1. Método para la cuenta de Bacterias Aerobias en Placa (NOM-092)
Objetivo.- Estimar la cantidad de microrganismos viables en un alimento, agua potable,
pozo, purificada y leches, por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubando
aeróbicamente.
Fundamento.- Contar las colonias, que se desarrollen en el medio de elección después
de cierto tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo que cada colonia proviene
de un microrganismo de la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de
variación, algunas de ellas contables, pero sujetas a la influencia de varios factores.
Generalidades.- Definición de UFC e interpretación de resultados.
Material
Matraz Erlenmeyer de 250 ml
Agitador
Mechero Bunsen
Pipetas de 1,2,5 y 10 ml.
Propipeta
Gradilla
6 Tubos de Ensaye
Cerillos
Plumón
Algodón
Franela
Reactivos
Agar triptona extracto de levadura
Equipo
Baño María
Estufa
Cuenta colonias
Microscopio
Balanza Digital
Técnica
1. Prepara tu medio de cultivo
2. Esteriliza
3. Enfría el medio a una temperatura de 45°C aproximadamente (si puedes
introdúcelo en el baño maría para que permanezca a esa temperatura).
4. Sanitiza el área de trabajo.
5. Distribuye las cajas Petri en el área alrededor del mechero Bunsen.

2. 6. Etiqueta las cajas por duplicado indicando la dilución primaria y adicional que se
esté realizando. No olvides la caja testigo.
7. Coloca el tubo de dilución primaria y adicional frente a ti y rotúlalos con cinta
masking según la dilución que realices.
8. Mide 10 ml de la muestra e introdúcelo en el frasco (dilución primaria), agítalo.
9. Mide un ml de esta solución y colócala en la primera caja Petri que rotulaste
(inóculo).
10. Agrega el medio de cultivo que preparaste (aproximadamente entre 10 y 15 ml)
11. Mezcla el agar con la solución de la siguiente manera: 6 movimientos de derecha
aizquierda, 6 movimientos en sentido de las manecillas del reloj, 6 movimientos en
contra de las manecillas del reloj y 6 de atrás a adelante.
12. Cuida que el medio no moje la cubierta de la caja.
13. Deja solidificar.
14. Nuevamente mide 1ml de la solución (dilución primaria) e introdúcela en el primer
tubo de dilución adicional, agita. Toma 1 ml de ésta y pásalo a un segundo tubo de
dilución y así sucesivamente.
15. Toma de cada dilución 1ml de la sustancia y colócala en la caja Petri respectiva,
repitiendo el procedimiento desde el punto 10 al 13
16. Incuba las cajas en posición invertida de 24 a 48 horas a 35°C ± 2°C.
17. Pasado este tiempo contar las colonias con desarrollo.
18. Hacer uso del microscopio en caso de dadas colonias muy pequeñas.