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1. IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS
ELABORADO POR :
M.SC. ROGER RONALD PEREZ AQUINO

2. Bioseguridad
Control de
Procedimientos
invasivos
Limpieza
y desinfección
Vigilancia
Epidemiológica
Manejo de
Residuos Sólidos
Control de uso
de Antimicrobianos

3. Calidad de Servicio
Participación en
el Comité de
IIH
Aislamiento
identificación de
Patógenos
Control de
desinfección
y esterilización
Alerta de
Brotes
Investigación
de Brotes
Vigilancia
de la Resistencia
a Antimicrobianos

4. DEFINICION
Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y
procedimientos del laboratorio de microbiología, que se aplican para la
transferencia de un microorganismo, de un ambiente a otro con la
finalidad de inducir su crecimiento, para su respectiva identificación.
Estas técnicas se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:
 En el área clínica donde es de mucha importancia conocer cual es el agente causal de la
infección, que presenta un paciente, de tal manera que se lo pueda tratar con agentes
terapéuticos acordes a la identificación del GERMEN.
 En investigación básica, donde se aísla un determinado microorganismo que debe
identificarse para comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno
nuevo, para poder clasificarlo.

5. Para realizar la identificación o aislamiento bacteriano, se debe tomar
muestras de distintos lugares.
La muestra se debe tomar o sacar del sitio donde el microorganismo o
bacteria, está causando el daño, o donde se multiplica.
Algunos ejemplos de muestras que se utilizan en microbiología clínica
tenemos: heces, orina, hisopado faríngeo, líquido cefalorraquídeo, sangre,
lágrimas, semen, fluido vaginal, herida operatoria , sonda vesical, etc.
La técnica de manera general para tomar muestra, mayormente se usa el
hisopado. Aunque existen otras.
OBTENCIÓN DE MUESTRA

6. • Con el objetivo de identificar el agente etiológico responsable del proceso infeccioso
y para conocer las implicaciones patogénicas/patológicas, la evolución clínica, y
aplicar una terapia antimicrobiana eficaz.
• Dentro de la práctica rutinaria diaria, el laboratorio de microbiología aplica
técnicas fenotípicas que permiten lograr este objetivo.
Y para cumplir el objetivo, posterior a la toma de muestras se debe
realizar el cultivo para llegar a la identificación o aislamiento bacteriano

7. MEDIOS DE CULTIVO - DEFINICION
Se trata de sustrato liquido, semisólido o sólido que contiene
todos los nutrientes necesarios para el desarrollo y crecimiento
de gérmenes.
 FUENTES DE ENERGIA: CARBONO, NITRÓGENO, FOSFORO,
AZUFRE Y DIFERENTES MINERALES.
 PH
 LUZ
 TEMPERATURA
 ESTERILIDAD
 RECIPIENTES ADECUADOS

8. PRINCIPIOS DEL CULTIVO
MICROBIOLOGICO
Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes
en una muestra clínica.
Determinar que bacterias entre las que se desarrollan tienen mas
probabilidades de ser las causantes de la infección y cuales son sus
posibles contaminantes, flora habitual o colonizadores.
Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de importancia
clínica para permitir su identificación y su caracterización.

9. LOS MEDIOS DE CULTIVO SE
PREPARAN:
1. En el laboratorio a partir de sus diferentes componentes.
2. A partir de productos en polvo deshidratados comerciales o
3. Pueden adquirirse medios listos para su uso.
SE PUEDE TOMAR COMO BASE EL DOCUMENTO
ISO 7218:1996(E) MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFF-
GENERAL RULES FOR MICROBIOLOGICAL EXAMINATIONS PARA:
- LA PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS.
- TIEMPOS DE ALMACENAMIENTO RECOMENDADOS.

10. CONTROL DE CALIDAD
 El control de calidad en la preparación y evaluación de los
medios de cultivo es considerado como una esencial y buena
práctica de laboratorio, necesaria para mantener el nivel y la
ejecución de cualquier técnica microbiológica.
 Proceso continuo que se entiende desde las materias primas: a
través del productor hasta el producto final utilizado en las
distintas áreas de análisis y diagnostico microbiológico.

11. Una vez aislado, cultivado e identificado, puede, o no haber:
INFECCION
 Son necesarios que se unan cinco factores específicos e
inherentes al:
Microorganismo Patógeno Individuo: Huésped

12. FACTOR ESPECÍFICO: UNO
FACTOR ESPECÍFICO: DOS
 El patógeno debe ser capaz de producir una
enfermedad. (patogenicidad, virulencia).
 Un patógeno debe estar presente.
 Su sola presencia no implica que cause infección.
 Muchos microorganismos son incapaces de causar
infección en los humanos

13. FACTOR ESPECÍFICO: TRES
FACTOR ESPECÍFICO: CUATRO
 El microorganismo debe tener
una puerta de entrada o una
forma de llegar e ingresar al
organismo.
 Una dosis suficiente para causar
enfermedad

14. FACTOR ESPECÍFICO: CINCO
ES IMPORTANTE ENFATIZAR
 El patógeno debe tener un huésped suceptible.
 No todas las personas son suceptibles de
contraer una infección.
(I) Para que la transmisión de una enfermedad infecciosa ocurra, es indispensable que
todos, los cinco factores mencionados, deben estar presentes
(II) No basta que existan microorganismos patógenos en el ambiente para que
exista riesgo de infecciones, sino que
SIMULTANEAMENTE
DOSIS INFECTANTE

15. Es importante enfatizar:
(III) Esta dosis debe ponerse en contacto con la
PUERTA DE ENTRADA
(IV) Es extremadamente probable que agentes infecciosos existentes se
introduzcan en el huésped susceptible por sus sistemas
respiratorio
urinario
digestivo
reproductivo o
a través de las mucosas oral,
ocular, o nasal,
pero que NO PROVOQUE ENFERMEDAD, si esta funcionando
correctamente su….
SISTEMA INMUNOLÓGICO
De un huésped suceptible

16. TODO LO MENCIONADO, DA COMO RESULTADO A LA PRESENCIA
DE LAS INFECCIONES ASOCIADAS A LA ATENCION EN SALUD
(IAAS), LO QUE ANTES SE DENOMINABA INFECCIONES
INTRAHOSPITALARIAS
INFECCION ASOCIADAS A
CATETER URINARIO
NEUMONÍA ASOCIADA A
VENTILADOR MECANICO.
BACTEREMIA ASOCIADA A
CATETER VENOSO CENTRAL
INFECCIÓN DE SITIO-
HERIDA QUIRURGICA

17. RECOLECCION Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE
INFECCIONES ASOCIADAS A CATETER
URINARIO

18. RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE MUESTRAS ORINA
ORINA DE PACIENTES CON CATETER PERMANENTE
 Se limpiará el catéter con una gasa humedecida en alcohol o solución yodada. Dejar
secar unos minutos.
 Pinchar directamente con la aguja el catéter, por la zona desinfectada, aspirando entre
3 – 5 ml
 Enviar la muestra al laboratorio en la jeringa.

19. ORINA OBTENIDA POR PUNCION SUPRA PÚBICA
La obtención de muestras de orina por punción supra púbica se reserva
exclusivamente al personal medico especialista.
La muestra deberá ser transportada al laboratorio en la jeringa, sin trasvasar
para evitar contaminación.
IMPORTANTE…….!!!

20. CULTIVO DE ORINA
 Los microorganismos más frecuentemente implicados en la infección urinaria
no complicada son:
 Escherichia coli
 Klebsiella spp
 Otras enterobacterias
 Staphylococcus saprophyticus.
 En infección urinaria complicada
 Escherichia coli
 Klebsiella spp,
 Proteus spp
 Otras enterobacterias
 Pseudomona aeruginosa
 Acinetobacter spp
 Enterococcus spp

21. RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS DE
VIAS RESPIRATORIAS BAJAS-NAVM

22. INFECCIONES DE VIAS RESPIRATORIAS
BAJAS EN PACIENTES CON VENTILACION
MECANICA
MUESTRAS A SER ENVIADAS PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO
 ASPIRADO TRAQUEAL
 LAVADO BRONQUIAL
 MINI LAVADO BRONCOALVEOLAR
 ASPIRADO O BIOPSIA DE PULMON

