1. FISIOLOGÍA VEGETAL
UNHEVAL EAP. Agronomía 1
PRACTICA N° 6
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS PIGMENTOS DE LOS
CLOROPLASTOS
Los cloroplastos de las plantas superiores contienen varios
pigmentos los cuales son reconocibles gracias a su
solubilidad en solventes orgánicos en una forma selectiva
para reconocer estos pigmentos existen varios métodos de los
cuales utilizaremos el químico y cromatográfico.
I. MATERIALES Y METODOLOGIA
Material Vegetal
Hoja de ciruelo hoja de sanguinaria
Equipos E Instrumentos
Mortero y pilón Vaso de precipitados Embudo de vidrio

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Tubos de prueba Papel filtro Gradilla
Cajas Petri Embudo separador
Soluciones
a. Agua Destilada
b. Alcohol Etílico
c. Bencina
d. Metanol
b c

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UNHEVAL EAP. Agronomía 3
I.METODOLOGIA
A.PREPARACION DEL EXTRACTO
1. De cada una de las muestras vegetales se tomó unas
cuantas hojas y en forma independiente se colocó en cada
mortero para proceder a la trituración con ayuda del
pilón.
El triturado o machacado se realizó agregando
alcohol en una cantidad tal que no exceda de 30 ml
Muestra de hojas de
ciruela siendo trituradas.
Muestra de hojas de
sanguinaria siendo
trituradas.

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2. El extracto obtenido anteriormente se filtra y se
recibe en un vaso precipitado. El extracto nos servirá
para el reconocimiento posterior de los pigmentos.
Extracto de hojas de ciruela Extracto de hojas de ciruela
Alternativa
Una variante en la preparación del extracto consiste en hervir las
hojas antes de proceder al triturado.
B.- SEPARACION QUIMICA DE LOS PIGMENTOS
1. Del extracto obtenido en el paso A se tomó unos 10 ml. Lo
que corresponde al extracto de las hojas de ciruelo o
sanguinaria y se vertió en un embudo de separación que
contiene 10 ml de bencina y cuidadosamente se agitó
durante unos instantes.
Este proceso se realizó para ambas muestras (hojas de ciruela y hojas de
sanguinaria.

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2. Lentamente se adicionó 10 ml de agua destilada por las
paredes internas del embudo. Se dejó en reposo hasta que
se observe la separación en dos fases.
3. Se descartó la fase inferior abriendo la llave del embudo
separador y se retenga solo la porción superior.

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4. La porción de la que quedó se lavó dos veces con 10 ml
de agua destilada, descardando siempre la porción
inferior que se forma.
5. Concluido el lavado se agregó 10 ml de metanol y se
mesclo cuidadosamente dejando luego en reposo hasta
observar la formación de dos nuevas capas
Clorofila A
Clorofila A
Clorofila B
Clorofila B

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6. Se transfiere la porción inferior obtenida en el paso
anterior a otro embudo separador, se utilizó tubo de
prueba para recibir la porción respectiva.
C.- ANALISIS CROMATOGRAFICO DE LOS PIGMENTOS
1. Del extracto original obtenido en el paso A tome unos 10
ml y viértalo en una caja Petri; tomando
una porción de papel de cromatografía forme como un
cuaderno abierto (atienda las indicaciones).

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2. Introduzca el papel de cromatografía en la caja Petri
evitando que entre en contacto con las paredes laterales
de la caja. espere que el extracto baya ascendiendo unos
3 cm en el papel para retirar y finalmente espere a que
seque.
3. Una vez seco, introduzca el papel en otra caja Petri
conteniendo alcohol etílico. La parte de papel que
contienen los pigmentos debe encontrarse en contacto con
el alcohol. espere unos minutos hasta que los pigmentos
se hayan separado lo suficiente; luego retire el papel
del alcohol, espere a que seque y observa identificando
los diversos pigmentos existentes en cada una de las
muestras vegetales.
Alcohol etílico
Resultados del Papel de cromatografía
de las hojas de ciruelo

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1. Pegue al acondicionar bencina al extracto se
produce la separación en dos fases.
La bencina también llamado éter de petróleo, es una
mezcla de hidrocarburos que se emplea como disolvente
o materia prima por lo que la bencina es un
biposolvente y solvente orgánico que está en afinidad
con los pigmentos carotenos y la xantofila a siendo
que la separación sea más fácil.
Alcohol etílico
Resultados del Papel de
cromatografía de las hojas
de la sanguinaria

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2. Pegue el papel de cromatografía en su hoja e indique
y nombre de cada uno de los pigmentos presentes.
Clorofila A carotenos
Clorofila A xantofilas
Clorofila B xantofila
Resultados del Papel de cromatografía de las
hojas de ciruelo
Clorofila A carotenos
Resultados del Papel de cromatografía
de las hojas de la sanguinaria