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Boletín
epidemiológico
periódico
edición especial
Nro.33
Presidente de la Nación
Dr. Néstor KIRCHNER
Ministro de Salud
Dr. Ginés M. GONZÁLEZ GARCÍA
Secretario de Programas Sanitarios
Lic. Walter A. VALLE
Subsecretario de Programas de Prevención y Promoción
Dr. Andrés J. LEIBOVICH
Director Nacional de Programas Sanitarios
Dr. Hugo FERNÁNDEZ
Directora de Epidemiología
Dra. Elena PEDRONI
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Autoridades
1
Comité Editorial
Dra. Graciela Abriata
Lic. Eleonora Poyard
Lic. Lisa Roques
Med. María O. Codebó
Diseño Editorial
María Eugenia de León
Dirección Postal
Dirección de Epidemiología - Ministerio de Salud de la Nación
Av. 9 de Julio 1925, Piso 9º
(C1073ABA) Cdad. Autónoma de Buenos Aires, Rep. Arg.
mail: unamos@msal.gov.ar
Suscripción gratuita
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Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
2
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Indice
Introducción ................................................................
- Antecedentes históricos
Etiología - Epidemiología ..........................................
Tratamiento ..................................................................
Medidas Preventivas ...................................................
Red Nacional de Brucelosis Humana /
Información Epidemiológica.....................................
Diagnóstico Bacteriológico .......................................
Diagnóstico Serológico ..............................................
Comentarios .................................................................
5
6
7
8
9
10
11
12
3
Boletín epidemiológico periódico
Boletín especial
Brucelosis
5
Brucelosis
introducción
La brucelosis es una zoonosis de importancia mundial.
En humanos es también llamada Melitococcia, fiebre
ondulante, fiebre de Malta o fiebre del Mediterráneo. En
animales, aborto infeccioso, aborto contagioso, aborto
epizoótico y enfermedad de Bang en los bovinos.
Causada por bacterias del género Brucella. Se trata de una
infección considerada de riesgo ocupacional, incluida en
la lista de las enfermedades profesionales, ya que no sólo
se puede transmitir a través de la ingestión de productos
lácteos contaminados y no pasteurizados. La atención
de animales enfermos, la administración de vacunas a
los animales, el trabajo en laboratorios y manipulación
de productos, subproductos y desechos como tejidos
o excreciones de animales enfermos son consideradas
actividades ocupacionales de alto riesgo. Se controla en
Bancos de Sangre y ha emergido en los últimos años en
nuevas especies de animales1
.
En la cadena de transmisión el hombre es un huésped
secundario, el cual resulta infectado a partir de una fuente
animal que incluye a bovinos, caprinos, ovinos, porcinos o
caninos infectados.
El microorganismo atraviesa la barrera cutáneo-mucosa
aún en ausencia de solución de continuidad de la misma.
La manipulación de productos fetales, el contacto el con
medio ambiente contaminado o actividades relacionadas
pueden producir el contagio en el hombre. Los vectores
no juegan un papel de interés en la transmisión de esta
enfermedad.
La Brucelosis tiene una distribución cosmopolita. Algunos
países del centro y del norte de Europa han conseguido
su erradicación pero permanece como un gran problema
en las regiones Mediterráneas, Asia oeste, algunas zonas
de África y América Latina. La incidencia de las diferentes
especies es variable de una área a otra. En Sudamérica y en
los países mediterráneos, tanto europeos como africanos,
existen áreas endémicas de B. melitensis.
El carácter zoonótico y las pérdidas económicas que
ocasiona, son argumentos suficientes para generar
actividades de control, eliminación y erradicación de
la brucelosis. Con el fin de poner en marcha programas
adecuados para cada municipio o región se necesita conocer
la enfermedad, la población hacia la cual se debe dirigir el
esfuerzo sanitario, la situación epizoótica, y analizar los
resultados para evaluar la relación costo beneficio para
realizar un eficiente uso de recursos2
.
antecedentes Históricos
La brucelosis humana fue conocida antiguamente como la
fiebre de Malta, fiebre ondulante y fiebre mediterránea. El
cuadro clínico fue descrito por primera vez por Marston en
1859. En 1887 David Bruce aísla formas de micrococos en
tejidos de bazos de soldados muertos en la Isla de Malta,
por una infección que se conocía como Enfermedad de
Malta. En 1897, el veterinario Bernard Laurits Fredrik
Bang (Dinamarca) identifica un bacilo intracelular que
causa aborto en bovinos y que denominó Bacilus abortus, la
infección fue llamada Enfermedad de Bang.
En la Argentina se aisló por primera vez en 1930, una
cepa de Brucella melitensis y desde 1932 se incluyó entre
las enfermedades profesionales. En 1994 la Dirección de
Epidemiología del Ministerio de Salud registró 455 casos
y en 1997, ascendieron a 687 casos marcando un punto
de inflexión a partir del cual comienzan a descender hasta
llegar a 300 casos notificados por año en todo el país3
.
1
Samartino L. Brucellosis in Argentina. Vet Microbiol. 2002; 90:
71-80.
2
Ana M. Ambrosio... [et.al.]. 1ª ed. Zoonosis y enfermedades
emergentes. 1998: Asociación Argentina de Zoonosis.
3
Juan Carlos Abuin…[et.al.].-1ªed. Temas de zoonosis III.2006:
Asociación Argentina de Zoonosis
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Etiología
El género Brucella corresponde a cocobacilos Gram
negativos, inmóviles que no forman esporas. Estos
microorganismos se observan al microscopio óptico como
bacilos cortos de 0,5 a 0,7 µm de diámetro y de 0,5 a 1,5
µm de largo. La temperatura óptima de crecimiento es
de 37° C con un pH ácido de 6,6 a 7,4 en un ambiente
aerobio. Es catalasa positiva y puede crecer en medios
pobres en nutrientes de agar-soya-tripticasas, agar-brucelas
o agar-suero-dextrosa. Muchas cepas de B. abortus y
B. ovis requieren dióxido de carbono para desarrollarse y la
mayoría de las especies crecen en forma lenta.
Los miembros de este género son patógenos intracelulares
facultativos capaces de infectar a una gran variedad de
mamíferos incluyendo focas y delfines4
. Actualmente se
conocen seis especies terrestres entre las cuales se destacan:
B. melitensis que parasita cabras y ovejas, B. abortus (ocho
biovars) patógena de bovinos, B. ovis parasita ovejas,
B. suis a cerdos, B. canis produce enfermedad en caninos y
B. neotomae es patógena para ratas del desierto en el oeste de
Estados Unidos. El hombre puede ser huésped secundario
de B. melitensis, B. abortus, B. suis y B. canis.
Este género de bacterias tiene proteínas en la membrana
externa que se asemejan a las OmpF y OmpA de Escherichia
coli. Los lipopolisacaridos de la pared celular de B. abortus,
B. suis y B. melitensis tienen dos antigenos de superficie
mayores (A y M), con predominio de A en B. abortus y M en
B. melitensis. No producen exotoxinas, pero la pared celular
contiene una exotoxina que se diferencia por la actividad
biológicayestructuraquímicadelasendotoxinasproducidas
pormuchos bacilos entéricos. Las reacciones cruzadas
serológicas observadas entre especies de Brucella y Yersinia,
Francisella tularensis, Vibrio cholerae y salmonelas se atribuye a
las similitudes de las cadenas laterales O- específicas de los
residuos polisacáridos de estos microorganismos.
Epidemiología
En la Argentina se conoce la infección con B. abortus
(ganado bovino), B. ovis (ganado ovino), B. melitensis
(ganado caprino) y, en menor grado, B. suis (cerdos) y
B. canis (perros). La aparición de la enfermedad es más
común en primavera y verano que en otoño e invierno.
Los mamíferos en estado de preñez o sexualmente maduros
son más susceptibles porque este microorganismo tiene
afinidad por los tejidos de los órganos reproductivos,
siendo la infertilidad o el aborto uno de los principales
signos de la brucelosis animal5
. Los animales infectados
son la principal fuente de dispersión de la bacteria a través
de sus secreciones genitales o mamarias como factor de
contaminación.
En el caso de los animales preñados, las bacterias se localizan
en los tejidos placentarios, alcanzando concentraciones muy
altas (alrededor de 1010
bacterias por cm3
). En una primera
etapa producen placentitis severa con infección del feto y
finalmente el aborto6
.
Estas bacterias son eliminadas por animales infectados al
medio ambiente a través de productos de aborto, leche,
sangre y heces. De acuerdo con el medio en el que son
eliminadas, presentan distintos períodos de supervivencia.
El contagio del hombre puede ocurrir por tres vías:
• Vía conjuntival o cutánea: es de interés desde el punto de
vista profesional ocurriendo principalmente en trabajadores
de laboratorio, o de servicios de salud y producida por el
contacto directo entre tejidos, sangre o linfa.
• Vía respiratoria: el contagio se produce por inhalación
de aerosoles formados en operaciones, limpieza de establos,
movimiento de ganado y en general todas las actividades
que puedan movilizar el polvo infectado.
• Vía digestiva: Es de importancia en cuanto al contagio
no profesional de la enfermedad; éste ocurre al ingerir
productos lácteos no pasteurizados o alimentos crudos
contaminados con deyecciones de animales infectados.
4
Ewalt DR; Payeur JB; Martin BM; Cummins DR and Miller WG.
Characteristics of a Brucella species from a bottlenose dolphin
(Tursiops truncatus). J. Vet. Diag. Invest. 1994; 6:448-452.
5
Enright, .M. The pathogenesis and pathobiology of Brucella
infection in domestic animals. En. K. Nielsen and B. Duncan
(ed.). Animal brucellosis. CRC Press Inc., Boca Ratón, Florida.
1990. pp. 301-320.
6
Freer, E y Castro-Arce, R. Brucella: una bacteria virulenta carente
6
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
No existe contagio interhumano aunque se discute la
transmisión sexual.
Cadena epidemiológica de la Brucelosis - Vía cutáneo-
mucosa
Fuente: Medicina Laboral. Brucelosis: normas preventivas
http://www.estrucplan.com.ar/Producciones/entrega.asp?IdEntrega=179
Las bacterias del género Brucella poseen la capacidad de
fijarse e introducirse en las conjuntivas o en heridas de
la piel. Una vez ingresadas al organismo avanzan por vía
linfática hasta llegar al primer centro ganglionar, donde se
multiplican, para posteriormente diseminarse a modo de
septicemia, con especial afinidad por los órganos del sistema
reticuloendotelial donde se localiza intracelularmente;
evadiendo así los mecanismos de defensa celulares y
humorales. De esta manera la bacteria se transporta dentro
de los fagocitos, esparciéndose a diferentes órganos y
causando la destrucción de las células que las transportan.
La brucelosis puede manifestarse en forma subclínica,
subaguda, aguda y crónica con un período de incubación
de 7 a 21 días. El inicio suele ser insidioso con fiebre,
escalofríos, diaforesis, cansancio, anorexia y lumbalgia.
Puede asociarse también a cefaleas, mialgias, odinofagia,
tos, estreñimiento y pérdida de peso. Existen adenopatías
en el 50% de los casos agudos y esplenomegalia en un
30%. La infección puede localizarse y ocurrir entonces
osteomielitis, artritis, abscesos esplénicos, orquiepididimitis
y endocarditis. En caso de desarrollarse en forma crónica
el paciente puede presentar febrículas, astenia, pérdida de
peso, ansiedad o depresión.
En nuestro país es una enfermedad de notificación
obligatoria, sin embargo las estadísticas oficiales no reflejan
el número real de personas infectadas, por lo que se estima
que la verdadera incidencia sería de 10 a 25 veces más alta
que la indicada. Los casos a menudo no son reconocidos
y son tratados como “fiebre de origen desconocido”
impidiendo esto el tratamiento oportuno y la intervención
epidemiológica adecuada.
Tratamiento
El tratamiento óptimo de la brucelosis es todavía discutido,
a pesar de haberse usado desde 1947, múltiples esquemas
de antimicrobianos. La Organización Mundial de la Salud
y la Academia Americana de Pediatría, recomiendan un
tratamiento con una duración que va de 6 semanas hasta
meses dependiendo si existe cronicidad. La cronicidad
puede ser debida a que la Brucella es un organismo hábil
para sobrevivir y multiplicarse dentro de las células del
sistema de defensa del cuerpo. Esto explica la tendencia de
esta enfermedad a tener un curso clínico prolongado con
recaídas que van del 4 al 41%.
En pediatría se necesita la administración prolongada de
antiomicrobianos para obtener la curación. Las recidivas
por lo común no dependen de la generación de resistencia
por parte de Brucella, sino más bien de la interrupción
prematura del tratamiento.
Durante 4 ó 6 semanas habrá que administrar 2 a 4 mg/
kg/día de doxiciclina vía oral (VO); máximo 200 mg/ día
en dos fracciones (ó 30 a 40 mg/kg/día. de tetraciclina
VO; máximo 2 g/día en cuatro fracciones). Sin embargo,
es mejor no usar la tetraciclina ni doxiciclina en la medida
de lo posible en niños menores de ocho años. Otros
fármacos adecuados para pacientes de menor edad son el
trimetoprim-sulfametoxazol VO (trimetoprim 10 mg/kg/
día; dosis máxima, 480 mg/día y sulfametoxazol, 50 mg/
Kg/ día; dosis máxima 2,4 g/día) en dos fracciones durante
cuatro a seis semanas.
de los factores de virulencia clásicos. Rev. costarric. cienc. méd, jun.
2001, vol.22, no.1-2, p.73-82. ISSN 0253-2948.
7
RESERVORIO
SALVAJE
Liebre, rata, jabalí
RESERVORIO
DOMESTICO
Vaca, cabra,
cerdo, oveja
LECHE Y DERIVADOS
CONTAGIO DIRECTO
Contacto de piel y mucosas con:
secreciones vaginales, abortos,
orina, heces, sudor, secresiones
nasales
CONTAGIO INDIRECTO
A través de la contaminación del
ambiente por los mismos agentes
que originan el contagio directo
VIA DIGESTIVA
Verduras, agua
INGESTION
HOMBRE
VIA INHALATORIA
Polvo del establo,
aerosoles
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Para disminuir la incidencia de recaídas, muchos expertos
recomiendan la terapia por combinación a base de
una tetraciclina (o trimetoprim-sulfametoxazol si están
contraindicadas las tetraciclinas) y rifampicina. Ante la
posibilidad de que surja resistencia a la rifampicina no se
recomienda usarla como fármaco único.
Paratratarunainfeccióngraveolascomplicaciones,incluídas
la endocarditis, meningitis y osteomielitis, es recomendable
administrar los sulfatos de estreptomicina o gentamicina en
los primeros 7 a 14 días de terapia, además de tetraciclina
(o trimetoprim-sulfametoxazol, si está contraindicada la
tetraciclina). Además, puede administrarse la rifampicina
con este régimen para disminuir la frecuencia de recidiva.
En caso de complicaciones letales habrá que prolongar el
tratamiento por varios meses.
Nosehancorroboradolosbeneficiosdeloscorticosteroides
en personas con brucelosis del sistema nervioso. A veces,
poco después de comenzar la administración de los
antimicrobianos, surge la reacción de Jarisch-Herxheimer
(reacción febril aguda, que incluye cefalea, mialgias y un
cuadro clínico agravado que dura menos de 24 horas).
Se recomienda el aislamiento del paciente hospitalizado.
Además de las precauciones estándar, conviene evitar la
transmisión por contacto en sujetos con heridas húmedas,
con algún tipo de secreción7
.
Medidas preventivas
La erradicación de la brucelosis en seres humanos depende
de la desaparición del género Brucella del ganado vacuno,
caprino, ovino y de otros animales. La pasteurización de
la leche y de los productos lácteos para consumo humano
es especialmente importante para evitar la enfermedad en
niños. La certificación de leche cruda no elimina el peligro
de transmisión de los microorganismos. En áreas endémicas
son de máxima importancia la práctica obligatoria de las
medidas de erradicación y la enseñanza que se brinda al
respecto.
La vacunación con cepa 19 de B. abortus que se realiza de
rutina en el ganado bovino junto con la realización de
pruebas serológicas y al sacrificio de animales infectados,
constituyen las medidas efectivas para la reducción de la
incidencia en el ganado bovino. La cría de los porcinos
debe realizarse de acuerdo a la reglamentación vigente
brucelosis porcina en Argentina. (Resolucion Nº 225/95-
Normas para crianza de especie porcina).
Las medidas preventivas más importantes son la
pasteurización de la leche y la ingestión exclusiva de
quesos pasteurizados. Las personas que manipulan carne
deben utilizar lentes y ropas protectoras y cubrir (proteger)
cualquier lesión de piel para evitar su infección. La detección
de animales infectados permite controlar su diseminación.
Existen vacunas para el ganado, pero no para los seres
humanos.
7
American Academy of Pediatrics [Resumen de
enfermedades infecciosas]. En: Pickering LK (ed.). Red Book
(Libro Rojo). Memoria del Comité de Enfermedades Infecciosas para
2003. 26a ed. México: Intersistemas, 2004: [236-238]
8
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Red Nacional de Brucelosis
Humana
Dra. Nidia E. Lucero
ANLIS Dr. C. G. Malbrán, Avda. Velez Sarsfield 563, 1281
Buenos Aires
Tel: (11) 4301-7801, Fax: (11) 4303-2382,
E-mail: nidia@elsitio.net
Dentro de la estructura de la Administración Nacional
de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. C.G.Malbrán”
(ANLIS) y en el marco del Instituto Nacional de
Enfermedades Infecciosas (INEI), el servicio de brucelosis
creado en 1994, efectúa diagnóstico serológico, control
de calidad de reactivos y producción de biológicos de
referencia; realiza aislamientos, identificación y tipificación
de cepas; mantiene la colección de cepas de Brucella y
transfiere tecnología e información a las provincias con el
objeto de estandarizar el diagnóstico de esta zoonosis.
Información epidemiológica
Por ser una enfermedad de notificación obligatoria, el
Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SINAVE),
de la Dirección de Epidemiología del Ministerio
de Salud Pública, informa semanalmente los casos
detectados por provincia y regiones sanitarias (Figura 1).
En el año 2004 se registraron 295 casos, principalmente en
Buenos Aires(68), Mendoza(68), Salta(35) y Santa Fe(20)
pero no hubo información de Chubut, Misiones, Neuquen,
Santa Cruz, Santiago del Estero y Tierra del Fuego.
En el 2005 se notificaron 284 casos, en su mayoría en
Mendoza(84), Buenos Aires(57), Córdoba(44) y Salta (22)
pero no hubo registros en Chubut, Entre Ríos, Jujuy, La
Rioja, Misiones, Neuquen, Río Negro, San Luis, Tierra del
Fuego y Tucumán.
Figura 1: Casos de brucelosis informados en Argentina
durante el período 1992-2005
Fuente: Dirección de Epidemiología. Ministerio de Salud de la Nación.
Brucelosis se controla en sangre a transfundir y es el Centro
Nacional de Redes de Laboratorios de la ANLIS (CNRL)
quien publica la información sobre donantes reactivos
detectados en Bancos de Sangre oficiales y privados de cada
provincia.
Se trata de una infección considerada de riesgo ocupacional,
incluida en la lista de las enfermedades profesionales, se
puede transmitir a través de alimentos contaminados, se
controla en Bancos de Sangre y ha emergido en los últimos
años en nuevas especies de animales.
Red Nacional de brucelosis humana
Para llevar a cabo el objetivo que originó su creación, el
servicio de Brucelosis de la INEI-ANLIS, comenzó a
formar una Red Nacional de Laboratorios dando prioridad
a las provincias del NOA por ser el área más afectada. Hoy,
trece provincias y seis regiones sanitarias de la provincia
de Buenos Aires (Figura 2) cuentan con profesionales
capacitados para realizar el diagnóstico, cumplen con un
programa de control de calidad del diagnóstico y a la vez
supervisan los efectuados en los centros de salud de su
región.
9
0
100
200
300
400
500
600
700
800
1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005
Año
Casos
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Figura 2: Provincias y jurisdicciones que integran la
Red Nacional de Brucelosis Humana
Fuente: N. Lucero, INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrán
La estructura en Red permite:
•Centralizar la información sobre la situación de la
enfermedad.
• Difundir medidas de prevención
• Distribuir reactivos y medios de cultivo
• Estimular el desarrollo del diagnóstico bacteriológico.
En las provincias que integran la Red hoy se dispone
de datos detectados en Bancos de Sangre, consultorio
clínico, embarazadas, pre-ocupacionales, pre-transplantes,
donantes, traumatología y otros servicios que demuestran
la sub-notificación de la enfermedad.
Diagnóstico bacteriológico
Actualmente el diagnóstico bacteriológico se realiza con
mayor frecuencia ya que ante un cuadro febril de origen
desconocido, de rutina se toman hemocultivos y con la
difusión de los equipos automatizados se ve facilitado el
aislamiento en los casos de bacteriemia por B. melitensis
o B. suis. Cuando en el laboratorio del hospital se aísla
Brucella y no se sospecha su presencia, la identificación
por los sistemas rápidos puede confundir al bacteriólogo.
El género Brucella aún no está incluido en las bases de
datos de los kits comerciales para la identificación de
microorganismos gram negativos y su utilización puede
retrasar el diagnóstico y exponer al profesional al riesgo de
contraer la infección. En nuestro laboratorio hemos aislado
Brucella del hemocultivo de profesionales que intentaban
identificar cepas procedentes de pacientes y controlamos
serológicamente al personal de varios laboratorios
hospitalarios que se expusieron por igual motivo.
LamanipulacióndecepasdeBrucelladeberealizarseteniendo
en cuenta que se trata de un microorganismo clasificado en
el nivel de riesgo III y pertenece al grupo B de gérmenes
que pueden ser usados como potencial arma biológica6-8
. El
clínico debería advertir al laboratorio sobre la posibilidad
de encontrar este germen aunque la enfermedad suele
presentar síntomas diversos e inespecíficos.
En los últimos 12 años, bajo este proyecto, hemos aislado
de humanos 334 cepas de Brucella (Tabla 1) en su mayoría
de sangre, médula, LCR, líquido articular, líquido prostático
o biopsias con la siguiente distribución: 39 % B. suis,
38% B. melitensis, 22 % B. abortus y 1 % B. canis I-II, V-VII
.
Tabla 1: Cepas de Brucella aisladas de Humanos en
Argentina
INEI-ANLIS “Dr.C.G.Malbrán” 1994-2005
Fuente: N. Lucero, INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrán
10
8 Epidemiología
ANLIS
n
199
10
27
1
3
2
4
41
1
3
1
3
10
2
25
2
334
Buenos Aires
Catamarca
Córdoba
Entre Ríos
Jujuy
La Pampa
La Rioja
Mendoza
Misiones
Neuquen
Río Negro
San Juan
Santa Fe
Sgo. del Estero
Salta
Tucumán
Total
1
58
4
1
63
2
4
1
5
72
C19
4
4
1
30
9
5
3
41
2
3
1
21
1
116
1a
1
3
1
1
1
7
126
2a
1
1
3
2
2
1
50
10
1
1
1
1
1
1
4
1
1
72
134
1a
49
6
1
4
2
62
2
2
2
Provincia B. abortus B. melitensis B. suis B. canis
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
La tipificación de las cepas en especies y biovariedades
se realiza utilizando las clásicas pruebas bioquímicas,
serotipificación y lisotipia, incluyendo cepas patrones de
referencia y la confirmación de los resultados, en algunos
casos se realiza por PCR-RFLP usando diferentes enzimas
de restricción. B. abortus, B. melitensis, B. suis y B. canis han
demostrado ser patógenas para el hombre aunque tienen
una distribución geográfica limitada coincidente con
la especie animal que predomina en la región. Durante
el período 1996-2005, aislamos de perros de distintas
razas, domiciliarios o de criaderos 147 cepas de B. canis,
procedentes en su mayoría de Ciudad y provincia de Buenos
Aires.
Diagnóstico serológico
Aunque el aislamiento de Brucella es evidencia irrefutable
de la infección, los métodos serológicos prueban
indirectamente la presencia del germen. Las técnicas
convencionales usadas como tamiz en el diagnóstico de
brucelosis humana, son las de Huddleson, Rosa de Bengala
o BPA, que utilizan antígenos preparados con Brucella abortus
en fase lisa y detectan anticuerpos anti B. abortus, B. melitensis
y B. suis. Por ser rápidas, accesibles y fáciles de realizar se
emplean para tener una pronta respuesta y descartar otras
patologías con síntomas comunes. La prueba de Huddleson
no es la más recomendada ya que el pH neutro del antígeno
favorece la aglutinación de inmunoglobulinas de tipo IgM y
puede dar reacción cruzada con otros microorganismos.
Rosa de Bengala y BPA por su bajo pH, privilegian la
aglutinación de las inmunoglobulinas tipo IgG reduciendo
lasreaccionesinespecíficas.BPAesligeramentemássensible
que Rosa de Bengala y se recomienda para el estudio de
brucelosis en sangre a transfundir.
Entre las pruebas confirmatorias convencionales las de
Wright, 2-mercaptoetanol y fijación de complemento, por
su bajo costo, siguen utilizándose en la actualidad en algunos
países. La primera ha sido utilizada como prueba estándar
y a menudo como única confirmatoria, el antígeno tiene
el mismo pH que la de Huddleson y presenta los mismos
inconvenientes. Hay discrepancias respecto al punto de
corte y algunos autores han sugerido el título 1:320 en
las área rurales y 1:80 en áreas donde la enfermedad no
es endémica. Detecta en el suero isotipos IgM, IgG e IgA
suero, es de baja especificidad y no recomendable en casos
crónicos.
La prueba de 2-mercaptoetanol se realiza paralelamente
con la de Wright, utilizando el reactivo, que es tóxico,
para eliminar los anticuerpos de tipo IgM y aumentar la
especificidad, pero el 2-mercaptoetanol también reduce la
cantidad de anticuerpos IgG presentes en el suero por lo
cual el uso de esta técnica se esta discontinuando.
La fijación de complemento es una prueba sensible y
específica, detecta anticuerpos de tipo IgG que predominan
en los casos crónicos, pero tiene el inconveniente del poder
anticomplementario que presentan algunos sueros, es muy
laboriosa y poco apropiada en casos agudos.
Las modernas pruebas de unión primaria tienen la ventaja
de su alta sensibilidad y especificidad, detectan anticuerpos
asimétricos, comunes en los pacientes crónicos y reducen
la reacción cruzada con otros gérmenes gram negativos.
CELISA es una ELISA de competición que utiliza un
anticuerpo monoclonal específico para una porción de la
cadena “O” del S-LPS de Brucella, que compite con los
anticuerpos del suero por el antígeno fijo en el soporte
sólido. Ha demostrado tener una sensibilidad del 98.3%
y una especificidad de 99.7%, detecta casos agudos y
crónicosIII
.
La técnica de polarización fluorescente (FPA)IV
, tiene
la ventaja de realizarse en tubos de vidrio de 12x75mm,
que se pueden volver a usar luego de su lavado, se realiza
en pocos minutos, tiene una sensibilidad del 96.1% y una
especificidad del 97.9% y al igual que CELISA detecta
casos agudos y crónicos, pero requiere de un polarímetro
para su lectura, mientras CELISA puede utilizar cualquier
lector cuyo uso es habitual en los laboratorios clínicos.
Cuando la sospecha es de infección por Brucella canis el
diagnóstico se realiza utilizando antígenos preparados con
la cepa B. canis M. La prueba de microaglutinación (RSAT)
se utiliza como tamiz y una ELISA indirecta para confirmar
los casos, esta última utilizando una proteína recombinante
como conjugado.
11
Boletín Epidemiológico Periódico
Boletín especial
Comentarios
Las pruebas diagnósticas descriptas se realizan en nuestro
laboratorio y han sido transferidas a los responsables de los
laboratorios provinciales o jurisdiccionales que integran la
Red, quienes utilizan reactivos controlados y cumplen con
un programa de control de calidad del diagnóstico.
Los aislamientos de Brucella que presentamos constituyen
información epidemiológica de interés; llama la atención
una nueva variante de B. melitensis en la zona del noroeste
Argentino y la adaptación a las condiciones de la región
de una B. suis resistente a bacteriostáticos. Además,
informamos sobre la brucelosis canina como potencial
zoonosis urbana.
I
Corbel MJ, Thomas EL, Garcia Carrillo C. Taxonomic studies on
some atypical strains of Brucella suis. Br Vet J. 1984; 140: 34-43.
II
Lucero NE, Greco G, Carrete PA. Brucella melitensis biovar 3
in Argentina? [Article in Spanish] Rev Argent Microbiol. 1999;
31(suppl 1): 58-59.
III
LuceroNE.,FogliaL.,AyalaSM.,GallD.,NielsenK.Competitive
Enzyme Immunoassay for diagnosis of human brucellosis”. J.Clin.
Microbiol. 1999. 37(10), 3245-3248.
IV
Lucero NE, Escobar GI, Ayala SM, Paulo PS, Nielsen K.
Fluorescence polarization assay for diagnosis of human brucellosis”
J Med Microbiol. 2003.; 52: 883-887.
V
Lucero NE, Jacob NO, SM Ayala et al. Unusual clinical
presentation of brucellosis caused by Brucella canis. J Med
Microbiol. 2005; 54: 505-508.
VI
Lucero NE, Siñeriz F. The Argentine experience in enhancing
biosafety through good laboratory practices. Asian Biotech and
Develop Rev. 2005; 8 (1): 99-120.
VII
Lucero NE, Ayala SM, GI Escobar et al. A new variant of
Brucella melitensis. Clin Microbiol Infect. 2006: 12: 593-596.
VIII
Yagupsky P, Baron EJ. Laboratory exposures to brucellae and
implications for bioterrorism. Emerg Infect Dis. 2005; 8:1180-
1185.
12
Ministerio de Salud de la Nación
Av. 9 de Julio 1925, (C1073ABA) Cdad. Autónoma de Bs. As.
Teléfono: (54-11) 4379-9000 / Web: www.msal.gov.ar
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Boletin brucelosis

  • 2.
  • 3. Presidente de la Nación Dr. Néstor KIRCHNER Ministro de Salud Dr. Ginés M. GONZÁLEZ GARCÍA Secretario de Programas Sanitarios Lic. Walter A. VALLE Subsecretario de Programas de Prevención y Promoción Dr. Andrés J. LEIBOVICH Director Nacional de Programas Sanitarios Dr. Hugo FERNÁNDEZ Directora de Epidemiología Dra. Elena PEDRONI Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Autoridades 1
  • 4. Comité Editorial Dra. Graciela Abriata Lic. Eleonora Poyard Lic. Lisa Roques Med. María O. Codebó Diseño Editorial María Eugenia de León Dirección Postal Dirección de Epidemiología - Ministerio de Salud de la Nación Av. 9 de Julio 1925, Piso 9º (C1073ABA) Cdad. Autónoma de Buenos Aires, Rep. Arg. mail: unamos@msal.gov.ar Suscripción gratuita Foto de tapa Búsqueda de imágenes: www.farestaie.com.ar/images/vet-cow.jpg www.colvema.org/novedades/imagenes/vacas.jpg Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial 2
  • 5. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Indice Introducción ................................................................ - Antecedentes históricos Etiología - Epidemiología .......................................... Tratamiento .................................................................. Medidas Preventivas ................................................... Red Nacional de Brucelosis Humana / Información Epidemiológica..................................... Diagnóstico Bacteriológico ....................................... Diagnóstico Serológico .............................................. Comentarios ................................................................. 5 6 7 8 9 10 11 12 3
  • 6.
  • 7. Boletín epidemiológico periódico Boletín especial Brucelosis 5 Brucelosis introducción La brucelosis es una zoonosis de importancia mundial. En humanos es también llamada Melitococcia, fiebre ondulante, fiebre de Malta o fiebre del Mediterráneo. En animales, aborto infeccioso, aborto contagioso, aborto epizoótico y enfermedad de Bang en los bovinos. Causada por bacterias del género Brucella. Se trata de una infección considerada de riesgo ocupacional, incluida en la lista de las enfermedades profesionales, ya que no sólo se puede transmitir a través de la ingestión de productos lácteos contaminados y no pasteurizados. La atención de animales enfermos, la administración de vacunas a los animales, el trabajo en laboratorios y manipulación de productos, subproductos y desechos como tejidos o excreciones de animales enfermos son consideradas actividades ocupacionales de alto riesgo. Se controla en Bancos de Sangre y ha emergido en los últimos años en nuevas especies de animales1 . En la cadena de transmisión el hombre es un huésped secundario, el cual resulta infectado a partir de una fuente animal que incluye a bovinos, caprinos, ovinos, porcinos o caninos infectados. El microorganismo atraviesa la barrera cutáneo-mucosa aún en ausencia de solución de continuidad de la misma. La manipulación de productos fetales, el contacto el con medio ambiente contaminado o actividades relacionadas pueden producir el contagio en el hombre. Los vectores no juegan un papel de interés en la transmisión de esta enfermedad. La Brucelosis tiene una distribución cosmopolita. Algunos países del centro y del norte de Europa han conseguido su erradicación pero permanece como un gran problema en las regiones Mediterráneas, Asia oeste, algunas zonas de África y América Latina. La incidencia de las diferentes especies es variable de una área a otra. En Sudamérica y en los países mediterráneos, tanto europeos como africanos, existen áreas endémicas de B. melitensis. El carácter zoonótico y las pérdidas económicas que ocasiona, son argumentos suficientes para generar actividades de control, eliminación y erradicación de la brucelosis. Con el fin de poner en marcha programas adecuados para cada municipio o región se necesita conocer la enfermedad, la población hacia la cual se debe dirigir el esfuerzo sanitario, la situación epizoótica, y analizar los resultados para evaluar la relación costo beneficio para realizar un eficiente uso de recursos2 . antecedentes Históricos La brucelosis humana fue conocida antiguamente como la fiebre de Malta, fiebre ondulante y fiebre mediterránea. El cuadro clínico fue descrito por primera vez por Marston en 1859. En 1887 David Bruce aísla formas de micrococos en tejidos de bazos de soldados muertos en la Isla de Malta, por una infección que se conocía como Enfermedad de Malta. En 1897, el veterinario Bernard Laurits Fredrik Bang (Dinamarca) identifica un bacilo intracelular que causa aborto en bovinos y que denominó Bacilus abortus, la infección fue llamada Enfermedad de Bang. En la Argentina se aisló por primera vez en 1930, una cepa de Brucella melitensis y desde 1932 se incluyó entre las enfermedades profesionales. En 1994 la Dirección de Epidemiología del Ministerio de Salud registró 455 casos y en 1997, ascendieron a 687 casos marcando un punto de inflexión a partir del cual comienzan a descender hasta llegar a 300 casos notificados por año en todo el país3 . 1 Samartino L. Brucellosis in Argentina. Vet Microbiol. 2002; 90: 71-80. 2 Ana M. Ambrosio... [et.al.]. 1ª ed. Zoonosis y enfermedades emergentes. 1998: Asociación Argentina de Zoonosis. 3 Juan Carlos Abuin…[et.al.].-1ªed. Temas de zoonosis III.2006: Asociación Argentina de Zoonosis
  • 8. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Etiología El género Brucella corresponde a cocobacilos Gram negativos, inmóviles que no forman esporas. Estos microorganismos se observan al microscopio óptico como bacilos cortos de 0,5 a 0,7 µm de diámetro y de 0,5 a 1,5 µm de largo. La temperatura óptima de crecimiento es de 37° C con un pH ácido de 6,6 a 7,4 en un ambiente aerobio. Es catalasa positiva y puede crecer en medios pobres en nutrientes de agar-soya-tripticasas, agar-brucelas o agar-suero-dextrosa. Muchas cepas de B. abortus y B. ovis requieren dióxido de carbono para desarrollarse y la mayoría de las especies crecen en forma lenta. Los miembros de este género son patógenos intracelulares facultativos capaces de infectar a una gran variedad de mamíferos incluyendo focas y delfines4 . Actualmente se conocen seis especies terrestres entre las cuales se destacan: B. melitensis que parasita cabras y ovejas, B. abortus (ocho biovars) patógena de bovinos, B. ovis parasita ovejas, B. suis a cerdos, B. canis produce enfermedad en caninos y B. neotomae es patógena para ratas del desierto en el oeste de Estados Unidos. El hombre puede ser huésped secundario de B. melitensis, B. abortus, B. suis y B. canis. Este género de bacterias tiene proteínas en la membrana externa que se asemejan a las OmpF y OmpA de Escherichia coli. Los lipopolisacaridos de la pared celular de B. abortus, B. suis y B. melitensis tienen dos antigenos de superficie mayores (A y M), con predominio de A en B. abortus y M en B. melitensis. No producen exotoxinas, pero la pared celular contiene una exotoxina que se diferencia por la actividad biológicayestructuraquímicadelasendotoxinasproducidas pormuchos bacilos entéricos. Las reacciones cruzadas serológicas observadas entre especies de Brucella y Yersinia, Francisella tularensis, Vibrio cholerae y salmonelas se atribuye a las similitudes de las cadenas laterales O- específicas de los residuos polisacáridos de estos microorganismos. Epidemiología En la Argentina se conoce la infección con B. abortus (ganado bovino), B. ovis (ganado ovino), B. melitensis (ganado caprino) y, en menor grado, B. suis (cerdos) y B. canis (perros). La aparición de la enfermedad es más común en primavera y verano que en otoño e invierno. Los mamíferos en estado de preñez o sexualmente maduros son más susceptibles porque este microorganismo tiene afinidad por los tejidos de los órganos reproductivos, siendo la infertilidad o el aborto uno de los principales signos de la brucelosis animal5 . Los animales infectados son la principal fuente de dispersión de la bacteria a través de sus secreciones genitales o mamarias como factor de contaminación. En el caso de los animales preñados, las bacterias se localizan en los tejidos placentarios, alcanzando concentraciones muy altas (alrededor de 1010 bacterias por cm3 ). En una primera etapa producen placentitis severa con infección del feto y finalmente el aborto6 . Estas bacterias son eliminadas por animales infectados al medio ambiente a través de productos de aborto, leche, sangre y heces. De acuerdo con el medio en el que son eliminadas, presentan distintos períodos de supervivencia. El contagio del hombre puede ocurrir por tres vías: • Vía conjuntival o cutánea: es de interés desde el punto de vista profesional ocurriendo principalmente en trabajadores de laboratorio, o de servicios de salud y producida por el contacto directo entre tejidos, sangre o linfa. • Vía respiratoria: el contagio se produce por inhalación de aerosoles formados en operaciones, limpieza de establos, movimiento de ganado y en general todas las actividades que puedan movilizar el polvo infectado. • Vía digestiva: Es de importancia en cuanto al contagio no profesional de la enfermedad; éste ocurre al ingerir productos lácteos no pasteurizados o alimentos crudos contaminados con deyecciones de animales infectados. 4 Ewalt DR; Payeur JB; Martin BM; Cummins DR and Miller WG. Characteristics of a Brucella species from a bottlenose dolphin (Tursiops truncatus). J. Vet. Diag. Invest. 1994; 6:448-452. 5 Enright, .M. The pathogenesis and pathobiology of Brucella infection in domestic animals. En. K. Nielsen and B. Duncan (ed.). Animal brucellosis. CRC Press Inc., Boca Ratón, Florida. 1990. pp. 301-320. 6 Freer, E y Castro-Arce, R. Brucella: una bacteria virulenta carente 6
  • 9. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial No existe contagio interhumano aunque se discute la transmisión sexual. Cadena epidemiológica de la Brucelosis - Vía cutáneo- mucosa Fuente: Medicina Laboral. Brucelosis: normas preventivas http://www.estrucplan.com.ar/Producciones/entrega.asp?IdEntrega=179 Las bacterias del género Brucella poseen la capacidad de fijarse e introducirse en las conjuntivas o en heridas de la piel. Una vez ingresadas al organismo avanzan por vía linfática hasta llegar al primer centro ganglionar, donde se multiplican, para posteriormente diseminarse a modo de septicemia, con especial afinidad por los órganos del sistema reticuloendotelial donde se localiza intracelularmente; evadiendo así los mecanismos de defensa celulares y humorales. De esta manera la bacteria se transporta dentro de los fagocitos, esparciéndose a diferentes órganos y causando la destrucción de las células que las transportan. La brucelosis puede manifestarse en forma subclínica, subaguda, aguda y crónica con un período de incubación de 7 a 21 días. El inicio suele ser insidioso con fiebre, escalofríos, diaforesis, cansancio, anorexia y lumbalgia. Puede asociarse también a cefaleas, mialgias, odinofagia, tos, estreñimiento y pérdida de peso. Existen adenopatías en el 50% de los casos agudos y esplenomegalia en un 30%. La infección puede localizarse y ocurrir entonces osteomielitis, artritis, abscesos esplénicos, orquiepididimitis y endocarditis. En caso de desarrollarse en forma crónica el paciente puede presentar febrículas, astenia, pérdida de peso, ansiedad o depresión. En nuestro país es una enfermedad de notificación obligatoria, sin embargo las estadísticas oficiales no reflejan el número real de personas infectadas, por lo que se estima que la verdadera incidencia sería de 10 a 25 veces más alta que la indicada. Los casos a menudo no son reconocidos y son tratados como “fiebre de origen desconocido” impidiendo esto el tratamiento oportuno y la intervención epidemiológica adecuada. Tratamiento El tratamiento óptimo de la brucelosis es todavía discutido, a pesar de haberse usado desde 1947, múltiples esquemas de antimicrobianos. La Organización Mundial de la Salud y la Academia Americana de Pediatría, recomiendan un tratamiento con una duración que va de 6 semanas hasta meses dependiendo si existe cronicidad. La cronicidad puede ser debida a que la Brucella es un organismo hábil para sobrevivir y multiplicarse dentro de las células del sistema de defensa del cuerpo. Esto explica la tendencia de esta enfermedad a tener un curso clínico prolongado con recaídas que van del 4 al 41%. En pediatría se necesita la administración prolongada de antiomicrobianos para obtener la curación. Las recidivas por lo común no dependen de la generación de resistencia por parte de Brucella, sino más bien de la interrupción prematura del tratamiento. Durante 4 ó 6 semanas habrá que administrar 2 a 4 mg/ kg/día de doxiciclina vía oral (VO); máximo 200 mg/ día en dos fracciones (ó 30 a 40 mg/kg/día. de tetraciclina VO; máximo 2 g/día en cuatro fracciones). Sin embargo, es mejor no usar la tetraciclina ni doxiciclina en la medida de lo posible en niños menores de ocho años. Otros fármacos adecuados para pacientes de menor edad son el trimetoprim-sulfametoxazol VO (trimetoprim 10 mg/kg/ día; dosis máxima, 480 mg/día y sulfametoxazol, 50 mg/ Kg/ día; dosis máxima 2,4 g/día) en dos fracciones durante cuatro a seis semanas. de los factores de virulencia clásicos. Rev. costarric. cienc. méd, jun. 2001, vol.22, no.1-2, p.73-82. ISSN 0253-2948. 7 RESERVORIO SALVAJE Liebre, rata, jabalí RESERVORIO DOMESTICO Vaca, cabra, cerdo, oveja LECHE Y DERIVADOS CONTAGIO DIRECTO Contacto de piel y mucosas con: secreciones vaginales, abortos, orina, heces, sudor, secresiones nasales CONTAGIO INDIRECTO A través de la contaminación del ambiente por los mismos agentes que originan el contagio directo VIA DIGESTIVA Verduras, agua INGESTION HOMBRE VIA INHALATORIA Polvo del establo, aerosoles
  • 10. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Para disminuir la incidencia de recaídas, muchos expertos recomiendan la terapia por combinación a base de una tetraciclina (o trimetoprim-sulfametoxazol si están contraindicadas las tetraciclinas) y rifampicina. Ante la posibilidad de que surja resistencia a la rifampicina no se recomienda usarla como fármaco único. Paratratarunainfeccióngraveolascomplicaciones,incluídas la endocarditis, meningitis y osteomielitis, es recomendable administrar los sulfatos de estreptomicina o gentamicina en los primeros 7 a 14 días de terapia, además de tetraciclina (o trimetoprim-sulfametoxazol, si está contraindicada la tetraciclina). Además, puede administrarse la rifampicina con este régimen para disminuir la frecuencia de recidiva. En caso de complicaciones letales habrá que prolongar el tratamiento por varios meses. Nosehancorroboradolosbeneficiosdeloscorticosteroides en personas con brucelosis del sistema nervioso. A veces, poco después de comenzar la administración de los antimicrobianos, surge la reacción de Jarisch-Herxheimer (reacción febril aguda, que incluye cefalea, mialgias y un cuadro clínico agravado que dura menos de 24 horas). Se recomienda el aislamiento del paciente hospitalizado. Además de las precauciones estándar, conviene evitar la transmisión por contacto en sujetos con heridas húmedas, con algún tipo de secreción7 . Medidas preventivas La erradicación de la brucelosis en seres humanos depende de la desaparición del género Brucella del ganado vacuno, caprino, ovino y de otros animales. La pasteurización de la leche y de los productos lácteos para consumo humano es especialmente importante para evitar la enfermedad en niños. La certificación de leche cruda no elimina el peligro de transmisión de los microorganismos. En áreas endémicas son de máxima importancia la práctica obligatoria de las medidas de erradicación y la enseñanza que se brinda al respecto. La vacunación con cepa 19 de B. abortus que se realiza de rutina en el ganado bovino junto con la realización de pruebas serológicas y al sacrificio de animales infectados, constituyen las medidas efectivas para la reducción de la incidencia en el ganado bovino. La cría de los porcinos debe realizarse de acuerdo a la reglamentación vigente brucelosis porcina en Argentina. (Resolucion Nº 225/95- Normas para crianza de especie porcina). Las medidas preventivas más importantes son la pasteurización de la leche y la ingestión exclusiva de quesos pasteurizados. Las personas que manipulan carne deben utilizar lentes y ropas protectoras y cubrir (proteger) cualquier lesión de piel para evitar su infección. La detección de animales infectados permite controlar su diseminación. Existen vacunas para el ganado, pero no para los seres humanos. 7 American Academy of Pediatrics [Resumen de enfermedades infecciosas]. En: Pickering LK (ed.). Red Book (Libro Rojo). Memoria del Comité de Enfermedades Infecciosas para 2003. 26a ed. México: Intersistemas, 2004: [236-238] 8
  • 11. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Red Nacional de Brucelosis Humana Dra. Nidia E. Lucero ANLIS Dr. C. G. Malbrán, Avda. Velez Sarsfield 563, 1281 Buenos Aires Tel: (11) 4301-7801, Fax: (11) 4303-2382, E-mail: nidia@elsitio.net Dentro de la estructura de la Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. C.G.Malbrán” (ANLIS) y en el marco del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI), el servicio de brucelosis creado en 1994, efectúa diagnóstico serológico, control de calidad de reactivos y producción de biológicos de referencia; realiza aislamientos, identificación y tipificación de cepas; mantiene la colección de cepas de Brucella y transfiere tecnología e información a las provincias con el objeto de estandarizar el diagnóstico de esta zoonosis. Información epidemiológica Por ser una enfermedad de notificación obligatoria, el Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica (SINAVE), de la Dirección de Epidemiología del Ministerio de Salud Pública, informa semanalmente los casos detectados por provincia y regiones sanitarias (Figura 1). En el año 2004 se registraron 295 casos, principalmente en Buenos Aires(68), Mendoza(68), Salta(35) y Santa Fe(20) pero no hubo información de Chubut, Misiones, Neuquen, Santa Cruz, Santiago del Estero y Tierra del Fuego. En el 2005 se notificaron 284 casos, en su mayoría en Mendoza(84), Buenos Aires(57), Córdoba(44) y Salta (22) pero no hubo registros en Chubut, Entre Ríos, Jujuy, La Rioja, Misiones, Neuquen, Río Negro, San Luis, Tierra del Fuego y Tucumán. Figura 1: Casos de brucelosis informados en Argentina durante el período 1992-2005 Fuente: Dirección de Epidemiología. Ministerio de Salud de la Nación. Brucelosis se controla en sangre a transfundir y es el Centro Nacional de Redes de Laboratorios de la ANLIS (CNRL) quien publica la información sobre donantes reactivos detectados en Bancos de Sangre oficiales y privados de cada provincia. Se trata de una infección considerada de riesgo ocupacional, incluida en la lista de las enfermedades profesionales, se puede transmitir a través de alimentos contaminados, se controla en Bancos de Sangre y ha emergido en los últimos años en nuevas especies de animales. Red Nacional de brucelosis humana Para llevar a cabo el objetivo que originó su creación, el servicio de Brucelosis de la INEI-ANLIS, comenzó a formar una Red Nacional de Laboratorios dando prioridad a las provincias del NOA por ser el área más afectada. Hoy, trece provincias y seis regiones sanitarias de la provincia de Buenos Aires (Figura 2) cuentan con profesionales capacitados para realizar el diagnóstico, cumplen con un programa de control de calidad del diagnóstico y a la vez supervisan los efectuados en los centros de salud de su región. 9 0 100 200 300 400 500 600 700 800 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Año Casos
  • 12. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Figura 2: Provincias y jurisdicciones que integran la Red Nacional de Brucelosis Humana Fuente: N. Lucero, INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrán La estructura en Red permite: •Centralizar la información sobre la situación de la enfermedad. • Difundir medidas de prevención • Distribuir reactivos y medios de cultivo • Estimular el desarrollo del diagnóstico bacteriológico. En las provincias que integran la Red hoy se dispone de datos detectados en Bancos de Sangre, consultorio clínico, embarazadas, pre-ocupacionales, pre-transplantes, donantes, traumatología y otros servicios que demuestran la sub-notificación de la enfermedad. Diagnóstico bacteriológico Actualmente el diagnóstico bacteriológico se realiza con mayor frecuencia ya que ante un cuadro febril de origen desconocido, de rutina se toman hemocultivos y con la difusión de los equipos automatizados se ve facilitado el aislamiento en los casos de bacteriemia por B. melitensis o B. suis. Cuando en el laboratorio del hospital se aísla Brucella y no se sospecha su presencia, la identificación por los sistemas rápidos puede confundir al bacteriólogo. El género Brucella aún no está incluido en las bases de datos de los kits comerciales para la identificación de microorganismos gram negativos y su utilización puede retrasar el diagnóstico y exponer al profesional al riesgo de contraer la infección. En nuestro laboratorio hemos aislado Brucella del hemocultivo de profesionales que intentaban identificar cepas procedentes de pacientes y controlamos serológicamente al personal de varios laboratorios hospitalarios que se expusieron por igual motivo. LamanipulacióndecepasdeBrucelladeberealizarseteniendo en cuenta que se trata de un microorganismo clasificado en el nivel de riesgo III y pertenece al grupo B de gérmenes que pueden ser usados como potencial arma biológica6-8 . El clínico debería advertir al laboratorio sobre la posibilidad de encontrar este germen aunque la enfermedad suele presentar síntomas diversos e inespecíficos. En los últimos 12 años, bajo este proyecto, hemos aislado de humanos 334 cepas de Brucella (Tabla 1) en su mayoría de sangre, médula, LCR, líquido articular, líquido prostático o biopsias con la siguiente distribución: 39 % B. suis, 38% B. melitensis, 22 % B. abortus y 1 % B. canis I-II, V-VII . Tabla 1: Cepas de Brucella aisladas de Humanos en Argentina INEI-ANLIS “Dr.C.G.Malbrán” 1994-2005 Fuente: N. Lucero, INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrán 10 8 Epidemiología ANLIS n 199 10 27 1 3 2 4 41 1 3 1 3 10 2 25 2 334 Buenos Aires Catamarca Córdoba Entre Ríos Jujuy La Pampa La Rioja Mendoza Misiones Neuquen Río Negro San Juan Santa Fe Sgo. del Estero Salta Tucumán Total 1 58 4 1 63 2 4 1 5 72 C19 4 4 1 30 9 5 3 41 2 3 1 21 1 116 1a 1 3 1 1 1 7 126 2a 1 1 3 2 2 1 50 10 1 1 1 1 1 1 4 1 1 72 134 1a 49 6 1 4 2 62 2 2 2 Provincia B. abortus B. melitensis B. suis B. canis
  • 13. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial La tipificación de las cepas en especies y biovariedades se realiza utilizando las clásicas pruebas bioquímicas, serotipificación y lisotipia, incluyendo cepas patrones de referencia y la confirmación de los resultados, en algunos casos se realiza por PCR-RFLP usando diferentes enzimas de restricción. B. abortus, B. melitensis, B. suis y B. canis han demostrado ser patógenas para el hombre aunque tienen una distribución geográfica limitada coincidente con la especie animal que predomina en la región. Durante el período 1996-2005, aislamos de perros de distintas razas, domiciliarios o de criaderos 147 cepas de B. canis, procedentes en su mayoría de Ciudad y provincia de Buenos Aires. Diagnóstico serológico Aunque el aislamiento de Brucella es evidencia irrefutable de la infección, los métodos serológicos prueban indirectamente la presencia del germen. Las técnicas convencionales usadas como tamiz en el diagnóstico de brucelosis humana, son las de Huddleson, Rosa de Bengala o BPA, que utilizan antígenos preparados con Brucella abortus en fase lisa y detectan anticuerpos anti B. abortus, B. melitensis y B. suis. Por ser rápidas, accesibles y fáciles de realizar se emplean para tener una pronta respuesta y descartar otras patologías con síntomas comunes. La prueba de Huddleson no es la más recomendada ya que el pH neutro del antígeno favorece la aglutinación de inmunoglobulinas de tipo IgM y puede dar reacción cruzada con otros microorganismos. Rosa de Bengala y BPA por su bajo pH, privilegian la aglutinación de las inmunoglobulinas tipo IgG reduciendo lasreaccionesinespecíficas.BPAesligeramentemássensible que Rosa de Bengala y se recomienda para el estudio de brucelosis en sangre a transfundir. Entre las pruebas confirmatorias convencionales las de Wright, 2-mercaptoetanol y fijación de complemento, por su bajo costo, siguen utilizándose en la actualidad en algunos países. La primera ha sido utilizada como prueba estándar y a menudo como única confirmatoria, el antígeno tiene el mismo pH que la de Huddleson y presenta los mismos inconvenientes. Hay discrepancias respecto al punto de corte y algunos autores han sugerido el título 1:320 en las área rurales y 1:80 en áreas donde la enfermedad no es endémica. Detecta en el suero isotipos IgM, IgG e IgA suero, es de baja especificidad y no recomendable en casos crónicos. La prueba de 2-mercaptoetanol se realiza paralelamente con la de Wright, utilizando el reactivo, que es tóxico, para eliminar los anticuerpos de tipo IgM y aumentar la especificidad, pero el 2-mercaptoetanol también reduce la cantidad de anticuerpos IgG presentes en el suero por lo cual el uso de esta técnica se esta discontinuando. La fijación de complemento es una prueba sensible y específica, detecta anticuerpos de tipo IgG que predominan en los casos crónicos, pero tiene el inconveniente del poder anticomplementario que presentan algunos sueros, es muy laboriosa y poco apropiada en casos agudos. Las modernas pruebas de unión primaria tienen la ventaja de su alta sensibilidad y especificidad, detectan anticuerpos asimétricos, comunes en los pacientes crónicos y reducen la reacción cruzada con otros gérmenes gram negativos. CELISA es una ELISA de competición que utiliza un anticuerpo monoclonal específico para una porción de la cadena “O” del S-LPS de Brucella, que compite con los anticuerpos del suero por el antígeno fijo en el soporte sólido. Ha demostrado tener una sensibilidad del 98.3% y una especificidad de 99.7%, detecta casos agudos y crónicosIII . La técnica de polarización fluorescente (FPA)IV , tiene la ventaja de realizarse en tubos de vidrio de 12x75mm, que se pueden volver a usar luego de su lavado, se realiza en pocos minutos, tiene una sensibilidad del 96.1% y una especificidad del 97.9% y al igual que CELISA detecta casos agudos y crónicos, pero requiere de un polarímetro para su lectura, mientras CELISA puede utilizar cualquier lector cuyo uso es habitual en los laboratorios clínicos. Cuando la sospecha es de infección por Brucella canis el diagnóstico se realiza utilizando antígenos preparados con la cepa B. canis M. La prueba de microaglutinación (RSAT) se utiliza como tamiz y una ELISA indirecta para confirmar los casos, esta última utilizando una proteína recombinante como conjugado. 11
  • 14. Boletín Epidemiológico Periódico Boletín especial Comentarios Las pruebas diagnósticas descriptas se realizan en nuestro laboratorio y han sido transferidas a los responsables de los laboratorios provinciales o jurisdiccionales que integran la Red, quienes utilizan reactivos controlados y cumplen con un programa de control de calidad del diagnóstico. Los aislamientos de Brucella que presentamos constituyen información epidemiológica de interés; llama la atención una nueva variante de B. melitensis en la zona del noroeste Argentino y la adaptación a las condiciones de la región de una B. suis resistente a bacteriostáticos. Además, informamos sobre la brucelosis canina como potencial zoonosis urbana. I Corbel MJ, Thomas EL, Garcia Carrillo C. Taxonomic studies on some atypical strains of Brucella suis. Br Vet J. 1984; 140: 34-43. II Lucero NE, Greco G, Carrete PA. Brucella melitensis biovar 3 in Argentina? [Article in Spanish] Rev Argent Microbiol. 1999; 31(suppl 1): 58-59. III LuceroNE.,FogliaL.,AyalaSM.,GallD.,NielsenK.Competitive Enzyme Immunoassay for diagnosis of human brucellosis”. J.Clin. Microbiol. 1999. 37(10), 3245-3248. IV Lucero NE, Escobar GI, Ayala SM, Paulo PS, Nielsen K. Fluorescence polarization assay for diagnosis of human brucellosis” J Med Microbiol. 2003.; 52: 883-887. V Lucero NE, Jacob NO, SM Ayala et al. Unusual clinical presentation of brucellosis caused by Brucella canis. J Med Microbiol. 2005; 54: 505-508. VI Lucero NE, Siñeriz F. The Argentine experience in enhancing biosafety through good laboratory practices. Asian Biotech and Develop Rev. 2005; 8 (1): 99-120. VII Lucero NE, Ayala SM, GI Escobar et al. A new variant of Brucella melitensis. Clin Microbiol Infect. 2006: 12: 593-596. VIII Yagupsky P, Baron EJ. Laboratory exposures to brucellae and implications for bioterrorism. Emerg Infect Dis. 2005; 8:1180- 1185. 12
  • 15.
  • 16. Ministerio de Salud de la Nación Av. 9 de Julio 1925, (C1073ABA) Cdad. Autónoma de Bs. As. Teléfono: (54-11) 4379-9000 / Web: www.msal.gov.ar DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA