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Recurso genético del Genero
Pleurotus sp.
presente en el Estado Mérida.
Br. Eduardo A. Chalbaud M.
Tutor:
Prof. Balmore Guerrero
Jurado:
Prof. Juan Gaviria
Prof. Julio O. Rojas
Prof. Pablo García
Seminario II
Hongos Comestibles
Latinoamérica
Perú
México y Guatelama
P. ostreatus
P. eryngii
Historia de los Hongos en Desarrollo del Hombre
El genero Pleurotus spp.
(Hongo ostra)
P. ostreatus
P.cornucopiae
P.nebrodensis
P. ostreatus
14% producción
Agroindustrial
mundial
Figura 1.4. Ciclo de vida del género Pleurotus sp. Tomado de: Valencia-del Toro, 2002.
Justificación del proyecto y aplicabilidad de los resultados:
El genero Pleurotus (Jacq.: Fr.) Kumm. (Pleurotaceae,
higher Basidiomycetes)
Hongo Orellana
Hongos comestibles
Siendo así un trabajo integrado la clasificación e identificación de las especies del
género Pleurotus por medio:
Proteómica
El análisis múltiple de los genes en diferentes locus; destacando
entre ellos los genes nu-SSU, -LSU, 5.8S rRNA,rpb1, rpb2 y tef1.
El análisis morfo- anatomico
Taxonomía
Especie
Sinónimos y/o taxa de
nivel de sub especies
Grupos
Norte
América
Europa Asia
América del
Sur
África Australia
Pleurotus otreatus
P. combilunus; P. florida;
P. salignus;
P. spodoleucus
I * * *
P. pulmonarius P. sajor-caju; P. sapidus II * * * *
P. populinus III *
P. cornopopiae P. citrinopeliatus IV * *
P. djamor
P. flabellatus;
P. otreatoroseus;
P. salmoneostramineus;
P. euosmus
V * * * * * *
P. eryngii
P. ferulae; P. nefrodensis;
P. hadamardii
VI * *
P. cystidiosus P. abolanus VII * * * * *
P. caliptratus VIII *
P. levis VIII *
P. dryinus IX * *
P. purpureo-
olivaceus
X *
P.turber-regiun XI * * * *
P. agaves XI *
P. abieticola XI *
P. brazil XI *
P. australis XI *
Tabla 1.3 Especies biológicas establecidas dentro del género Pleurotus, sus sinónimos correspondientes y/o
taxa de nivel de subespecies, y grupos respectivos de íntercompatibilidad; y su distribución mundial.
Tomado: Kong w. 2005 y Vilgalys et al., 1996.
Pleurotus sp. En Venezuela
Figura 2.1. Distribución geográfica del género Pleurotus sp. en la República Bolivariana de Venezuela desde 1950 a 2006. Tomado y
modificado de Iturriaga & Minter (2006).
Materiales y Metodología
Laboratorio de Biotecnología de los Microorganismos
“SIXTO DAVID ROJO” Universidad de los Andes
Edo Mérida.
Localización
Aspectos generales del
área de estudio
Figura 3.1 Localización geográfica del Estado Mérida, Venezuela y ubicación de los
sitios de colecta. Tomado y modificado de Ataroff & Sarmiento 2003.
Municipios del Estado
Mérida:
Mcpio. Santos Marquina
Mcpio. Libertador
Mcpio. Campo Elías
Mcpio. Sucre
Mcpio. Alberto Adriani
Materiales y Metodología
Excursiones de colecta de los aislados del género Pleurotus sp. presentes
en el Estado Mérida.
Figura 3.2. Transecta idealizada de la región Los Andes venezolanos desde el Estado Trujillo al Estado Táchira, y los límites de la colecta de
los hongos del genero Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida. Tomado de Casanova, 1998.
Materiales y Metodología
Microrganismos
Especies Variedad Código de aislado Fuente
original
Origen
Geográfico
Hospedador / Sustrato
Pleurotus ostreatus var. florida 3215 INIFAT Cuba Cuña
Pleurotus sp. 132 INIFAT Cuba Cuña
P. citrinopeliatus P.cit INIFAT Cuba Cuña
P. ostreatus P.ost INIFAT Cuba Cuña
P. ostreatus RAI CT Táchira Cuña/ Carpóforo
P. ostreatus RAII CT Táchira Cuña/ Carpóforo
P. ostreatus RAIII CT Táchira Cuña/ Carpóforo
P. ostreatus MOS MSM Mérida Leño
Pleurotus sp. PEP CE España Cuña
P. cornucopiae PCF CAN Canadá Semilla de trigo
INIFAT (Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura tropical “Alejandro de Humboldt); CT (Cepa comercial en el Estado Táchira); CE (Cepa comercial de España); CAN (Canadá).
Tabla 3.1.Aislados y cepas de especies del género Pleurotus sp. presentes en el Laboratorio
de Biotecnología de los Microorganismos “SIXTO DAVID ROJO”.
Materiales y Metodología
Aislamiento del material fúngico colectado
Aislamiento del micelio a
partir de trozos de
carpóforo con
desinfección.
Aislamiento de micelio
a partir de carpóforo
con cámara húmeda.
Aislamiento de
micelio a partir de
esporada tomada en
papel.
Aislamiento de micelio a
partir de esporas atrapadas
en agar.
Caracterización Morfo-anatómica.
Identificación por medio de la descripción de los carpóforos de acuerdo con
Largent (1977) y Vilgalis et al. 1993.
Descripción macroscópicas
COSECHA
Materiales y Metodología
Anexo A. Keys of genero Pleurotus sp.
Keys abound for limited groups (Vilgalys et al., 1993, for the P. ostreatus complex) or of limited accuracy (Pilát, 1935; Kühner and
Romagnesi, 1953; Hilber, 1982, 1993, 1997).
To devise a key to this group is fraught with problems, for basidiome colors, hosts, and stature often intergrade, and geographical
distribution is often wide and therefore creates overlaps. Especially vexing is the separation of Pleurotus pulmonarius from its sister
monomitic, pleurotoid species, P. ostreatus and P. populinus. With these problems in mind, the following key to biological species is
offered.
1. Anamorphic spores produced on basidiomata or associated vegetative mycelium ..…………...…… 2
1. Anamorphic spores, if formed, not associated with basidiomata ……………………………..…...... 4
2. Anamorphic state a lawn of simple conidiophores producing black arthrospores, dry initially but later slimy; Australa, New Zealand.
……..……………….............................................................. P. australis
2. Anamorph coremioid, with black, slimy heads of arthrospores ...……………..…….………........… 3
3. Pileus pale tan to brown; distribution roughly pantropical …………………………….. P. cystidiosus
3. Pileus deep olive, olive-black, occasionally with purplish tints; New Zealand, Australia… P. purpureo-olivaceus
4. Stipe central to weakly eccentric ………………………………………….....................…..….…… 5
4. Stipe strongly eccentric or lateral …………….…………………....................…….……….……... 11
5. Pileus tan, brown, rufous brown, usually concave ………………………………………...………….6
5. Pileus pearl gray, white, or banana yellow …………………….………...................................…… 8
6. Basidiomata arising from a sclerotium …………...……………............................… P. tuber-regium
6. Basidiomata without sclerotium ……………………………………………............................……. 7
7. Root parasite; pileus tan to brown; Europe ……………………………...……………...….. P. eryngii
7. On rotting wood; pileus tan, brown, usually with ruddy tints ………....……………... P. cornucopiae
8. Pileus and stipe white to pearl gray ……………………………………………………..……...…… 9
8. Pileus banana yellow; stipe white (citrinopileatus form) ………………………......… P. cornucopiae
9. Stipe nearly lateral; on Agave, Opuntia; northern Africa, Mexico …….........................… P. opuntiae
9. Stipe central; all basidiome parts white ………………………………………………...……..…… 10
10. Pileus surface velutinous to plushy; warm climates; anamorph unknown …........................ P. levis
10. Pileus surface strigose to wooly; cool, wet climates; anamorph of tan to Brown arthrospores in culture
………………………………………………….....................................................…. P. dryinus
11. Stipe tissue dimitic …………………………………………...…………………...…................…. 12
11. Stipe tissue monomitic ……………………………………...………………...……...............…… 14
12. Partial veil present over young lamellae ……………………..……………......……… P. calyptratus
12. Partial veil absent …………………………………………..………....................................…….. 13
13. Basidiomata usually everted; pileus surface ruddy tan to ruddy brown……………... P. cornucopiae
13. Basidiomata pleurotoid; pileus surface white, yellow-olive, brown, olive-brown, pink or gray
……………………………….………..............................................................................… P. djamor
14. On coniferous wood; northern China, far eastern Russia …………………...………..... P. abieticola
14. On deciduous wood (chiefly) ………………………………………………...……...............……. 15
15. Pileus and lamellae buffy tan to pastel tan; lamellae subdistant; spore print pallid buff; spores 9-12 X 3-5 m m; North America; usually
on Populus wood..............………………………….... P. populinus
15. Pileus various shades of off-white, tan, brown, deep gray, bluish olive to olive-black; spore print avellaneous; spores 7-10 m m long;
worldwide; usually on deciduous wood ………………………... 16
16. Fruiting predominately in winter; pileus tan, brown, gray-brown, olive-black; North Temperate Zone
………………………..……………………………................................................... .P. ostreatus
16. Fruiting predominately in late summer (Europe, Asia, eastern North America) or spring (western North America); pileus white, tan,
gray-brown; North Temperate Zone ..…................... P. pulmonarius
Materiales y Metodología
Amplificación por PRC de la región 5.8S
ADN Fúngico
Los primers universales para hongos (White et al. 1990):
ITS1 (5' TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3')
ITS4 (5' TCCTCCGCTTATTGATATGC 3')
Figura 3.3 Localizcion de los Primers para la amplificacion de la region del
ARN Ribosomal ITS1, 5.8S y ITS2. SSU (subunidad pequeña), LSU
(subunidad grande) y ITS (Espaciadores de Transcripción Internos ).
Tomado de White et al.1990).
Tm 58 ºC
Tm 60 ºC
Extracción de ADN
Bioinformática
software Clustal W del EMBI
software MEGA versión 5.1
software BIoEdit 7.1
Crecimiento micelial de los aislados del género Pleurotus sp. en medio
convencionales y sustratos lignocelulósicos a diferentes temperaturas la
temperatura
Materiales y Metodología
Software ImageJ
Tasa radial de crecimiento micelial en medios convencionales y en sustratos lignocelulósicos
r = 𝜋 ∗ 𝐴
Donde:
A = área de la muestra
r = radio
Crecimiento
miceliar
(mm)
Días (d)
SA
PDA
20, 25, 30 y 35 °C.
Temperaturas a evaluar
Crecimiento micelial de los aislados del género Pleurotus sp. en medio
convencionales y sustratos lignocelulósicos a diferentes temperaturas la
temperatura
Materiales y Metodología
Semilla de parchita
Semilla de Sorgo
Modelo del crecimiento radial de la colonia en medio sólido
Dimensión fractal de textura de la proyección tridimensional
del micelio.
r = m (t) –b
Donde, (t) es el tiempo de
incubación en horas, (m) la
tasa de crecimiento micelial en
mm/d y (r) es el radio de la
colonia fúngica en mm.
Resultados
Distribución geográfica de los hongos del genero Pleurotus sp.
presentes en el Estado Mérida.
Especies Código de aislado Fuente
original
Origen Geográfico Hospedador / Sustrato Unidad Ecológica Altitud (m.s.n.m)
Pleurotus sp. MOS
MSM Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1740
Pleurotus sp. PJB
MLJB Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1810
Pleurotus sp.
PLB
MSL Mérida Pino laso (Retrophyllum
rospigliosii)
Bosque Siempreverde Seco
Montano Bajo
1034
Pleurotus sp. PLM
MLMZ Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 2018
Pleurotus sp. PFFb
MLFF Mérida Madera Selva Nublada Montana Baja 1750
Pleurotus sp. PFFIV
MLFF Mérida Madera Selva Nublada Montana Baja 1750
Pleurotus sp. PEV
MEV Mérida Hojarasca Arbustal Espinoso 116
Pleurotus sp. PEE
MCE Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1029
Tabla 4.1. Aislados del género Pleurotus sp. encontrados en el Estado Mérida.
*Nota: MSM (Municipio Santos Marquina); MLPM (Municipio Libertador, Parque las Madres); MLMZ (Municipio Libertador, Parque
Nacional Sierra la Culata Monte Zerpa); MLJB (Municipio Libertador Jardín Botánico Mérida); MSL (Municipio Sucre Parque Nacional
Yoama); MLFF (Municipio Libertador, Facultad de Forestal ULA); MEV (Municipio Alberto Adriani, El Vigía); MCE (Municipio Campo Elías,
Poso Hondo).
Resultados
Distribución geográfica de los hongos del genero Pleurotus sp.
presentes en el Estado Mérida.
Figura 4.1 Distribución geográfica del genero Pleurotus sp. en el Estado Mérida.
Coordenadas UTM
Localidad Municipio Hongo
Altitud
(msnm)
X Y
262033.00 955103.00 Parque Nacional Sierra la Culata Monte Zerpa Libertador Pleurotus sp. 2018
264003.00 953972.00 Jardín Bótanico de Mérida Libertador Pleurotus sp. 1810
210914.00 951858.00 El Vigia Alberto Adriani Pleurotus sp. 116
236402.00 940857.00 Laguna de Urao Sucre Pleurotus sp. 1034
264759.00 953846.00 Facultad de Ciencias Forestales Libertador Pleurotus sp. 1750
253572.00 944442.00 Pozo Hondo Campo Elias Pleurotus sp. 1029
262342.00 949567.00 Parque las Madres Libertador Pleurotus sp. 1513
271926.00 954572.00 L.B. Miguel Otero Silva Santos Marquinca Pleurotus sp. 1740
301509.00 971780.00 Laguna Negra Rangel Pleurotus sp. 3470
298605.00 972657.00 Laguna de Mucubají Rangel Pleurotus sp. 3625
302205.00 972701.00 Laguna La Canoa Rangel Pleurotus sp. 3518
Especies Cepa / Aislado Medios de Cultivo
Características
Color Textura Densidad Micelio aéreo Forma Elevación Margen Superficie
P. ostreatus
3215
PDA Amarillo
Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Sectorizada
SA Blanco
Pleurotus sp. 132
PDA
Amarillo Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado
Sectorizada
SA Cerebriforme
P. citrinopeliatus P.cit
PDA
Blanco Algodonosa Alta No
Filamentoso
Convexa umbilicada Liso Sectorizada
SA Circular
P. ostreatus P.ost PDA
Blanco Algodonosa Alta
Si Filamentoso
Elevada y limitada Deflecado
Cerebriforme
SA No Circular Sectorizada
P. ostreatus
RAI
PDA
Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA
P. ostreatus
RAII
PDA
Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA
P. ostreatus
RAIII
PDA
Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA
Pleurotus sp. MOS
PDA
Blanco
Polvorienta
Alta No Filamentoso
Nula
Deflecado
Plegada
SA Algodonosa Elevada y limitada Cerebriforme
Pleurotus sp. PJB
PDA
Blanco Algodonosa Alta Si Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA
Pleurotus sp. PLB
PDA Rosado
Algodonosa Alta No Rizoidal Elevada y limitada Deflecado
Cerebriforme
SA Blanco Sectorizada
Pleurotus sp. PFFb
PDA
Blanco Algodonosa Alta No
Filamentoso
Elevada y limitada Deflecado
Cerebriforme
SA Iregular Sectorizada
Pleurotus sp. PFFI
PDA
Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada
Deflecado
Cerebriforme
SA Ondulado
Pleurotus sp. PFFIV
PDA
Blanco Algodonosa Alta
Si
Filamentoso Elevada y limitada
Deflecado Sectorizada
SA No Ondulado Cerebriforme
P. ostreatus
PEP
PDA Blanco Algodonosa
Alta No
Filamentoso Elevada y limitada Deflecado
Cerebriforme
SA Beige Polvorienta Circular Plana y Extendida Liso o entero
Pleurotus sp. PEV
PDA Blanco Algodonosa Alta No
Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA Blanco Algodonosa Alta No
Pleurotus sp. PEE
PDA
Beige Polvorienta Alta
Si
Rizoidal y Filamentoso Plana y Extendida
Deflecado
Sectorizada
SA No Liso o entero
P. cornucopiae PCAN
PDA Blanco
Algodonosa
Alta
No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme
SA Blanco Media
Tabla 4.1 Características macroscópicas de las colonias de los aislados de los
diferentes aislados y cepas de especies del género Pleurotus sp. presentes en el
Estado Mérida, evaluadas en medios de cultivo PDA y SA.
Resultados
Caracterización morfo-anatómica del aislado P. 132
P. 132 ( Pleurotus sp.)
Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior)
PILEO
Vista Laterial: Plano convexoColor: Crema claro.
Vista Apical: Petaloide.Brillo: Mate.
Disco: Obtuso.Textura: Lisa.
Margen: Arqueado.Consistencia: Carnoso-fibroso.
Borde: Ondulado.Dametro: 7,5 cm.
Viscosidad: Seca.Grosor: 1,5 cm.
Higroscopicidad: -
ESTIPITE HIMENIO
Unión: Lateral. Frecuencia: Separados
Forma:
Comprimidosinuosa.
Unión: Decurrentes.
Consistencia:
Correosa.
Ancho: Anchas.
Contextura: Dura. Lamelas: Atenuadas.
Color: Crema claro. Ramificación: Si.
Diametro: 8,5 cm. Color: Blanco.
Largo: 3,5 cm. Grosor: 0,3 cm.
Resultados
PEJ (Pleurotus sp.)
Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior)
Píleo
Vista Laterial: Plano convexoColor: Beige
Vista Apical: PetaloideBrillo: Opaco
Disco: Obtuso.Textura: Blanda
Margen: ArqueadoConsistencia: Suave
Borde: OnduladoDametro: 13,4 cm.
Viscosidad: Seca
Grosor: 2,2 cm.
Higroscopicidad: +
ESTIPITE HIMENIO
Unión: Excéntrico. Frecuencia: Juntos.
Forma: Comprimido. Unión: Decurrentes.
Consistencia: Correosa. Ancho: Anchas.
Contextura: Dura. Lamelas: Atenuadas.
Color: Crema claro. Ramificación: Si.
Diametro: 0,95 cm. Color: Crema.
Largo: 0,5 cm. Grosor: 0,7 cm.
Caracterización morfo-anatómica del aislado P. EJ
Resultados
P. ost (Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm.).
Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior)
Píleo
Vista Laterial: Plano convexoColor: Crema.
Vista Apical: Petaloide.Brillo: Mate.
Disco: Obtuso.Textura: Glabro.
Margen: Arqueado.Consistencia: Carnosa-quebradiza.
Borde: Liso.Dametro: 11,5 cm.
Viscosidad: Seca.Grosor: 4 cm.
Higroscopicidad: -
ESTIPITE HIMENIO
Unión: Lateral: Frecuencia: Juntas.
Forma: Compacta. Unión: Decurrentes.
Consistencia: Correosa. Ancho: Anchas.
Contextura: Dura. Lamelas: Redondeadas.
Color: Crema claro. Ramificación: No.
Diametro: 0,8 cm. Color: Crema.
Largo: 4,2 cm. Grosor: 0,56 cm.
Caracterización morfo-anatómica del aislado P. ost
Resultados
P.LB (Pleurotus sp.).
Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior)
Píleo
Vista Laterial: Plano convexoColor: Blanco - crema ó amarillento.
Vista Apical: PetaloideBrillo: Opaco.
Disco: Obtuso.Textura: Fibrilosa-escamosa.
Margen: ArqueadoConsistencia: Sólida.
Borde: Crenulado.Diametro: 14,3 cm.
Viscosidad: SecaGrosor: 0,24 cm.
Higroscopicidad: +
ESTIPITE HIMENIO
Unión: Central. Frecuencia: Juntas
Forma: Comprimido. Unión: Decurrentes.
Consistencia: Correosa. Ancho: Medio.
Contextura: Crema ó amarillenta. Lamelas: Atenuadas.
Color: Blanco amarillento. Ramificación: No.
Diametro: 0,85 cm. Color: Blanco amarillento.
Grosor: 0,25 cm.
Largo: 5.0 cm.
Caracterización morfo-anatómica del aislado P. LB
Resultados
Evaluación de los medios de cultivo convencionales para el aislamiento y
producción de micelio.
Especies Cepa / Aislado
Tasa de crecimiento (mm/d)
PDA SA
P. ostreatus 3215 3,1 ± 0,5 2,5 ± 0,3
Pleurotus sp. 132 2,5 ± 0,3 2,5 ± 0,2
P. citrinopeliatus P.cit 3,2 ± 0,2 1,8 ± 0,2
P. ostreatus P.ost 2,8 ± 0,2 5,7 ± 0,8
P. ostreatus RAI 2,5 ± 0,3 2,5 ± 0,1
P. ostreatus RAII - -
P. ostreatus RAIII - -
Pleurotus sp. MOS 2,8 ±0,3 3,2 ± 0,4
Pleurotus sp. PJB 8,9 ± 0,4 6,0 ± 1
Pleurotus sp. PLB 3,7 ± 0,3 1,8 ± 0,2
Pleurotus sp. PFb - -
Pleurotus sp. PFI - -
Pleurotus sp. PFIV 9,2 ± 0,5 6,2 ± 0,6
Pleurotus sp. PEP - -
Pleurotus sp. PEV - -
Pleurotus sp. PEJ - -
P. cornucopiae PCAN - -
Tabla 4.3. Tasa de crecimiento (mm/dia) de los aislados del genero Pleurotus sp. presentes en el
Estado Mérida en diferentes tipos de medio de cultivo a 22 ºC.
Resultados
Figura 4.4 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. 3215 (P < 0,05).
T (ºC)
Medio de
Cultivo
Tasa de
crecimiento
(mm/d) ∆
20 PDA 5,4 0,3
20 SA 2,49 0,09
25 PDA 5,5 0,3
25 SA 3,3 0,1
30 PDA 3,6 0,1
30 SA 3,8 0,2
35 PDA 3,5 0,1
35 SA 2,6 0,1
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial del
aislado P.3215
a
b
c
d
a’
c’
d’
Resultados
a
b
c
d
Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. 3215 (P < 0,05).
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa
del aislado P.3215
Resultados
Figura 4.4 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. 3215 (P < 0,05).
T (ºC)
Medio de
Cultivo
Tasa de
crecimiento
(mm/d) ∆
20 PDA 4,6 0,3
20 SA 2,3 0,1
25 PDA 4,3 0,2
25 SA 3,2 0,1
30 PDA 4,3 0,1
30 SA 3,4 0,1
35 PDA 3,8 0,2
35 SA 3,2 0,1
a
b
c
d
a’
c’
d’
b’
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial
del aislado P.132
Resultados
Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. 3215 (P < 0,05).
a
b
C’
d
A’
B’
c
D’
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa
del aislado P.132
Resultados
Figura 4.9 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. RAI (P < 0,05).
T (ºC)
Medio de
Cultivo
Tasa de
crecimiento
(mm/d) ∆
20 PDA 4,5 0,2
20 SA 4,0 0,2
25 PDA 5,3 0,4
25 SA 3,6 0,2
30 PDA 3,2 0,1
30 SA 3,7 0,3
35 PDA 3,4 0,1
35 SA 3,16 0,07
a
b
c
d
c’
d’
b’
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial
del aislado P..RAI
Resultados
Figura 4.10 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. RAI (P < 0,05).
a
b
C’
d
A’
B’ c
D’
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa
del aislado P.RAI
Resultados
Figura 4.13 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. ost (P < 0,05).
T (ºC)
Medio de
Cultivo
Tasa de
crecimiento
(mm/d) ∆
20 PDA 4,6 0,2
20 SA 2,8 0,1
25 PDA 5,6 0,3
25 SA 3,5 0,2
30 PDA 5,8 0,3
30 SA 3,7 0,2
35 PDA - -
35 SA - -
b
c
d
c’
d’
b’
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial
del aislado P.ost
Resultados
Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. ost (P < 0,05).
a
b C’
d
A’
B’
c
Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa
del aislado P.ost
Resultados
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  • 1. Recurso genético del Genero Pleurotus sp. presente en el Estado Mérida. Br. Eduardo A. Chalbaud M. Tutor: Prof. Balmore Guerrero Jurado: Prof. Juan Gaviria Prof. Julio O. Rojas Prof. Pablo García Seminario II
  • 2. Hongos Comestibles Latinoamérica Perú México y Guatelama P. ostreatus P. eryngii Historia de los Hongos en Desarrollo del Hombre
  • 3. El genero Pleurotus spp. (Hongo ostra) P. ostreatus P.cornucopiae P.nebrodensis P. ostreatus 14% producción Agroindustrial mundial
  • 4. Figura 1.4. Ciclo de vida del género Pleurotus sp. Tomado de: Valencia-del Toro, 2002.
  • 5. Justificación del proyecto y aplicabilidad de los resultados: El genero Pleurotus (Jacq.: Fr.) Kumm. (Pleurotaceae, higher Basidiomycetes) Hongo Orellana Hongos comestibles
  • 6. Siendo así un trabajo integrado la clasificación e identificación de las especies del género Pleurotus por medio: Proteómica El análisis múltiple de los genes en diferentes locus; destacando entre ellos los genes nu-SSU, -LSU, 5.8S rRNA,rpb1, rpb2 y tef1. El análisis morfo- anatomico Taxonomía
  • 7. Especie Sinónimos y/o taxa de nivel de sub especies Grupos Norte América Europa Asia América del Sur África Australia Pleurotus otreatus P. combilunus; P. florida; P. salignus; P. spodoleucus I * * * P. pulmonarius P. sajor-caju; P. sapidus II * * * * P. populinus III * P. cornopopiae P. citrinopeliatus IV * * P. djamor P. flabellatus; P. otreatoroseus; P. salmoneostramineus; P. euosmus V * * * * * * P. eryngii P. ferulae; P. nefrodensis; P. hadamardii VI * * P. cystidiosus P. abolanus VII * * * * * P. caliptratus VIII * P. levis VIII * P. dryinus IX * * P. purpureo- olivaceus X * P.turber-regiun XI * * * * P. agaves XI * P. abieticola XI * P. brazil XI * P. australis XI * Tabla 1.3 Especies biológicas establecidas dentro del género Pleurotus, sus sinónimos correspondientes y/o taxa de nivel de subespecies, y grupos respectivos de íntercompatibilidad; y su distribución mundial. Tomado: Kong w. 2005 y Vilgalys et al., 1996.
  • 8. Pleurotus sp. En Venezuela Figura 2.1. Distribución geográfica del género Pleurotus sp. en la República Bolivariana de Venezuela desde 1950 a 2006. Tomado y modificado de Iturriaga & Minter (2006).
  • 9. Materiales y Metodología Laboratorio de Biotecnología de los Microorganismos “SIXTO DAVID ROJO” Universidad de los Andes Edo Mérida. Localización Aspectos generales del área de estudio Figura 3.1 Localización geográfica del Estado Mérida, Venezuela y ubicación de los sitios de colecta. Tomado y modificado de Ataroff & Sarmiento 2003. Municipios del Estado Mérida: Mcpio. Santos Marquina Mcpio. Libertador Mcpio. Campo Elías Mcpio. Sucre Mcpio. Alberto Adriani
  • 10. Materiales y Metodología Excursiones de colecta de los aislados del género Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida. Figura 3.2. Transecta idealizada de la región Los Andes venezolanos desde el Estado Trujillo al Estado Táchira, y los límites de la colecta de los hongos del genero Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida. Tomado de Casanova, 1998.
  • 11. Materiales y Metodología Microrganismos Especies Variedad Código de aislado Fuente original Origen Geográfico Hospedador / Sustrato Pleurotus ostreatus var. florida 3215 INIFAT Cuba Cuña Pleurotus sp. 132 INIFAT Cuba Cuña P. citrinopeliatus P.cit INIFAT Cuba Cuña P. ostreatus P.ost INIFAT Cuba Cuña P. ostreatus RAI CT Táchira Cuña/ Carpóforo P. ostreatus RAII CT Táchira Cuña/ Carpóforo P. ostreatus RAIII CT Táchira Cuña/ Carpóforo P. ostreatus MOS MSM Mérida Leño Pleurotus sp. PEP CE España Cuña P. cornucopiae PCF CAN Canadá Semilla de trigo INIFAT (Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura tropical “Alejandro de Humboldt); CT (Cepa comercial en el Estado Táchira); CE (Cepa comercial de España); CAN (Canadá). Tabla 3.1.Aislados y cepas de especies del género Pleurotus sp. presentes en el Laboratorio de Biotecnología de los Microorganismos “SIXTO DAVID ROJO”.
  • 12. Materiales y Metodología Aislamiento del material fúngico colectado Aislamiento del micelio a partir de trozos de carpóforo con desinfección. Aislamiento de micelio a partir de carpóforo con cámara húmeda. Aislamiento de micelio a partir de esporada tomada en papel. Aislamiento de micelio a partir de esporas atrapadas en agar.
  • 13. Caracterización Morfo-anatómica. Identificación por medio de la descripción de los carpóforos de acuerdo con Largent (1977) y Vilgalis et al. 1993. Descripción macroscópicas COSECHA Materiales y Metodología Anexo A. Keys of genero Pleurotus sp. Keys abound for limited groups (Vilgalys et al., 1993, for the P. ostreatus complex) or of limited accuracy (Pilát, 1935; Kühner and Romagnesi, 1953; Hilber, 1982, 1993, 1997). To devise a key to this group is fraught with problems, for basidiome colors, hosts, and stature often intergrade, and geographical distribution is often wide and therefore creates overlaps. Especially vexing is the separation of Pleurotus pulmonarius from its sister monomitic, pleurotoid species, P. ostreatus and P. populinus. With these problems in mind, the following key to biological species is offered. 1. Anamorphic spores produced on basidiomata or associated vegetative mycelium ..…………...…… 2 1. Anamorphic spores, if formed, not associated with basidiomata ……………………………..…...... 4 2. Anamorphic state a lawn of simple conidiophores producing black arthrospores, dry initially but later slimy; Australa, New Zealand. ……..……………….............................................................. P. australis 2. Anamorph coremioid, with black, slimy heads of arthrospores ...……………..…….………........… 3 3. Pileus pale tan to brown; distribution roughly pantropical …………………………….. P. cystidiosus 3. Pileus deep olive, olive-black, occasionally with purplish tints; New Zealand, Australia… P. purpureo-olivaceus 4. Stipe central to weakly eccentric ………………………………………….....................…..….…… 5 4. Stipe strongly eccentric or lateral …………….…………………....................…….……….……... 11 5. Pileus tan, brown, rufous brown, usually concave ………………………………………...………….6 5. Pileus pearl gray, white, or banana yellow …………………….………...................................…… 8 6. Basidiomata arising from a sclerotium …………...……………............................… P. tuber-regium 6. Basidiomata without sclerotium ……………………………………………............................……. 7 7. Root parasite; pileus tan to brown; Europe ……………………………...……………...….. P. eryngii 7. On rotting wood; pileus tan, brown, usually with ruddy tints ………....……………... P. cornucopiae 8. Pileus and stipe white to pearl gray ……………………………………………………..……...…… 9 8. Pileus banana yellow; stipe white (citrinopileatus form) ………………………......… P. cornucopiae 9. Stipe nearly lateral; on Agave, Opuntia; northern Africa, Mexico …….........................… P. opuntiae 9. Stipe central; all basidiome parts white ………………………………………………...……..…… 10 10. Pileus surface velutinous to plushy; warm climates; anamorph unknown …........................ P. levis 10. Pileus surface strigose to wooly; cool, wet climates; anamorph of tan to Brown arthrospores in culture ………………………………………………….....................................................…. P. dryinus 11. Stipe tissue dimitic …………………………………………...…………………...…................…. 12 11. Stipe tissue monomitic ……………………………………...………………...……...............…… 14 12. Partial veil present over young lamellae ……………………..……………......……… P. calyptratus 12. Partial veil absent …………………………………………..………....................................…….. 13 13. Basidiomata usually everted; pileus surface ruddy tan to ruddy brown……………... P. cornucopiae 13. Basidiomata pleurotoid; pileus surface white, yellow-olive, brown, olive-brown, pink or gray ……………………………….………..............................................................................… P. djamor 14. On coniferous wood; northern China, far eastern Russia …………………...………..... P. abieticola 14. On deciduous wood (chiefly) ………………………………………………...……...............……. 15 15. Pileus and lamellae buffy tan to pastel tan; lamellae subdistant; spore print pallid buff; spores 9-12 X 3-5 m m; North America; usually on Populus wood..............………………………….... P. populinus 15. Pileus various shades of off-white, tan, brown, deep gray, bluish olive to olive-black; spore print avellaneous; spores 7-10 m m long; worldwide; usually on deciduous wood ………………………... 16 16. Fruiting predominately in winter; pileus tan, brown, gray-brown, olive-black; North Temperate Zone ………………………..……………………………................................................... .P. ostreatus 16. Fruiting predominately in late summer (Europe, Asia, eastern North America) or spring (western North America); pileus white, tan, gray-brown; North Temperate Zone ..…................... P. pulmonarius
  • 14. Materiales y Metodología Amplificación por PRC de la región 5.8S ADN Fúngico Los primers universales para hongos (White et al. 1990): ITS1 (5' TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3') ITS4 (5' TCCTCCGCTTATTGATATGC 3') Figura 3.3 Localizcion de los Primers para la amplificacion de la region del ARN Ribosomal ITS1, 5.8S y ITS2. SSU (subunidad pequeña), LSU (subunidad grande) y ITS (Espaciadores de Transcripción Internos ). Tomado de White et al.1990). Tm 58 ºC Tm 60 ºC Extracción de ADN Bioinformática software Clustal W del EMBI software MEGA versión 5.1 software BIoEdit 7.1
  • 15. Crecimiento micelial de los aislados del género Pleurotus sp. en medio convencionales y sustratos lignocelulósicos a diferentes temperaturas la temperatura Materiales y Metodología Software ImageJ
  • 16. Tasa radial de crecimiento micelial en medios convencionales y en sustratos lignocelulósicos r = 𝜋 ∗ 𝐴 Donde: A = área de la muestra r = radio Crecimiento miceliar (mm) Días (d) SA PDA 20, 25, 30 y 35 °C. Temperaturas a evaluar Crecimiento micelial de los aislados del género Pleurotus sp. en medio convencionales y sustratos lignocelulósicos a diferentes temperaturas la temperatura Materiales y Metodología Semilla de parchita Semilla de Sorgo Modelo del crecimiento radial de la colonia en medio sólido Dimensión fractal de textura de la proyección tridimensional del micelio. r = m (t) –b Donde, (t) es el tiempo de incubación en horas, (m) la tasa de crecimiento micelial en mm/d y (r) es el radio de la colonia fúngica en mm.
  • 17. Resultados Distribución geográfica de los hongos del genero Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida. Especies Código de aislado Fuente original Origen Geográfico Hospedador / Sustrato Unidad Ecológica Altitud (m.s.n.m) Pleurotus sp. MOS MSM Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1740 Pleurotus sp. PJB MLJB Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1810 Pleurotus sp. PLB MSL Mérida Pino laso (Retrophyllum rospigliosii) Bosque Siempreverde Seco Montano Bajo 1034 Pleurotus sp. PLM MLMZ Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 2018 Pleurotus sp. PFFb MLFF Mérida Madera Selva Nublada Montana Baja 1750 Pleurotus sp. PFFIV MLFF Mérida Madera Selva Nublada Montana Baja 1750 Pleurotus sp. PEV MEV Mérida Hojarasca Arbustal Espinoso 116 Pleurotus sp. PEE MCE Mérida Leño Selva Nublada Montana Baja 1029 Tabla 4.1. Aislados del género Pleurotus sp. encontrados en el Estado Mérida. *Nota: MSM (Municipio Santos Marquina); MLPM (Municipio Libertador, Parque las Madres); MLMZ (Municipio Libertador, Parque Nacional Sierra la Culata Monte Zerpa); MLJB (Municipio Libertador Jardín Botánico Mérida); MSL (Municipio Sucre Parque Nacional Yoama); MLFF (Municipio Libertador, Facultad de Forestal ULA); MEV (Municipio Alberto Adriani, El Vigía); MCE (Municipio Campo Elías, Poso Hondo).
  • 18. Resultados Distribución geográfica de los hongos del genero Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida. Figura 4.1 Distribución geográfica del genero Pleurotus sp. en el Estado Mérida. Coordenadas UTM Localidad Municipio Hongo Altitud (msnm) X Y 262033.00 955103.00 Parque Nacional Sierra la Culata Monte Zerpa Libertador Pleurotus sp. 2018 264003.00 953972.00 Jardín Bótanico de Mérida Libertador Pleurotus sp. 1810 210914.00 951858.00 El Vigia Alberto Adriani Pleurotus sp. 116 236402.00 940857.00 Laguna de Urao Sucre Pleurotus sp. 1034 264759.00 953846.00 Facultad de Ciencias Forestales Libertador Pleurotus sp. 1750 253572.00 944442.00 Pozo Hondo Campo Elias Pleurotus sp. 1029 262342.00 949567.00 Parque las Madres Libertador Pleurotus sp. 1513 271926.00 954572.00 L.B. Miguel Otero Silva Santos Marquinca Pleurotus sp. 1740 301509.00 971780.00 Laguna Negra Rangel Pleurotus sp. 3470 298605.00 972657.00 Laguna de Mucubají Rangel Pleurotus sp. 3625 302205.00 972701.00 Laguna La Canoa Rangel Pleurotus sp. 3518
  • 19. Especies Cepa / Aislado Medios de Cultivo Características Color Textura Densidad Micelio aéreo Forma Elevación Margen Superficie P. ostreatus 3215 PDA Amarillo Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Sectorizada SA Blanco Pleurotus sp. 132 PDA Amarillo Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Sectorizada SA Cerebriforme P. citrinopeliatus P.cit PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Convexa umbilicada Liso Sectorizada SA Circular P. ostreatus P.ost PDA Blanco Algodonosa Alta Si Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA No Circular Sectorizada P. ostreatus RAI PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA P. ostreatus RAII PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA P. ostreatus RAIII PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Pleurotus sp. MOS PDA Blanco Polvorienta Alta No Filamentoso Nula Deflecado Plegada SA Algodonosa Elevada y limitada Cerebriforme Pleurotus sp. PJB PDA Blanco Algodonosa Alta Si Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Pleurotus sp. PLB PDA Rosado Algodonosa Alta No Rizoidal Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Blanco Sectorizada Pleurotus sp. PFFb PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Iregular Sectorizada Pleurotus sp. PFFI PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Ondulado Pleurotus sp. PFFIV PDA Blanco Algodonosa Alta Si Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Sectorizada SA No Ondulado Cerebriforme P. ostreatus PEP PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Beige Polvorienta Circular Plana y Extendida Liso o entero Pleurotus sp. PEV PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Blanco Algodonosa Alta No Pleurotus sp. PEE PDA Beige Polvorienta Alta Si Rizoidal y Filamentoso Plana y Extendida Deflecado Sectorizada SA No Liso o entero P. cornucopiae PCAN PDA Blanco Algodonosa Alta No Filamentoso Elevada y limitada Deflecado Cerebriforme SA Blanco Media Tabla 4.1 Características macroscópicas de las colonias de los aislados de los diferentes aislados y cepas de especies del género Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida, evaluadas en medios de cultivo PDA y SA. Resultados
  • 20. Caracterización morfo-anatómica del aislado P. 132 P. 132 ( Pleurotus sp.) Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior) PILEO Vista Laterial: Plano convexoColor: Crema claro. Vista Apical: Petaloide.Brillo: Mate. Disco: Obtuso.Textura: Lisa. Margen: Arqueado.Consistencia: Carnoso-fibroso. Borde: Ondulado.Dametro: 7,5 cm. Viscosidad: Seca.Grosor: 1,5 cm. Higroscopicidad: - ESTIPITE HIMENIO Unión: Lateral. Frecuencia: Separados Forma: Comprimidosinuosa. Unión: Decurrentes. Consistencia: Correosa. Ancho: Anchas. Contextura: Dura. Lamelas: Atenuadas. Color: Crema claro. Ramificación: Si. Diametro: 8,5 cm. Color: Blanco. Largo: 3,5 cm. Grosor: 0,3 cm. Resultados
  • 21. PEJ (Pleurotus sp.) Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior) Píleo Vista Laterial: Plano convexoColor: Beige Vista Apical: PetaloideBrillo: Opaco Disco: Obtuso.Textura: Blanda Margen: ArqueadoConsistencia: Suave Borde: OnduladoDametro: 13,4 cm. Viscosidad: Seca Grosor: 2,2 cm. Higroscopicidad: + ESTIPITE HIMENIO Unión: Excéntrico. Frecuencia: Juntos. Forma: Comprimido. Unión: Decurrentes. Consistencia: Correosa. Ancho: Anchas. Contextura: Dura. Lamelas: Atenuadas. Color: Crema claro. Ramificación: Si. Diametro: 0,95 cm. Color: Crema. Largo: 0,5 cm. Grosor: 0,7 cm. Caracterización morfo-anatómica del aislado P. EJ Resultados
  • 22. P. ost (Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm.). Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior) Píleo Vista Laterial: Plano convexoColor: Crema. Vista Apical: Petaloide.Brillo: Mate. Disco: Obtuso.Textura: Glabro. Margen: Arqueado.Consistencia: Carnosa-quebradiza. Borde: Liso.Dametro: 11,5 cm. Viscosidad: Seca.Grosor: 4 cm. Higroscopicidad: - ESTIPITE HIMENIO Unión: Lateral: Frecuencia: Juntas. Forma: Compacta. Unión: Decurrentes. Consistencia: Correosa. Ancho: Anchas. Contextura: Dura. Lamelas: Redondeadas. Color: Crema claro. Ramificación: No. Diametro: 0,8 cm. Color: Crema. Largo: 4,2 cm. Grosor: 0,56 cm. Caracterización morfo-anatómica del aislado P. ost Resultados
  • 23. P.LB (Pleurotus sp.). Carpófoto (Anterior)Carpóforo (Posterior) Píleo Vista Laterial: Plano convexoColor: Blanco - crema ó amarillento. Vista Apical: PetaloideBrillo: Opaco. Disco: Obtuso.Textura: Fibrilosa-escamosa. Margen: ArqueadoConsistencia: Sólida. Borde: Crenulado.Diametro: 14,3 cm. Viscosidad: SecaGrosor: 0,24 cm. Higroscopicidad: + ESTIPITE HIMENIO Unión: Central. Frecuencia: Juntas Forma: Comprimido. Unión: Decurrentes. Consistencia: Correosa. Ancho: Medio. Contextura: Crema ó amarillenta. Lamelas: Atenuadas. Color: Blanco amarillento. Ramificación: No. Diametro: 0,85 cm. Color: Blanco amarillento. Grosor: 0,25 cm. Largo: 5.0 cm. Caracterización morfo-anatómica del aislado P. LB Resultados
  • 24. Evaluación de los medios de cultivo convencionales para el aislamiento y producción de micelio. Especies Cepa / Aislado Tasa de crecimiento (mm/d) PDA SA P. ostreatus 3215 3,1 ± 0,5 2,5 ± 0,3 Pleurotus sp. 132 2,5 ± 0,3 2,5 ± 0,2 P. citrinopeliatus P.cit 3,2 ± 0,2 1,8 ± 0,2 P. ostreatus P.ost 2,8 ± 0,2 5,7 ± 0,8 P. ostreatus RAI 2,5 ± 0,3 2,5 ± 0,1 P. ostreatus RAII - - P. ostreatus RAIII - - Pleurotus sp. MOS 2,8 ±0,3 3,2 ± 0,4 Pleurotus sp. PJB 8,9 ± 0,4 6,0 ± 1 Pleurotus sp. PLB 3,7 ± 0,3 1,8 ± 0,2 Pleurotus sp. PFb - - Pleurotus sp. PFI - - Pleurotus sp. PFIV 9,2 ± 0,5 6,2 ± 0,6 Pleurotus sp. PEP - - Pleurotus sp. PEV - - Pleurotus sp. PEJ - - P. cornucopiae PCAN - - Tabla 4.3. Tasa de crecimiento (mm/dia) de los aislados del genero Pleurotus sp. presentes en el Estado Mérida en diferentes tipos de medio de cultivo a 22 ºC. Resultados
  • 25. Figura 4.4 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. 3215 (P < 0,05). T (ºC) Medio de Cultivo Tasa de crecimiento (mm/d) ∆ 20 PDA 5,4 0,3 20 SA 2,49 0,09 25 PDA 5,5 0,3 25 SA 3,3 0,1 30 PDA 3,6 0,1 30 SA 3,8 0,2 35 PDA 3,5 0,1 35 SA 2,6 0,1 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial del aislado P.3215 a b c d a’ c’ d’ Resultados
  • 26. a b c d Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. 3215 (P < 0,05). Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa del aislado P.3215 Resultados
  • 27. Figura 4.4 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. 3215 (P < 0,05). T (ºC) Medio de Cultivo Tasa de crecimiento (mm/d) ∆ 20 PDA 4,6 0,3 20 SA 2,3 0,1 25 PDA 4,3 0,2 25 SA 3,2 0,1 30 PDA 4,3 0,1 30 SA 3,4 0,1 35 PDA 3,8 0,2 35 SA 3,2 0,1 a b c d a’ c’ d’ b’ Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial del aislado P.132 Resultados
  • 28. Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. 3215 (P < 0,05). a b C’ d A’ B’ c D’ Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa del aislado P.132 Resultados
  • 29. Figura 4.9 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. RAI (P < 0,05). T (ºC) Medio de Cultivo Tasa de crecimiento (mm/d) ∆ 20 PDA 4,5 0,2 20 SA 4,0 0,2 25 PDA 5,3 0,4 25 SA 3,6 0,2 30 PDA 3,2 0,1 30 SA 3,7 0,3 35 PDA 3,4 0,1 35 SA 3,16 0,07 a b c d c’ d’ b’ Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial del aislado P..RAI Resultados
  • 30. Figura 4.10 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. RAI (P < 0,05). a b C’ d A’ B’ c D’ Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa del aislado P.RAI Resultados
  • 31. Figura 4.13 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre la tasa de crecimiento micelial del aislado P. ost (P < 0,05). T (ºC) Medio de Cultivo Tasa de crecimiento (mm/d) ∆ 20 PDA 4,6 0,2 20 SA 2,8 0,1 25 PDA 5,6 0,3 25 SA 3,5 0,2 30 PDA 5,8 0,3 30 SA 3,7 0,2 35 PDA - - 35 SA - - b c d c’ d’ b’ Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en el crecimiento micelial del aislado P.ost Resultados
  • 32. Figura 4.5 Efecto de la temperatura y el medio de cultivo sobre biomasa (mg) del aislado P. ost (P < 0,05). a b C’ d A’ B’ c Efecto de la temperatura y el medio de cultivo en la producción de biomasa del aislado P.ost Resultados