio de microbiología médica.
Un laboratorio acreditado debe estar dirigido por un patólogo, un médico o una
persona con un grado doctoral en un área científica específica de laboratorio. El
laboratorio debe contar en todo momento con un supervisor calificado, que tenga
al menos 4 años de experiencia de laboratorio.
El control de calidad sobre el personal requiere un programa educativo efectivo
y continuo. El entrenamiento en servicio debe ser una actividad progresiva. El
personal debe ser alentado a participar en seminarios y talleres de nivel local,
regional o nacional. Todos los laboratorios deberían participar en una o más de las
pruebas de capacidad de servicio que estén disponibles, y éstas deberían ser
usadas como ejercicios de enseñanza. El personal de supervisión debería revisar
los resultados en relación con la precisión, la reproducibilidad y la concordancia
con los controles estándar de calidad. Las técnicas de laboratorio deberían ser
15

19. cuidadosamente evaluadas en función de la seguridad, para evitar tanto las
infecciones adquiridas como la transmisión de agentes infecciosos por el personal
de laboratorio a sus familiares en el ámbito doméstico.
Espacio: Se recomienda un mínimo de 9.29 m 2 de espacio de trabajo por
tiempo completo de empleado; sin embargo, muchos laboratorios se quedan
cortos en este requerimiento mínimo. Una de las deficiencias más frecuentemente
citadas por los inspectores de laboratorio es la falta de espacio suficiente para
llevar a cabo adecuadamente las tareas necesarias en un trabajo de alta
calidad.(3,4)
II . TAXONOMÍA BACTERIANA.
CUESTIONARIO:
1. Define la Taxonomía.
2. Menciona los tres dominios o imperios y la diferencia entre sí.
3. En que se basan las clasificaciones.
4. Que características son útiles en taxonomía.
5. Que es la clasificación, nomenclatura e identificación.
6. Menciona en orden ascendente los niveles o rangos utilizados con mayor
frecuencia en la taxonomía bacteriana.
7. Copiar y analizar la figura que se refiere a la estructuración jerárquica en
taxonomía.
En la taxonomía bacteriana, los niveles o rangos
utilizados con mayor frecuencia en orden ascendente
son los siguientes:
16

20. 8. ¿Cómo se caracterizan las especies bacterianas y como se definen?
9. ¿Qué es una cepa?
10. Que son las biovariedades, morfovariedades y las serovariedades dentro de
una especie.
11. En que se basa la clasificación fenética y la filogenético
12. Cuales características se aplican en taxonomía y anota lo más importante de
cada grupo de características.
13. ¿Qué son los cronómetros moleculares?
14. Defina árbol filogenético.
15. Cual es la diferencia entre un árbol con raíz y un árbol sin raíz.
16. ¿Qué son las secuencias de oligonucleótidos firma?
17. ¿Por qué podría preferirse utilizar las secuencias de DNA o de proteínas en los
estudios filogenéticos?
18. Sobre la base de qué, tres criterios principales dividió Whittaker los organismos
en 5 reinos.
19. ¿Qué características se utilizan para colocar a las bacterias en las diferentes
secciones del Manual Bergey?
21¿Cuál es la principal diferencia entre las bacterias gram positivas y las bacterias
gram negativas?
20. Señale algunas de las principales diferencias entre la primera y la segunda
edición del Manual Bergey.
17

21. III. MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE INTERÉS MÉDICO.
El laboratorio de microbiología clínica puede proporcionar una identificación
preliminar o definitiva de los microorganismos basándose en.
1. El examen microscópico de las muestras.
2. El estudio del cultivo y características bioquímicas de los
microorganismos aislados (cultivos puros).
3. Pruebas inmunológicas que detectan anticuerpos o antígenos
microbianos.
4. Tipificación con bacteriófagos.
5. Métodos moleculares.
3.1 MICROSCOPÍA.
Con el microscopio ordinario se pueden estudiar preparaciones en fresco,
fijadas por calor. Y mejorar la visualización con contraste de fases o microscopía
de campo oscuro. Esta última es de elección en la detección de espiroquetas en
lesiones cutáneas asociadas a la sífilis temprana, o en el líquido cefalorraquídeo y
orina de personas con leptospirosis temprana. Se puede emplear el microscopio
de fluorescencia para identificar ciertos microorganismos como Mycobacterium
tuberculosis, después de teñirlos con fluorocromos. Para la clasificación e
identificación de las bacterias se emplean las características morfológicas,
fisiológicas, metabólicas y ecológicas.
Se han descrito muchas tinciones para examinar muestras buscando
microorganismos específicos. Dos de las más empleadas son la tinción de Gram y
la tinción para bacilos ácido- alcohol resistentes.
Morfología microscópica de las bacterias.
El examen con el microscopio óptico, objetivo de inmersión y sin
cubreobjeto de las preparaciones coloreadas con Gram, es la técnica que se
emplea como rutina para determinar la forma de las bacterias que son cocos
(esféricas), bacilos (semejantes a bastones) y formas espiraladas.
La tinción de Gram también permite un control de la contaminación, al
observar homogeneidad en la coloración y la morfología. Se hace un extendido
bacteriano fijado por calor en un portaobjeto de vidrio y se tiñen con la técnica de
Gram, permitiendo que las bacterias se puedan diferenciar en dos grupos, los
microorganismos grampositivos se tiñen de azul y los que se tiñen de rojo o
rosado son gramnegativos. fig. 2
18

22. Fundamento de la técnica:
Es probable que la diferencia entre las bacterias gram negativas y gram
positivas se deba a la naturaleza física de sus paredes celulares.
Si la pared celular se elimina en las bacterias grampositivas, éstas se
convierten en gramnegativas. El peptidoglucano no se tiñe por sí mismo; más
bien, parece que actúa como barrera de permeabilidad para evitar la pérdida del
cristal violeta. Durante el proceso, las bacterias se tiñen primero con cristal violeta,
y luego se tratan con yoduro para favorecer la retención del colorante.
Cuando se decolora, las bacterias grampositivas con etanol, se cree que el
alcohol contrae los poros de la capa gruesa del peptidoglucano. En consecuencia,
el complejo colorante-yoduro se retiene durante la fase corta de decoloración y las
bacterias adquieren un color azul violeta. Por el contrario, la capa de
peptidoglucano de las bacterias gramnegativas es muy fina, sin tantos enlaces y
con poros de mayor tamaño.
También es posible que el tratamiento con alcohol extraiga suficientes
lípidos de la membrana en las células gram negativas, como para aumentar
posteriormente su porosidad. Por estos motivos, el alcohol elimina mas fácilmente
el complejo cristal violeta-yoduro entre las bacterias gramnegativas.
Una vez que comprobamos que tenemos un cultivo puro por la morfología
macroscópica y microscópica se realizan pruebas bioquímicas para identificar las
bacterias
.
FIGURA 2 Tinción de Gram
19

23. Diagrama de flujo para la identificación de Bacterias gram positivas
. Diagrama de flujo para la identificación de Bacterias gram negativas
20

24. 3.2 Morfología macroscópica:
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite identificar las
bacterias porque las especies forman colonias con una forma y aspecto
característico. Cuando se ha sembrado una población mixta adecuadamente, a
veces es posible identificar la colonia deseada por su aspecto general y utilizarla
para obtener un cultivo puro. Las características macroscópicas de las colonias
ayudan a la identificación, ya que las colonias varían en tamaño, forma, color, olor,
textura, etc. Algunos de los términos que se utilizan para describir las
características macroscópicas de las colonias son:
Tamaño: diámetro en mm.
21

25. Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme (como de
huso)
Elevación: plana, elevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada.
Margen: entero, ondulado, lobulado, erosionado o lacerado, filamentoso, rizado o
enrulado.
Color: blanco, amarillo, negro, marrón, anaranjado y otros.
Superficie: brillante, opaca, etc.
Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc.
Consistencia: mantecosa, viscosa, butirosa, seca, membranosa, quebradiza, etc.
FIGURA 1. Morfología de las colonias bacterianas
Hemólisis en agar sangre:
Alfa Hemólisis: Lisis parcial de los eritrocitos que rodean las colonias, que
produce un cambio de color gris verdoso del medio de cultivo.
Beta Hemólisis: Lisis completa de los glóbulos rojos que rodean una colonia, que
produce la eliminación total de la sangre del medio de cultivo.
Gamma Hemólisis: Ausencia de hemólisis y en consecuencia ninguna alteración
del color del medio alrededor de la colonia. Los microorganismos que coproducen
hemólisis se denominan “no hemolíticos” en lugar de γ-hemolíticos.
Alfa prima: halo de lisis incompleta inmediatamente por fuera de las colonias, con
una segunda zona de hemólisis completa en la periferia.
Producción de pigmentos en medios de agar.
Pigmentos hidrosolubles que colorean el medio como pigmentos fluorescentes
que se ven con una lámpara de luz ultravioleta. Pseudomonas aeruginosa,
Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas pútida producen pioverdina que es un
22

26. pigmento amarillo y solo una especie de Pseudomonas aeruginosa producen
piocianina que es de color azul turquesa, otras producen pigmento rojo llamado
piorrubina o piomelanina de color marrón. Pigmentos no difundibles limitados a las
colonias como en el caso de algunas cepas de Staphylococcus aureus sus
colonias pueden ser pigmentadas de amarillo o naranja que puede tornarse
evidente después de incubar a temperatura ambiente.
3.3 Aislamiento de bacterias.
Habitualmente se han identificado las bacterias por sus cultivos y
características bioquímicas. Muchos métodos diagnósticos requieren el
aislamiento y cultivo de las bacterias para determinar la etiología correcta de la
enfermedad infecciosa. Habitualmente se reconoce la presencia de crecimiento
bacteriano por el desarrollo de colonias sobre medio sólido o de turbidez en medio
líquido.
El tiempo necesario para que se produzca crecimiento visible es una
variable importante en el laboratorio clínico. Por ejemplo, la mayoría de las
bacterias patógenas sólo necesitan algunas horas para producir crecimiento
visible, mientras que las micobacterias pueden tardar semanas para que el
crecimiento sea evidente.
La identidad inicial de un organismo bacteriano puede ser sugerida por:
1. La procedencia de la muestra de cultivo.
2. Su aspecto microscópico y la tinción de Gram.
3. Su patrón de crecimiento en medios selectivos, diferenciales,
enriquecidos.
4. Sus propiedades hemolíticas, metabólicas y de fermentación en los
diversos medios de cultivo
Después de examinar las características microscópicas y de crecimiento de
un cultivo bacteriano puro (características macroscópicas), se pueden
realizar pruebas bioquímicas específicas para identificar bacterias aisladas.
23

27. Para identificar bacterias en las muestras se utilizan claves dicotómicas
clásicas con las pruebas bioquímicas. En general son necesarias menos de 20
pruebas para identificar las bacterias aisladas en la clínica hasta el nivel de
especie.
24

28. 3.4 Métodos rápidos de identificación.
La microbiología clínica se ha beneficiado mucho de los progresos
tecnológicos en equipos, programas informáticos y bases de datos, biología
molecular e inmunoquímica. En lo que respecta a los métodos de
25

29. identificación rápida para detección de microorganismos en muestras, se
pueden dividir en tres categorías:
1. Sistemas bioquímicos manuales.
2. Sistemas mecanizados /automatizados.
3. Sistemas inmunológicos.
Uno de los sistemas bioquímicos manuales más populares de
identificación rápida de los miembros de la familia Enterobacteriaceae y
otras bacterias gram negativas es el sistema API 20 E.
Consiste en una tira de plástico con 20 microtubos que contienen
sustancias deshidratadas que pueden detectar ciertas características
bioquímicas. Los sustratos de la prueba de los 20 microtubos se inoculan
con un cultivo puro de bacterias suspendidas homogéneamente en solución
salina fisiológica estéril, incubar de 5-24 horas, los resultados de las 20
pruebas se convierten en un perfil de 7 o 9 cifras, este numero se emplea
para encontrar el nombre de la bacteria con la ayuda de un ordenador o un
libro denominado Indice de perfil API (figuras de galerias de API 20 E)
. Otros sistemas multipruebas miniaturizados que se utilizan son el
Sistema API 20 STREP (Streptococcus), Sistema API 50 CH (Bacillus),
Sistema API STAPH (Staphylococcus y Micrococcus) (3,6).
- - - + - - + + - - - + - - - - - - - -
0 1 3 4 0 0 0
Proteus mirabilis
+ - + + - - - - + - - + + - + + - + - +
5 1 4 4 5 5 2
Escherichia coli
26

30. + - + + + - - - - + + + + + + - + + + +
5 3 0 7 7 6 3
Serratia marcescens
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
AGAR TRIPLE AZUCAR (TSI)
Alk/NC: Alcaligenes faecalis
Alk/A : Shigella flexneri
Alk/A, H2S: Salmonella typhimurium
A/A: Escherichia coli
A/A, H2S: Proteus vulgaris
UC: Control sin inocular
27

31. LISINA DESCARBOXILASA
TUBO 1) CONTROL SIN INOCULR
TUBO 2) LISINA DESCARBOXILASA NEGATIVO
TUBO 3) LISINA DESCARBOXILASA POSITIVO
TUBO 4) LISINA DESAMINASA POSITIVO
a)PRUEBA POSITIVA: púrpura (mas oscuro en el fondo del tubo) turbio a un púrpura amarillento apagado
b)PRUEBA NEGATIVA: color amarillo claro y brillante (solamente fermentado por la glucosa)
LISINA DESAMINASA POSITIVO: Pico de flauta rojo sobre fondo amarillo
LISINA DESAMINASA NEGATIVO: Sin cambio en el tubo inoculado
MEDIO SIM: PRUEBA DE INDOL
PRODUCCIÓN DE H2S EN SIM
INDOL POSITIVO: Escherichia coli (Reactivo de Kovacs)
INDOL NEGATIVO: Enterobacter aerogenes H2S POSITIVO:Proteus vulgaris
CONTROL TUBO SIN INOCULAR H2S NEGATIVO: Escherichia coli
Tubo control sin inocular
28

32. PRUEBA DE MOTILIDAD O MOVILIDAD
MÓVILES: Desarrollo difuso hacia fuera de
la línea de siembra
GELATINA POSITIVA: Pseudomonas aeruginosa
INMÓVILES: Crecen solamente a lo largo de GELATINA NEGATIVA: Alcaligenes faecalis
la línea de siembra HIDRÓLISIS O LIQUEFACCIÓN DE LA GELATINA NUTRITIVA
CALDO UREA
Ureasa positivo: Proteus vulgaris
Ureasa negativo: Escherichia coli
VP NEGATIVO:Escherichia coli
Control sin inocular
VP POSITIVO: Enterobacter aerogenes
α-Naftol al 5% 0.5 ml y KOH al 40% 0.2 ml
CALDO MR/VP, PRUEBA DE VOGES-PROSKAUER
29

33. PRUEBA DE ROJO DE METILO
ROJO DE METILO POSITIVO: Escherichia coli
ROJO DE METILO NEGATIVO: Enterobacter aerogenes
Control sin inocular
UTILIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS EN CALDO ROJO DE FENOL CON GLUCOSA
I: Inerte Alcaligenes faecalis
A: Acido Serratia marcescens
AG: Acido y Gas Escherichia coli
UC : Control sin inocular
CALDO ROJO DE FENOL CON LACTOSA
AG: Ácido y Gas Escherichia coli PRUEBA DE FENILALANINA DESAMINASA
I: Inerte o Alcalino Alcaligenes faecalis POSITIVO : Proteus vulgaris
UC: Control sin inocular NEGATIVO: Escherichia coli
CALDO ROJO DE FENOL CON LACTOSA Control sin inocular
(Agar fenilalanina inoculado, adicionar 2 a 3 gotas
de cloruro férrico)
30

34. 1 2 3 4 1 2 3 4
1) Indol Positivo 1) Indol Negativo
2) Rojo de Metilo Positivo 2) Rojo de Metilo Negativo
3) Voges-Proskauer Negativo 3) Voges-Proskauer Positivo
4) Citrato de Simmons Negativo 4) Citrato de Simmons Positivo
1 2 1 2 3
1) Prueba de Oxidasa Positiva 1) Caldo Nitrato Positivo
2) Prueba de Oxidasa Negativa 2) Caldo Nitrato Negativo Gas +
3) Caldo Nitrato Testigo
Acido Sulfanílico (3 gotas) +
α-Naftilamina (2 gotas)
31

35. Un sistema mecanizado/automatizado popular es BIOLOG (figura 34.9).
Este sistema identifica microorganismos basándose en su capacidad para
catabolizar 95 fuentes de carbono diferentes. El sistema puede identificar más de
1100 bacterias gramnegativas y grampositivas, así como levaduras.
Las pruebas bioquímicas que se realizan para los grupos bacterianos se
basan en la utilización se sustratos, formación de productos metabólicos y
fermentación de azúcares. Alrededor de un 60% o más de los patógenos comunes
se identifican por pruebas metabólicas. Prueba bioquímica se le llama a cualquier
reacción que pone en evidencia la presencia o ausencia de una enzima, vía
metabólica o alguna otra propiedad característica de una especie.
3.5. Técnicas inmunológicas.
Puede no ser posible cultivar ciertos virus, bacterias, hongos y protozoos de
muestras clínicas por no estar desarrollada la metodología necesaria, por ser
peligroso o por no ser factible, salvo para algunos pocos laboratorios de
microbiología clínica. Los cultivos pueden ser también negativos por un
tratamiento antimicrobiano previo o por el carácter crónico de la infección en el
paciente, En estas circunstancias, puede tener bastante valor diagnóstico la
detección de anticuerpos o de antígenos.
Los sistemas inmunológicos de detección e identificación de patógenos en
muestras clínicas son fáciles de usar, las reacciones terminan con relativa rapidez,
y son sensibles y específicos (dan un bajo porcentaje de falsos positivos y
negativos).
La respuesta inmunológica de cada individuo a un microorganismo es bastante
variable. El resultado es que la interpretación de las pruebas inmunológicas es en
ocasiones difícil. Por ejemplo, un único título elevado de anticuerpos no suele
diferenciar entre infecciones activas y pasadas. Además, la ausencia de un título
mensurable de anticuerpos puede reflejar tanto la ausencia de inmunogenicidad
32

36. de un microorganismo como que ha transcurrido un lapso de tiempo insuficiente
como para que se desarrolle una respuesta de anticuerpos desde el inicio de la
enfermedad infecciosa. Además algunos pacientes pueden estar
inmunodeprimidos a causa de otro proceso patológico o como consecuencia del
tratamiento (por ejemplo, pacientes con cáncer y SIDA) y por ello no responden.
Por estas razones, para una correcta interpretación de las pruebas inmunológicas,
es esencial una adecuada selección del tipo de pruebas y el momento de la toma
de muestra.
Las técnicas inmunológicas más empleadas para detectar microorganismos
en muestras clínicas son: la inmunofluorescencia directa, la fijación del
complemento, neutralización, aglutinación, inmunoelectroforesis e inmunoanálisis.
Una de las técnicas inmunológicas que más se emplea en el laboratorio de
microbiología clínica es la inmunotransferencia, la cual implica una electroforesis
en gel de poliacrilamida de una muestra de proteínas seguida de la transferencia
de las proteínas separadas a hojas de nitrocelulosa (fig. 15.5). Las bandas de
proteínas se visualizan al tratar las hojas de nitrocelulosa con soluciones de
anticuerpos marcados con colorantes. Este procedimiento demuestra la presencia
de proteínas comunes y específicas en diferentes cepas de microorganismos.
Otra nueva técnica inmunológica emplea liposomas, que son vesículas
esféricas microscópicas formadas por una bicapa lipídica que encierra un
compartimiento acuoso que contiene un colorante. Después se sensibiliza el
liposoma ligando a su superficie un anticuerpo específico. Se unen anticuerpos
específicos contra el patógeno deseado a una membrana (para una mejor
visualización esta membrana suele tener una determinada forma, como por
ejemplo un triángulo.
Después se añade una muestra del paciente al pocillo de reacción (fig. 34.11
a), y el antígeno se liga de forma instantánea a los anticuerpos de captura.
Cuando se añaden los liposomas sensibilizados llenos de colorante (fig 34.11 b) y
se ligan al antígeno inmovilizado (fig. 34.11.c), la formación de un triángulo (u otra
forma) indica la positividad de la reacción (fig. 34.11 d).
Si la muestra es negativa y no contiene el antígeno, no se produce unión en
la zona de reacción cuando se añaden los liposomas, y aparece una zona en
blanco. En la actualidad se dispone de pruebas de liposomas para los
estreptococos del grupo A y el virus sincitial respiratorio.
33

37. 34

38. 3.6 Tipificación con bacteriófagos.
Los bacteriófagos son virus que atacan a los miembros de una determinada
especie bacteriana. La tipificación con bacteriófagos se basa en la especificidad
de los receptores superficiales de los fagos para los receptores de la superficie
celular. Sólo aquellos bacteriófagos que se pueden unir a estos receptores
superficiales pueden infectar la bacteria y causar lisis. Sobre un cultivo en placa de
petri, los bacteriófagos líticos causan calvas sobre céspedes bacterianos
sensibles.
En la tipificación con bacteriófagos, el microbiólogo clínico inocula la bacteria
objeto de la prueba sobre una placa de petri. La superficie se inocula de forma
abundante y uniforme con un hisopo de algodón estéril, de forma que la bacteria
se multiplique formando una cubierta continua o césped de células. No se deben
dejar zonas sin inocular. Después se marcan cuadrados en la placa de 15 a 20
mm de lado y cada cuadrado se inocula con una gota de suspensión de los
diferentes fagos disponibles para realizar la tipificación. Después de incubar la
placa durante 24 h, se observa la presencia de calvas. La tipificación con fagos
continúa siendo una técnica de laboratorio de investigación y de referencia.
3.7 Métodos moleculares.
Con la aplicación de la nueva tecnología molecular es posible en la
actualidad analizar las características moleculares de los microorganismos en el
laboratorio clínico. Algunos de los enfoques más precisos de identificación
microbiana son a través del análisis de proteínas y ácidos nucleicos. Otros tres
35

39. métodos moleculares que se usan ampliamente son las sondas de ácidos
nucleicos, la cromatografía gas-líquido, y la <<huella digital>> de plásmidos.
La técnica de análisis de huellas dactilares de plásmidos comprende cinco
pasos:
1. Se cultivan las cepas bacterianas en caldo o en placa de agar.
2. Se recolectan las células y se lisan con detergente.
3. El DNA de los plásmidos se separa del DNA cromosómico.
4. El DNA plasmídico se aplica a geles de agarosa y se separa por
electroforesis.
5. El gel se tiñe con bromuro de etidio, que se liga al DNA, provocando
fluorescencia con luz ultravioleta. Después se localizan las bandas de
DNA plasmídico.
Debido a que la tasa de migración del DNA de plásmidos en agarosa es
inversamente proporcional al peso molecular, los plásmidos de diferente tamaño
se presentan como bandas diferenciadas en el gel teñido. El peso molecular de
cada especie de plásmido se puede determinar mediante una gráfica enfrentando
la distancia de migración de cada especie con los pesos moleculares de plásmidos
marcadores de tamaño conocido sometidos simultáneamente a electroforesis en el
mismo gel (6) .
3.8 Métodos de identificación semiautomatizados y automatizados.
Los sistemas de identificación BBL Crystal no fermentadores/entéricos
contienen un taparrecipiente con 30 sustratos deshidratados en los extremos de
dientes plásticos. Se prepara una suspensión para el ensayo y se agrega a todos
los pocillos en la base de la unidad. La tapa se alinea con la base y se cierra,
mientras que el inóculo rehidrata las sustancias secas e inicia las reacciones de
las pruebas. Luego de la incubación, los paneles se leen desde abajo utilizando el
transiluminador BBL Cristal. Los pocillos se examinan para el cambio de color, y
se genera un perfil numérico de 10 dígitos que es introducido a una computadora
que tiene instalado el codificador BBL Crystal Electronic, a fin de obtener la
identificación.
Tubos Enterotube 11 después de 18 a 24 horas de incubación a 35°C. Las
reacciones de color pueden ser interpretadas visualmente y convertirlas al número
biotípico usando una hoja de trabajo similar a la del API 20 E. El Enterotube 11 se
inocula fácilmente removiendo la tapa plástica de un extremo y tocando con la
punta del ansa que viene en dicha tapa la parte superior de una colonia aislada a
identificar. Atravesar la longitud total del tubo con el ansa, transfiriendo de esta
manera colonias de la punta del ansa a cada uno de los compartimientos con
medio.
Sistema Biolog GN Microplate, consistente en microplacas de 96 pocillos
que contienen 95 sustratos de carbono y un colorante de tetrazolio como indicador
redox. Si un sustrato de carbono es utilizado por la bacteria inoculada, el colorante
36

40. incoloro se reduce en forma irreversible y da un color púrpura. Con el uso de una
pantalla de computadora, los pocillos purpúreos se codifican como positivos y los
incoloros como negativos. La computadora compara la “huella digital metabólica”
del microorganismo inoculado con la que está almacenada en una base de datos,
y genera la identificación más probable.
Panel MicroScan gramnegativo. Los microtubos son inoculados con una
suspensión importante del microorganismo a ser identificado, y se incuban a 35°C
por 15-18 horas. Los paneles pueden ser interpretados visualmente, los resultados
bioquímicos son convertidos en números biotípicos de siete u ocho dígitos, que se
buscan en un libro de códigos suministrado por el fabricante. También puede
utilizarse un lector automático de placas, combinado con un sistema de
identificación por computadora. Estos paneles también pueden ser usados con el
sistema instrumental automatizado MicroScan Walkaway.
Sistema Vitek, consiste de un módulo generador de vacío, lector-incubador,
computadora-impresora y un monitor de computadora. Este sistema es usado con
tarjetas de ensayos Vitek para identificación bacteriana y pruebas de
susceptibilidad a antibióticos totalmente automatizados.(3,6)
IV PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE INTERÉS MÉDICO.
Cocos Grampositivos
Con excepción de las Enterobacterias, las bacterias gram positivas
especialmente los cocos, son los microorganismos aislados con mayor frecuencia
a partir de muestras clínicas humanas en el laboratorio de microbiología. La
amplia distribución de las bacterias grampositivas en la naturaleza hace algo difícil
la interpretación de su recuperación a partir de muestras clínicas humanas, a
menos que haya manifestaciones clínicas clásicas de un proceso infeccioso. Los
cocos gram positivos producen una variedad de enfermedades que incluye
foliculitis, furúnculos, carbunco, abscesos (estafilococos), faringitis, endocarditis,
erisipela y celulitis (estreptococos) y neumonía y bacteriemia (neumococos). Por lo
tanto, su recuperación a partir de muestras clínicas siempre debe correlacionarse
con el cuadro clínico del paciente antes de que pueda establecerse su papel en la
etiología de un proceso infeccioso.
4.1 Género Micrococcus.
La familia Micrococcaceae incluye cuatro géneros: Planococcus,
Micrococcus, Stomatococcus y Staphylococcus.. Los estafilococos muestran
relación genética con los estreptococos, los enterococos, los lactobacilos y el
género Bacillus. Los miembros de la familia Micrococcacea pueden diferenciarse
por la prueba de la catalasa, de los miembros de la familia Streptococcaceae que
son catalasa-negativos.
Prueba de la catalasa:
37

41.  Objetivo: Separar la familia Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros
Streptococcus y Enterococcus (catalasa-).
 Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno
(H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta
manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H 2O2, que es un
producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.
PRUEBA DE LA CATALASA
CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS MICROCOCCUS
• Son comunes en el medio ambiente.
• Son células esféricas de aproximadamente 8-12 Mm de diámetro, son
Gram-positivas y se pueden encontrar solos, en pares o tétradas.
• Son aerobios obligados.
• Tienen pronunciada diferencia en la composición del ADN con los
Staphylococcus.
• Los micrococos parecen ser inofensivos, aunque son útiles indicadores de
contaminación.
38

42. Los micrococos son oxidantes y producen ácido de la glucosa solamente en
presencia de oxígeno.
No tienen importancia clínica.
Micrococcus
COLONIAS DE Micrococcus
39

43. 4.2 Género Staphylococcus.
Se compone actualmente de 33 especies, 17 de las cuales pueden ser
encontradas en muestras clínicas humanas (cuadro 11-1). Los estafilococos se
encuentran generalmente en la piel y las mucosas del hombre y otros animales.
Por ejemplo, S. capitis se encuentra como integrante de la flora humana normal de
la piel y las glándulas sebáceas del cuero cabelludo, la frente y el cuello, en tanto
que S. auricularis se encuentra en el conducto auditivo externo. Entre los
estafilococos la especie coagulasa- positiva S. aureus y dos especies coagulasa
negativas S. epidermidis y S. saprophyticus, se encuentran con frecuencia en
infecciones humanas. Los estafilococos son células esféricas Gram positivas que
suelen estar distribuidas en grupos irregulares a manera de racimo de uvas,
fermentan los carbohidratos y producen pigmentos que varían desde el color
blanco hasta el amarillo intenso. Algunos son miembros de la flora normal, otros
producen supuración, formación de abscesos, diversas infecciones e incluso
septicemia mortal. Los estafilococos patógenos hemolizan la sangre, coagulan el
plasma y producen diversas enzimas y toxinas extracelulares. Un tipo común de
envenenamiento alimentario es producido por una enterotoxina estafilocócica
termoestable. Los estafilococos desarrollan con rapidez resistencia a muchos
agentes antimicrobianos y plantean problemas terapéuticos difíciles.
Staphylococcus aureus es un microorganismo positivo a la coagulasa y
patógeno de gran importancia para el ser humano ya que causa muchas
infecciones graves, Se encuentra en el ambiente externo y en las narinas
anteriores del 20 al 40 % de los adultos. Otros sitios de colonización son los
pliegues cutáneos, las axilas y la vagina. Los estafilococos negativos a la
coagulasa constituyen parte de la flora humana normal: Staphylococcus
epidermidis produce a veces infecciones de los dispositivos protésicos y
Staphylococcus saprophyticus puede producir infecciones en vías urinarias en
mujeres jóvenes.
Los Staphylococcus son células esféricas de cerca de 1 µm de diámetro
distribuidas en grupos irregulares, en los cultivos líquidos se encuentran cocos
aislados, en pares, en tétradas y en cadenas. Son microorganismos no móviles y
no forman esporas, crecen con mayor rapidez a 37 °C, pero forman mejor el
pigmento a la temperatura ambiente (20 a 25 °C), las colonias desarrolladas en
medios sólidos son redondas, lisas, elevadas y resplandecientes, S. aureus forma
colonias de color gris a amarillo dorado intenso, las colonias de S. epidermidis son
de grises a blancas en el aislamiento primario, muchas colonias desarrollan
pigmentos solo tras la incubación prolongada.
40

44. PRUEBA DE LA COAGULASA
Los estafilococos producen catalasa (+), lo que los distingue de los
estreptococos, fermentan con lentitud muchos carbohidratos y producen ácido
láctico pero no gas. Estos microorganismos son relativamente resistentes a la
desecación, el calor (soportan 50 °C durante 30 minutos) y el cloruro de sodio al
9 %.Dentro del género Staphylococcus se localizan actualmente 6 especies, son
las que poseen un mayor significado en el campo de la salud pública: S. aureus,
S. epidermidis, S. haemolyticus, S. saprophyticu,S. lugdunensis y S. schleiferi. La
primera es la única coagulasa positiva y las restantes junto con las que no se
mencionan integran el grupo de los estafilococos coagulasa negativa.
Las colonias estafilocóccícas de acuerdo a la composición de los medios,
su diámetro fluctúa entre los 2 y 4 mm; son convexas, de bordes regulares y de
consistencia butirácea y su coloración varía desde el blanco hasta el dorado en
gelosa sangre y en las formulaciones que contienen teluritos, tales como el Baird
Parker y el Vogel Jonson, las colonias son circular de de 2 a 3 mm de color negro.
El S. aureus en el agar sal y manitol, las colonias se rodean por halos
amarillos, debido a que ocurre fermentación del manitol, por la producción de la
enzima manitolasa y su indicador rojo de fenol adquiere esa coloración al disminuir
el pH. En el agar 110, tras 24 horas de incubación a temperatura ambiente las
colonias manifiestan un color amarillo dorado, al producirse un pigmento no
hidrosoluble constituido por derivados de xantina.(2,3)
Staphylococcus aureus es el patógeno humano más importante entre los
estafilococos. Aunque este microorganismo forma parte de la microflora humana
normal, puede producir infecciones oportunistas importantes. Algunos factores que
pueden predisponer a un individuo a infecciones graves por S. aureus son por
ejemplo: Diabetes mellitus, artritis reumatoide, lesiones cutáneas, presencia de
cuerpos extraños (catéteres intravenosos, prótesis, suturas), tumores malignos,
alcoholismo. Se aísla con frecuencia de heridas quirúrgicas infectadas, las que
41

45. pueden funcionar como focos para el desarrollo de infecciones sistémicas
potencialmente fatales.
S. aureus que es la única especie dentro del Género Staphylococcus que
posee DNAsa de las otras especies.
Prueba de la Desoxirribonucleasa:
Fundamento: Determina la presencia de la enzima termoestable DNAsa
que es capaz de romper los enlaces fosfodiester internos de la molécula
de DNA. Se utiliza un medio sólido que contiene verde de metilo el cual se
combina con DNA altamente polimerizado. Cuando la combinación no ocurre, por
acción de la enzima DNAsa, se produce una decoloración del medio.
Procedimiento: Se siembra una colonia de estafilococo en forma de moneda en
una placa de medio sólido que contiene DNA y verde de metilo.
Se incuba 18 horas a 35º.
Interpretación de resultados
Para su identificación, utilizar API STAPH y Pruebas Bioquímicas
Convencionales (1,2,3,5).
42

46. IMÁGENES DE Staphylococcus
Staphylococcus aureus
Características Cocos grampositivos, células en grupos
(capacidad de dividirse en más de un plano),
miden alrededor 0.8- 1µm de diámetro, algunas
cepas producen cápsulas, no son sensibles, su
respiración es aeróbica y anaeróbica.
Identificación de laboratorio Colonias blancas o doradas en agar sangre, 2-4
mm., catalasa positivo, coagulasa positivo, la
mayor parte de las cepas fermentan el manitol.
Pruebas bioquímicas. API Staph, MicroScan.
Etc.
Enfermedades Forúnculos, sepsis cutánea, infección de herida
postoperatoria, síndrome de la piel escaldada,
infección asociada al catéter, infección
transmitida por alimentos, septicemia,
endocarditis, síndrome del shock tóxico,
osteomielitis, neumonía. Las infecciones
urinarias se adquieren con mayor frecuencia por
vía exógena ascendente, es decir, a través de
uretra, avanzando hacia vejiga y llegar a riñón,
desde donde pueden invadir torrente circulatorio.
Transmisión Hábitat normal: seres humanos (y animales
asociados con ellos), piel, especialmente la
nariz. La transmisión es por contacto y vía aérea.
Sobrevive a la desecación, tolera sales y nitritos.
Marcadores epidemiológicos Tipificación mediante bacteriofagos.
43

47. Patogenia Virulencia multifactorial ya que las cepas
contienen factores como Mucopéptido y
Coagulasa. Y algunas cepas contienen cápsula,
proteína A, proteína ligadora de fibronectina,
proteínas ligadoras de colágena, Producen
productos extracelulares: enterotoxina, toxina del
síndrome del Shock tóxico, toxinas que lesionan
las membranas (hemolisinas), leucocidina,
estafilocinasa.
Tratamiento Los antibióticos de elección son las proteínas
estables frente a beta-lactamasas (80% aislados
de hospitales producen beta-lactamasas). La
resistencia a meticilina es un problema local y en
este caso se indica la vancomicina. La
mupirocina puede utilizarse para tratamiento
tópico. Prevención de la transmisión mediante
aislamiento y tratamiento de los portadores en
áreas de alto riesgo en el hospital. No se dispone
de ninguna vacuna.
Infecciones intrahospitalarias Durante la convalecencia, después de las
intervenciones quirúrgicas o de quemaduras
graves, uno de los principales riesgos de
infección de los tejidos lesionados por
microorganismos del ambiente hospitalario, que
son virulentos y resistentes a los
antimicrobianos. S aureus es uno de los más
frecuentes aislados en estas infecciones.
FACTORES DE PATOGENICIDAD:
 Adhesina: Es una sustancia proteica que favorece al anclaje de las
bacterias a la membrana citoplasmática de las células de los tejido.
 Coagulasa: Esta enzima se correlaciona con el 97% de las cepas de
S.aureus y se considera la prueba tipo para identificar esta especie, actua
transformando el fibrinógeno en fibrina formando una capa sobre la bacteria
que le protege de la fagocitocis.
 Lipasas: Son varias enzimas que actúan sobre diferentes substratos
(aceites, grasas, ceras, etc) que le permiten colonizar áreas de al piel con
altas concentraciones de esas.
 Hialuronidasa: Esta enzima actúa sobre el ácido hialurónico, presente en
el pegamento de las células de los tejidos favoreciendo asi la difusión de la
bacteria en los tejidos.
 Estafiloquinasa: Es una fibrinolisina que activa el plasminógeno, lo
transforma en plasmina y este actúa sobre la fibrina rompiendo enlaces
peptídicos que lisan la fibrina.
44

48.  Nucleasa: Es una enzima que tiene propiedades endonucleotídicas y
exonucleotídicas, puede actuar sobre el ADN y el ARN produciendo
licuación del material, es un factor de difusión.
 Toxina alfa o hemolisina alfa: Es una toxina con acción hemolítica sobre
eritrocitos de diferentes especies, lesiona las plaquetas y es
dermonecrótica.
 Toxina beta o esfingomilinasa: Actúa sobre la esfingomielina de la
membrana de los eritrocitos produciendo hemólisis en frío y en calor.
 Toxina delta o hemolisina delta: Es hemolítica lesiona linfocitos,
plaquetas y neutrófilos.
 Toxina gamma o hemolisina gamma: Produce lisis de eritrocitos de
diferentes especies.
 Leucocidina: Produce lisis de polimorfonucleares y de macrófagos, pero
no de otras poblaciones de leucocitos ni eritrocitos.
 Enterotoxinas: Se han identificado a la fecha 7 diferentes toxinas que se
denominan, A, B C1, C2, D, E y F, producen intoxicación o envenenamiento
por la ingestión de alimentos contaminados por S. aeureus que la producen
(aproximadamente el 30%)
 Exfoliatina: Es una toxina que actúa específicamente a nivel de la piel
produciendo separación del estrato granuloso de la epidermis,
desprendiéndose la piel en colgajos.
 Exotoxinas pirógenas: Se han identificado tres diferentes substancias
pirógenas que se denominan A, B y C las tres producen fiebre de diferentes
intensidades.
 Capsula: Algunas cepas de S. aureus están encapsuladas lo que le
confiere más virulencia, estas se pierden al ser cultivadas. Carecen de
coagulasa.
Staphylococcus epidermidis.
Características Como las de Staphylococcus aureus
Identificación de Colonias blancas en agar sangre, catalasa positivo,
laboratorio coagulasa negativo, no fermenta el manitol, se
identifica igual que S. aureus.
Enfermedades Agente patógeno oportunista asociado con sepsis
relacionada con dispositivos (p. ej., sepsis
relacionada con el catéter, endocarditis de válvula
protésica, infección de articulaciones artificiales,
infección de la vía urinaria, osteomielitis de la herida
esternal.
Transmisión Hábitat normal: piel. Transmisión por contacto
consigo mismo o con otro paciente o el personal del
hospital. Casi todas las infecciones se adquieren en
el hospital, pero puede ser endógena. Sobrevive a
la desecación y tolera la sal.
45

49. Marcadores Tipificación por bacteriófago
epidemiológicos
Patogenia Se piensa que la producción de limo extracelular es
un marcador de virulencia y puede ser responsable
de su capacidad para colonizar implantes de
plástico como catéteres y prótesis intravenosos.
Tratamiento y Resistencia a antibióticos: multirresistente a
Prevención penicilina y meticilina. Prevención de la infección:
cuidado del catéter, no se dispone de vacuna.
Staphylococcus saprophyticus.
Características. Como para Staphylococcus aureus
Identificación de laboratorio Colonias blancas en agar sangre, catalasa positivo,
coagulasa negativo, fermenta el manitol de forma
variable. Resistencia a novobiocina. Con los
mismos métodos que S. aureus.
Enfermedades Infección del tracto urinario en mujeres previamente
sanas (asociada con relación sexual)
Transmisión Hábitat normal: piel y mucosa genitourinaria.
Transmisión endógena al tracto urinario en la mujer
colonizada.
Marcadores Ninguno de uso habitual.
epidemiológicos
Patogenia Factores de virulencia desconocidos, pero el
microorganismo tiene la capacidad de colonizar la
piel periuretral y la mucosa.
Tratamiento y prevención La micción tras la relación sexual ayuda a lavar los
microorganismos fuera de la vejiga y evitar la
infección. ( 1,3)
Dentro de los Estafilococos coagulasa negativos la especie que se
encuentra con mayor frecuencia en las infecciones clínicas es Staphylococcus
epidermidis. En segundo término S. saprophyticus y S. haemolyticus (endocarditis
de válvulas naturales, septicemia, peritonitis, contaminaciones de heridas
traumáticas y en algunas afecciones del tracto urinario. S. lugdunensis
(endocarditis de válvulas naturales y prostéticas, septicemia, abscesos cerebrales,
osteomielitis y de otros tejidos cateterizados) y S. schleiferi ( en menor frecuencia,
agente etiológico de empiema cerebral, infecciones de heridas, septicemias con
osteítis de columna vertebral y de otras enfermedades asociadas a sondas
craneales de desagüe y a catéteres de la vena yugular, son nuevas especies que
aparecen como oportunistas que infectan los materiales de implantación, catéteres
y sondas.
46

50. Otras especies de importancia menor como S. hominis, S. warneri, S.
simulans, S. cohnii, S. saccharolyticus, S, capitis y S. xylosus, actualmente
aparecen con muy baja frecuencia en diversas infecciones humanas pero podrían
adquirir mayor relevancia en un futuro cercano. S. warneri se ha reportado como
agente causal de osteomielitis vertebral e infecciones urinarias en ambos sexos.
IMÁGENES DE Staphylococcus
ENFERMEDADES POR Streptoccoccus y Staphylococcus
47

51. ENFERMEDADES POR Staphylococcus: a) Foliculitis superficial,
b)Foliculitis profunda, c)Forúnculo, d)Antrax, e) Impétigo, f) Síndrome de la
piel escaldada
I
mpétigo por Staphylococcus
48

52. 49

53. Colonias de Staphylococcus
4.3 Género Streptococcus
Los estreptococos son cocos catalasa y oxidasa negativos, grampositivos,
esfericos, ovoides o en forma de lanceta, observados a menudo en parejas o
cadenas, debido a que se dividen en un plano, son anaerobios facultativos.
Algunas cepas necesitan CO2 al inicio de su aislamiento, pero pueden perder
estas necesidades en los subcultivos. Estas cepas CO2-dependientes se han
denominado microaerofílicas. Se encuentran distribuidos ampliamente en el
hombre y los animales, que forman parte de la flora normal, aunque algunas
especies son responsables de algunas infecciones importantes. Las células
individuales tienen de 0.5-1 µm de diámetro. Los estreptococos con importancia
médica se pueden dividir en función de su acción hemolítica en agar sangre.
Los estreptococos pueden clasificarse ampliamente de acuerdo por lo
menos con tres esquemas. Un esquema coloca los estreptococos en divisiones
fisiológicas: piógeno, viridans, láctico y enterocócico. En otro se dividen según sus
reacciones hemolíticas, las cepas que hemolizan por completo los eritrocitos en
agar sangre alrededor de sus colonias se denominan beta hemolíticas, las que
producen una hemólisis parcial son alfa hemolíticas y las que no hemolizan en
absoluto se llaman gama hemolíticas. En el tercer esquema se dividen de acuerdo
con los carbohidratos serológicamente activos (sustancia C) en los grupos de
Lancefield (Tabla 17). La identificación de estreptococos del grupo A mediante la
prueba del disco de bacitracina se realiza en forma óptima con un subcultivo puro
50

54. de colonias beta-hemolíticas, a pesar de que la aplicación directa del disco en la
placa con el cultivo primario puede proporcionar resultados fiables cuando existen
colonias beta-hemolíticas en la proximidad del disco.
El siguiente perfíl de características se usa en la mayoría de los
laboratorios:
1) Reacciones hemolíticas en agar sangre de carnero.
2) Susceptibilidad a la bacitracina disco Taxo A de 0,04 U )
3) Hidrólisis del hipurato
4) Test de CAMP
5) Reacción bilis esculina
6) Tolerancia de crecimiento en 6.5% de cloruro de sodio.
La solubilidad en bilis y la susceptibilidad a la optoquina son las
características que habitualmente se emplean para identificar S. pneumoniae.
El tipo de hemólisis producido en agar sangre es útil para la identificación
inicial de los estreptococos, existen variaciones en las reacciones hemolíticas que
se pueden presentar según las especies de animal del cual se obtenga la sangre y
el tipo de medio basal usado para la preparación del agar sangre. Estas
variaciones pueden ser evidentes con los estreptococos del grupo D. Por ejemplo,
los estreptococos del grupo D y la mayoría de especies de Enterococcus que por
lo general son no hemolíticos en agar sangre de carnero, pueden ser beta
hemolíticos cuando crecen en agar sangre humana, o alfa o no hemolíticos en
agar sangre de caballo. En la actualidad, el medio más usado para el aislamiento
primario es agar soya tripticasa con 5% de sangre de carnero, este medio brinda
reacciones hemolíticas consistentes para la mayor parte de los estreptococos.
Patrones de hemólisis
51

55. TABLA
52

56. La importancia clínica de los estreptococos en cadena.
La faringoamigdalitis estreptococcica es probablemente la de mayor
frecuencia, su principal agente etiológico es S. pyogenes y se define como una
enfermedad supurativa caracterizada por la presencia de placas blancas
purulentas y dolor en la garganta, con escalofríos, fiebre y malestar general.
Las enfermedades supurativas debidas a invasividad, las principales son:
faringoamigdalitis, sinusitis, otitis media, oftalmias, impétigo, bronquitis, neumonía,
septicemia, endocarditis, artritis, vaginitis.
ESTREPTOCOCOS BETA-HEMOLÍTICOS.
Sreptococcus pyogenes (Estreptococo del grupo A)
Características Cocos grampositivos en cadenas, células menores de 1µm
de diámetro, sin movilidad, no esporulados.
Identificación de Crecen en agar sangre, actividad hemolítica pronunciada se
potencia en
laboratorio condicipotencia en condiciones anaeróbicas), catalasa negativo. La
bacitracinabacitracinbacitracina (0,04 unidades) se utiliza como identificador,
todas todas las cepas son sensibles.
Grupos de Extracción ácida del antígeno de la pared celular que
Lancefield reacciona con antisueros específicos (conejo), en una
reacción con precipitina o aglutinación con latex. Además de
este polisacárido específico de grupo, pueden detectarse
antígenos M y T específicos de tipo que se utilizan para la
tipificación en estudios epidemiológicos.
Enfermedades Infecciones de la vía respiratoria superior, de la piel y de los
tejidos blandos, por ejemplo, faringitis, celulitis, erisipela,
linfadenitis. Las manifestaciones tóxicas son entre otras la
escarlatina. Secuelas no supurativas como glomerulonefritis
aguda y fiebre reumática, son complicaciones importantes
de las infecciones cutáneas y faríngeas.
Transmisión Hábitat normal en la vía respiratoria superior y piel de
humanos. Se transmite por gotitas aéreas y contacto. La
supervivencia en el polvo puede ser importante. Tipificación
epidemiológica de las cepas basada en proteínas M y T
útiles en los brotes.
Patogenia Elabora muchas enzimas y exotoxinas que pueden ser
importantes para la infección: toxina eritrogénica (mediada
por fago lisogénico); estreptolisinas, estreptocinasa A y B
(aplicaciones terapéuticas).
53

57. Tratamiento y La penicilina es el fármaco de elección. No se dispone de
prevención vacunas. La eritromicina es una alternativa para pacientes
alérgicos a la penicilina, pero la resistencia a este fármaco
esta aumentando.
Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae
(sensibilidad a bacitracina y vanco- (resistencia a bacitracina y optoquina;
micina; resistencia a optoquina) sensibilidad a vancomicina)
Streptococcus agalactiae (ESTREPTOCOCO DEL GRUPO B).
Características Cocos gram positivos en cadena
Identificación de Beta-hemolítico en agar sangre, colonias mayores que las
laboratorio de Streptococcus pyogenes, con frecuencia pigmentadas en
agar columbia al incubar en forma anaeróbica. Las pruebas
bioquímicas incluyen la hidrólisis con hipurato (positivo), la
hidrólisis con esculina (negativa), posee el antígeno capsular
del grupo B de Lancefield.
Enfermedades Meningitis neonatal y septicemia.
Transmisión Hábitat normal: intestino y vagina. Los niños pequeños
adquieren el microorganismo a partir de la madre colonizada
en el nacimiento o por contacto transmitido entre niños en
guarderías.
54

58. Patogenia No se han identificado claramente los factores de virulencia.
Tratamiento y Sensible a la penicilina, pero menos que el S. pyogenes,
prevención combinación de penicilina y gentamicina para infecciones
graves. La detección selectiva en mujeres embarazadas no
es fiable, pero se pueden administrar antibióticos a los
niños, especialmente a los prematuros de portadoras.
PRUEBA DE CAMP POSITIVA, Resistencia a Bacitracina, Optoquina y
Trimetropin/Sulfametoxasol
Otros estreptococos beta-hemolíticos con importancia médica:
Los estreptococos de los grupos C y G pueden a veces causar faringitis, los
estreptococos del grupo D ahora se reclasifican en el género Enterococcus.
Streptococcus milleri: Un estreptococo microaerófilo que forma pequeñas
colonias y posee los antígenos F o G del grupo de Lancefield. Tiene tendencia a
formar abscesos, especialmente en el hígado y el encéfalo.
55

59. ESTREPTOCOCOS ALFA-HEMOLÍTICOS.
Estreptococos orales:
Existen otras especies de estreptococos alfahemolíticos que en el pasado
se agruparon como estreptococos viridans. Estos y algunos de los estreptococos
no hemolíticos se han vuelto a clasificar. La mayor parte de las especies son
comensales de la boca. Streptococcus mutans se asocia con la caries dental.
Varias especies son capaces de causar endocarditis bacteriana. Todos son
sensibles a la penicilina. Es importante distinguirlos de Streptococcus pneumoniae
en cultivos procedentes de la vía respiratoria. (2,3,4)
Streptococcus pneumoniae
Características Cocos grampositivos que tienen un aspecto
característico en parejas, células de alrededor de 1µm, a
menudo capsuladas, necesitan sangre o suero para
crecer, su respiración puede ser aeróbica o anaeróbica,
el crecimiento puede potenciarse con CO2.
Identificación de Colonias alfahemolíticas en agar sangre, catalasa
laboratorio negativo, sensible a la bilis y a la optoquina (clorhidrato
de etil hidrocupreína.
Enfermedades Neumonía, septicemia y meningitis. Otitis e infecciones
relacionadas en niños. El tipo capsular se asocia con
frecuencia a neumonía.
Transmisión El hábitat normal es la vía respiratoria humana, hasta el
4% de la población puede ser portadora. La transmisión
es a través de gotitas respiratorias.
Patogenia La cápsula protege al microorganismo de la fagocitosis.
La neumolisina puede desempeñar un papel como factor
de virulencia, pero hasta la fecha no se conocen
exotoxinas. La infección vírica puede ser un precursor de
la neumonía.
Tratamiento y La penicilina sigue siendo el antibiótico de elección, pero
prevención la resistencia está aumentando con rapidez en algunos
países y deben realizarse pruebas de sensibilidad para
guiar el tratamiento.
56

60. SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA de S. pneumoniae
57

61. Clasificación de las enfermedades causadas por
estreptococos en cadena
Debidas a Faringoamigdalitis,
Invasividad (1) Sinusitis, otitis
media, oftalmias,
bronquitis, artritis
impétigo, neumonía,
septicemia,
Enfermedades endocarditis.
supurativas
Fiebre
escarlatina (2)
Erisipela (2)
Debidas a
toxigenicidad
Síndrome del
choque tóxico
(3)
Estreptococcicas
Fiebre
reumática (4)
Secuelas no
supurativas,
postestreptococcicas
o enfermedades Glomérulo-
autoinmunes nefritis
CLAVE: 1 = Son numerosas y se encuentran citadas en el texto; 2 = Se
deben a la acción de la toxina eritrogénica; 3 = Ocasionada por toxinas
pirogénicas estreptocóccicas; 4 = Puede manifestarse como endocarditis
autoinmune y/o como artritis autoinmune
58