Este documento presenta un protocolo para realizar un análisis completo de orina, incluyendo cultivo bacteriológico, análisis físico-químico y examen microscópico del sedimento. El objetivo es que los estudiantes adquieran habilidades técnicas en el análisis de orina y puedan diagnosticar patologías urinarias. El protocolo describe los pasos para sembrar muestras de orina en medios de cultivo, medir la densidad, analizar parámetros físicos y químicos,

1. Fundación Docencia e Investigación para la Salud
Técnicas de Laboratorio II
Trabajo práctico Nº 4
Apellido y Nombres……………………………………………………..Muestra Nº……
Objetivos
-Que el alumno pueda adquirir manualidad en las técnicas básicas del análisis completo
de orina
-Logre un informe bioquímica útil para el diagnostico de patologías urinaria
-Reconozca medios de cultivos utilizados en bacteriología clínica, los pueda utilizar
correctamente para la obtención de microorganismos y reconocimiento de especies
bacterianas de importancia.
Técnica:
1-La Muestra de elección para el trabajo es orina tomada bajo las condiciones de asepsia
para urocultivo según las condiciones que ya se conoce.
Siembre en medio CLDE, Levine y media placa de Agar Sangre, una alícuota de cada
orina remitida rotulando las capsulas e incubándolas 48 hs.
a) Mantener las muestras en refrigeración (4° C) hasta su procesamiento por cultivo.
b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del mechero
Bunsen.
c) Las placas con AS y CLDE y Levine que se utilizarán en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente. Rotular las placas.
d) Si el asa calibrada no es descartable, esterilizar el asa de siembra flameándola en el
mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo. Dejar enfriar el asa contando hasta 20.
e) Tomar el frasco con la muestra de orina, abrir la tapa y flamear la boca del frasco en
el mechero Bunsen.
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra estéril introduciéndola y sacándola
del frasco en forma vertical (Véase Figura 1). Tapar el frasco con la muestra.
g) Inocular en el centro de la placa a partir del cual se extiende la muestra, hacia
delante y hacia atrás (Véase Figura 2).
h) Luego, sin quemar el asa, el inoculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa (Véase Figura 3).
i) Proceder de la misma forma para el agar Levine y media placa de AS
j) Esterilizar el asa de siembra en el mechero.
k) Concluida la siembra, cerrar la placa y colocarla en la estufa con la tapa hacia abajo
hacia arriba. Incubar a 35 - 37° C en condiciones aeróbicas por 24-48 horas.
Figura 1: Método para sembrar con asa calibrada Figura 2: Siembra con estrías

2. Figura 3: Siembra por dispersión agotamiento
2-Luego de la siembra tome un volumen definido de orina y mida la densidad por el
método del urodensimetro para luego comparar su valor con el obtenido mediante el
análisis químico.
3.-Análisis Físico Químico con tiras reactivas:
Observar el color y el aspecto de la orina remitida y anotar los datos mas relevantes para
la validación de los resultados Químicos y microscópicos.
Recoge una muestra de orina en un tubo adecuado
Mediante las indicaciones del fabricante, analizar los parámetros físicos y químicos con
la ayuda de las tiras reactivas sumergir la tira reactiva en la muestra
En el momento de retirarla, se pone en posición horizontal y se escurre
bien; la lectura se hace siguiendo la tabla que viene en el frasco.

3. 4.-Sedimento Urinario:
-Centrifugar aproximadamente 10 ml de orina y centrifugar durante 5 minutos a 1500-
2000 rpm.
Eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet con el volumen de orina que queda.
Colocar una alícuota en un portaobjeto y cubrir con un cubreobjeto.
Examinar con aumento de 10X y finalmente con 40X
Informar los elementos observados de forma semicuantitativa relacionándolo con los
datos del análisis físico y químico.
5.- Tinción de Gram:
Una parte del sedimento resuspender en un volumen de sobrenadante y realizar un
extendido. Fijarlo al calor y colorearlo mediante la tinción de gram (esto solo se deberá
realizar de observar gérmenes en el análisis microscópico del sedimento)
6.- Pasadas las 48 hs de incubación de las placas observar el crecimiento o no en cada
una, indicar las características de las colonias y trate de caracterizar la especie
bacteriana de ser posible.
Realizar un extendido de cada tipo de colonia obtenida en el medio CLDE, colorearlo
con la tinción de gram según las indicaciones del método y observar al microscopio con
100X
Informe y Resultados
a- Completar para cada muestra el protocolo clínico
b- Indicar diferencioas o no entre los metodos de medicion de dencidad
c- Relacionar los resultados del análisis físico-químico con los resultados del
análisis microscópico
d- Microbiología: Indicar crecimiento de colonias, características de las mismas y
su relación con la tinción de gram
e- Justificar los tipos de colonias y colores obtenidos en cada medio para la
caracterización de las colonias.