23. OBTENCION DE LAS MUESTRAS DE
ASPIRADO ENDOTRAQUEAL
 La secreción se obtienen con sonda de aspiración, en pacientes
intubados.
 De valor análogo al esputo, por su contaminación con microbiota
orofaringea.
 No se debe emplear anestésicos en su obtención, por su poder
bactericida.
 El envÌo al laboratorio debe ser de inmediato, no mayor a dos
horas después de su obtención. (si no es posible se debe
conservan en refrigeración a 4°C)

24.  Una muestra se considera de calidad cuando se
observa al microscopio con aumento de 100X :
 Mas de 25 leucocitos polimorfo nucleares
por campo microscópico
 Menos de 10 células epiteliales por campo
microscópico
CALIDAD DE LAS MUESTRAS DE
ASPIRADO ENDOTRAQUEAL

25. DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE
NEUMONIA ASOCIADA A VENTILACION
MECANICA
 El diagnóstico microbiológico en este tipo de muestra puede
considerarse, poco sensible y específico debido a la contaminación de
la muestra de aspirado traqueal con microbiota orofaríngea y por la
colonización con bacilos gramnegativos que se produce en gran parte
de los pacientes hospitalizados y tratados con antibióticos.
 Únicamente se obtendrá un diagnóstico de certeza cuando se aísle un
patógeno primario que no forme parte de la microbiota comensal.

26. MUESTRAS OBTENIDAS POR
FIBROBRONCOSCOPIO
CONSIDERACIONES GENERALES:
 Son todos procedimientos médicos.
 Muestra ideal obtenida por fibrobroncoscopia
mediante cepillado bronquial por catéter protegido.
 Las muestras obtenidas deben ser enviadas
inmediatamente al laboratorio (máximo 2 horas
después de su obtención), si no es posible; conservar
en refrigeración a 4°.

27. PATOGENOS POTENCIALMENTE
ASOCIADAS N.A.V.M.
 Streptococcus neumoniae
 Haemophilus influenzae
 Moraxella Catarralis
 Pseudomona Aeruginosa
 Acinetobacter spp.
 Klebsiella pneumoniae
 Staphylococcus aureus
 Anaerobios

28. RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS PARA
DIAGNOSTICO DE INFECCIONES ASOCIADAS A
CATETER VENOSO
BACVC
SANGRE PERIFERICA SANGRE TOMADA POR EL CATETER

29. HEMOCULTIVO
INDICACIONES:
 Pacientes con fiebre > 38ºC o cuya temperatura sea inferior a 36ºC.
 Pacientes con leucocitosis o leucopenia.
 Pacientes con trombopenia o alteraciones de la coagulación de causa
no filiada.
 Pacientes con infección focal de etiología no aclarada.
 Pacientes con deterioro uni o multiorgánico, shock o inestabilidad
hemodinámica.
 Neonatos ante la mínima sospecha de infección
CONSIDERACIONES GENERALES

30. Momento de obtención de la Muestra
 Mejor momento: entre 2 hrs a 30 min antes del pico febril.
 Como este hecho es imposible de predecir con exactitud, se
recomienda :
 Extraer la muestra lo antes posible después del comienzo de la fiebre y los escalofríos
 O siempre que se sospeche de una infección grave.
 Si la bacteriemia es continua, el momento de la extracción de la
sangre es indiferente, Ej. endocarditis u otras infecciones
intravasculares y en las primeras semanas de la fiebre tifoidea
o la brucelosis.
CONSIDERACIONES GENERALES

31. Número de muestras
 Óptimo 2 a 3 hemocultivos en un período de 24 horas.,
separados por 30 a 90 minutos.
 Aumenta la probabilidad de recuperar las bacterias
 Permite diferenciar entre una bacteriemia verdadera y
una contaminación.
 O bien, obtener los dos hemocultivos al mismo tiempo,
de diferentes sitios de punción, si se trata de un
paciente que va a requerir inicio inmediato de
antimicrobianos.
 En ningún caso se recomienda la obtención de sólo un
hemocultivo
CONSIDERACIONES GENERALES

32. MANTENCIÓN Y TRANSPORTE DE LOS
FRASCOS DE HEMOCULTIVO
 La muestra debe obtenerse por punción periférica(venosa o arterial), siempre por una
nueva punción; y debe ser la primera muestra que debe obtenerse, si existe indicación de
otros exámenes.
 Mantener a temperatura ambiente y enviar inmediatamente al laboratorio. Nunca
refrigerar.
 La incubación a 35ºC debe realizarse lo antes posible, pudiendo darse como máximo de
tiempo 2 horas desde que se tomó la muestra.
EQUIPO SEMIAUTOMATIZADO BACTEC 9050

33. RETROCULTIVO Y CULTIVO DE PUNTA DE
CATETER
 Para el diagnostico se han adoptado dos estrategias básicas:
Sin retiro del Catéter (Retrocultivo)
Con retiro del Catéter (Cultivo de punta de catéter)
Manos del personal
salud
Puerta de entrada
contaminada
Fluidos contaminados
Diseminación Hematógena
Contaminación durante la
inserción
Microflora del paciente

34. RETROCULTIVO
 Consiste en la obtención de muestras para hemocultivos a través del catéter.
 Esta toma de muestra debe ir de forma simultanea con la obtención de
muestras para hemocultivos por venopunción.
 Para la obtención de la muestra se debe realizar la asepsia del catéter de la
misma manera que para el hemocultivo.
 Una vez obtenidas las muestras el envío al laboratorio debe ser de inmediato.

35. PUNTA DE CATETER
TOMA Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA
 La toma de muestra la realiza el personal de salud, de los
diferentes servicios.
 Retirar el catéter con la máxima asepsia.
 Con ayuda de pinzas y tijeras estériles, cortar los 5 cm. distales
del catéter que corresponden a la porción intravascular.
 Introducir el segmento de catéter en un recipiente estéril
correctamente identificado proporcionado por el Laboratorio.
 La muestra deberá enviarse al laboratorio en un periodo inferior
a 30 minutos. Cuando esto no sea posible deberá conservarse en
refrigeración.

36. MICROORGANISMOS AISLADOS CON MAYOR
FRECUENCIA EN INFECCIONES ASOCIADAS A CVC
Staphylococcus spp coagulasa negativa
Corynebacterium spp
Estreptococo grupo viridans
Bacilos gramnegativos no fermentadores
Enterobacterias
Enterococcus spp
Staphylococcus aureus
Candida spp

37. OBTENCION DE MUESTRAS DE HERIDA
DE SITIO QUIRURGICO
(muestras de piel y partes blandas)

38. PIEL Y TEJIDOS BLANDOS
ULCERAS Y HERIDAS SUPERFICIALES.
 Se recomienda eliminar el pus, el material necrótico y los tejidos
desvitalizados y lavar a chorro con solución fisiológica estéril.
 Con un hisopo, muestrear el tejido celular subcutáneo a lo largo de los
bordes de la herida, cubriendo un área de aproximadamente 1 cm2. No
frotar con fuerza para evitar el sangrado.
 En el caso de heridas muy secas, se recomienda impregnar el hisopo en
solución fisiológica estéril antes de la toma.
 El hisopo se introduce en un medio de transporte (Stuart)
proporcionado por el laboratorio

39. PIEL Y TEJIDOS BLANDOS
ABSCESOS
 Limpiar el sitio de punción con antiséptico y aspirar
secreción con jeringa y aguja, mínimo 0.5 ml
 Recoger el pus mediante jeringa y aguja,
aspirando preferentemente de zonas
profundas.
 Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero
fisiológico y aspirar nuevamente en la jeringa.

40.  Los hisopos se enviarán en medio
de transporte específico (Stuart).
 Las muestras se enviarán
inmediatamente al laboratorio,
preferiblemente en las dos horas
posteriores a la toma. Si el
transporte se demora, se
mantendrán a temperatura
ambiente
TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA