Darcy Dariani Archbold Culfi Biologia Molecular III Semestre 2018 - 01 https://youtu.be/oOlY0b6ERQc

1. Darcy D. Archbold Culfi
Tercer semestre
Medicina
2018-1

2. INTRODUCTION
ANTIMICROBIAL SENSITIVITY
Antimicrobial sensitivity is the ability of an
antibiotic or a chemotherapeutic system to
interact with a microorganism and decrease its
rate of replication, and thereby eliminate the
colony.
HIGH FREQUENCY
ELECTROMAGNETIC FIELDS
The Electromagnetic Fields (CEM) are a
combination of electric and magnetic waves
that move simultaneously and spread to the
speed of light.
They are classified into two large groups:
Radiation ionizing and radiations non-
ionizing
The World Health Organization subdivides
the latter into:
• Extremely low frequency electromagnetic
fields (FEB, or ELF), Intermediate frequency
(IF) fields, High frequency electromagnetic
fields (EMF)

3. The relation between the high frequency magnetic
fields and the bacterial sensitivity is that the magnetic
fields in general have the capacity to decrese or not the
formation of bacterial colonies, since some generate
mutations in the bacterial DNA and therefore the
bacteria are much more sensitive or not to the
antimicrobials.

4. OBJECTIVE
• The aim of the present
study was to determine the
effect of electromagnetic
fields (900 and 1800 MHz),
i.e. the frequency produced
by mobile phones on the
growth and antibiotic
sensitivity of a variety of
bacteria.

5. MÉTODOS
BACTERIAS USADAS
• Staphylococcus aureus (ATCC 29213)
• Staphylococcus epidermidis (ATCC 25923)
• Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
EXPOSICIÓN A CAMPOS
ELECTROMAGNETICOS
1. Radiación electromagnética de dispositivo móvil
(Nokia).
2. Se estableció una llamada de voz ficticia entre Radio
Communication Tester CMU 200 por Rhode y
Schwarz (emulador de estación base) y el teléfono
móvil.
3. Las bacterias se colocaron en las proximidades de
esta fuente de radiación electromagnética a
frecuencias de 900 MHz y 1800 MHz durante dos
horas.

6. E X T A C C I O N D E L
D N A
• El ADN cromosómico de las bacterias
expuestas y no expuestas se extrajo
utilizando el mini kit QIAamp DNA
• La calidad del ADN bacteriano
aislado se cuantificó luego mediante
un espectrofotómetro UV-Vis
NanoDrop 8000

7. PCR REPETITIVA BASADA EN SECUENCIAS (REP-
PCR)
Se utilizaron dos cebadores:
1. REP1R (50-III ICG ICG ICA TCI GGC-30)
2. REP2I (50-ICG ICT TAT CIG GCC TAC-30)
Las amplificaciones se llevaron a cabo en
una mezcla de PCR que contenía (25 ll):
• DMSO
• Tampón Gauthier 5X
• Soluciones listas para usar Go Taq
Green Master Mix
• Tampones de reacción.
Se utilizó un sistema de PCR ProFlexTM GI
Desnaturalizació
n inicial (95ºC, 2
min)
30 Ciclos de
desnaturalización (94ºC
durante 30 s y 92ºC durante
30 s)
Recocido (40ºC
por 1 min)
Extensión final
(65ºC por 8 min)
Los fragmentos de Rep-PCR se
dividieron usando electroforesis
en geles de agarosa.

8. SUCEPTIBILIDAD BACTERIANA
Los antibióticos que se usaron luego de la
exposición de CEM fueron:
• Amoxicilina (30 mg)
• Azitromicina (15 mg)
• Cloranfenicol (10 mg)
• Ciprofloxacina (5 mg)
• PRUEBA DE DIFUSION DE DISCOS
(ANTIBIOGRAMA)
Se usó para determinar la
susceptibilidad de las bacterias a los
antibióticos después de la
exposición a campos
electromagnéticos.

9. RESULTADOS
1000
23 1456789 M
100
200
300
400
500
650
850
1650
2000
bp
Fig. 2. Típicas huellas dactilares de Rep-PCR de bacterias expuestas al campo
electromagnético, carril (1) S. aureus no expuesto-control, carril (2) S. aureus expuesto a 900
MHz, carril (3) S. aureus expuesto a 1800 MHz , carril (4) S. epidermidis no expuesto-control,
carril (5) S. epidermidis expuesto a 900 MHz, carril (6) S. epidermidis expuesto a 1800 MHz,
carril (7) P. aeruginosa no expuesto control, carril (8) P. aeruginosa expuesta a 900 MHz, carril
(9) P. aeruginosa expuesta a 1800 MHz y carril (M) contiene una escalera de ADN de peso
molecular de 1 Kb (Promega).
• Los patrones de ADN bacteriano
obtenidos después de la electroforesis
en gel de agarosa NO mostraron
ninguna diferenciación entre los S.
aureus y S. epidermidis expuestos a
900 y 1800 MHz y los controles.
• Los resultados obtenidos para P.
aeruginosa por otro lado mostraron
diferencias entre el control y la
siguiente exposición a radiación de
900 MHz y 1800 MHz, apareciendo
más bandas después de la exposición
a 900 y 1800 MHz en comparación
con el control
Rojo: S. aureus
Azul: S. epidermidis
Amarillo: P. aeruginosa

10. RESULTADOS
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
82 4 6 10 12 14
Abosorbance (600 nm) Time (hr)
Control 900 MHz
Fig. 3. Efecto de EMF (900 MHz) en la tasa de crecimiento de
Staphylococcus aureus. Medios ± SD de 3 experimentos
diferentes.
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
2 4 6 8 10 12 14
Abosorbance (600 nm)
Time (hr)
Control 900 MHz
Fig. 5. Efecto de EMF (900 MHz) en la tasa de crecimiento de
Staphylococcus epidermidis Medios ± DE de 3 experimentos
diferentes

11. RESULTADOS
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
2 4 6 8 10 12 14
Abosorbance (600 nm)
Time (hr)
Control 900 MHz
Fig. 7. Efecto de los CEM (900 MHz) en la tasa de crecimiento
de Pseudomonas aeruginosa. Medios ± SD de 3 experimentos
diferentes.
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
2 4 6 8 10 12 14
Abosorbance (600 nm)
Time (hr)
Control 1800 MHz
Fig. 8. Efecto de los CEM (1800 MHz) en la tasa de crecimiento de
Pseudomonas aeruginosa. Medios ± SD de 3 experimentos
diferente

12. RESULTADOS
Antibiotics Control Expose
900 MHz
Expose
1800 MHz
Chloramphenicol (10 mg)
18.66a* ± 1.15 18.33a ± 0.57 19.33a ± 0.57
Ciprofloxacin (5 mg) 28.33a ± 0.57 28a ± 0.0 28.33a ± 0.57
Amoxicillin (30 mg) 31.33b ± 1.15 33.66a ± 0.57 32.33a ± 0.57
Azithromycin (15 mg) 24.33a ± 1.15 24.33a ± 0.57 24.33a ± 0.57
Tabla 1. Valores de la zona de inhibición (mm) para
Staphylococcus aureus cuando no está expuesto (control) y
después de exposición a campos electromagnéticos (900 y 1800
MHz)
Antibiotics Control Expose
900 MHz
Expose
1800 MHz
Chloramphenicol (10 mg) 25a* ± 0.0 24.33a ± 0.57 24.66a ± 0.57
Ciprofloxacin (5 mg) 14.33a ± 0.57 14.66a ± 0.57 14a ± 0.0
Amoxicillin (30 mg) 14.66a ± 0.57 15.66a ± 0.57 15.33a ± 0.57
Azithromycin (15 mg) – – –
Tabla 2. Valores de la zona de inhibición (mm) para
Staphylococcus epidermidis cuando no está expuesto (control) y
después de la exposición a campos electromagnéticos (900 y 1800
MHZ).
Antibiotics Control Expose
900 MHz
Expose
1800 MHz
Chloramphenicol (10 mg) – – –
Ciprofloxacin (5 mg) 30a*±1.0 29.33a ± 0.57 30a ± 0.0
Amoxicillin (30 mg) – – –
Azithromycin (15 mg) 20.66a ± 1.15 22a ± 0.0 20.33a ± 0.57
Tabla 3. Valores de la zona de inhibición (mm) para
Pseudomonas aeruginosa cuando no está expuesto (control) y
después de la exposición a campos electromagnéticos (900 y
1800 MHZ).

13. DISCUSSION
AUTOR WHAT DID HE SAID YES OR NO
Potenza et al.
Results of non-invariant electrophoretic
patterns between XL-1 control cells of E.
coli and those exposed to the high
magnetic field (HSMF) in in vivo
experiments using random amplified
polymorphic DNA (RAPD-PCR).
Cellini et al.
Exposure to magnetic field radiation
induce normalized DNA alterations in
organisms with cellular protective
responses.
Strasak et al.
Concluded that the inhibitory effects on
bacterial growth increased with the
duration of exposure.
El-Sayed et al
The result of the field is maximum in the
first hours and then decreases,
indicating an adaptive response of the
cells that show the stress of the
magnetic field. Such an adaptive
response may be due to an increase in
heat shock proteins

14. CONCLUSIONS
1. We do not see any favorable result in the two
type of gram positive bacterias maybe because
the time of exposition that they use in the study
was to short.
2. This study could be helpful in the future, if they
continued study whith another tipe of bacteria
and another tipe of electromagnetic waves that
can damage us.