Diversidad genética de Candidatus Liberibacter asiaticus en la citricultura de México

1. Diversidad genética de Candidatus Liberibacter
asiaticus en la citricultura de México.
Alanís-Martínez, E. I.1
, López-Arroyo J. I.2
Mora-Aguilera, G.3
, Cora-Valencia, E.1
1
ENECUSAV-SENASICA, 2
INIFAP, Colegio de Postgraduados.
iobanaa@yahoo.com.mx

2. Diversidad genética de Candidatus Liberibacter asiaticus en la citricultura de México.
Alanís-Martínez, E. I., López-Arroyo J. I. Mora-Aguilera, G., Cora-Valencia, E.
XV Congreso Internacional y XL Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C. (SMF).
ANTECEDENTES
Huanglongbing (HLB) es una enfermedad bacteriana que afecta
severamente la citricultura mundial.
De las especies de “Candidatus Liberibacter”, agente putativo
del HLB, Ca. Liberibacter asiaticus (CaLas) posee la distribución
más extendida en el mundo y es responsable del aumento de
pérdidas económicas de la industria de cítricos (Islam et al.,
2012).
En México, este patógeno está presente en 13 de los 23 estados
citrícolas.
Éstos se agrupan en dos grandes regiones:
•Estados que integran la península y el sur del país (Yucatán,
Quintana Roo, Campeche, Chiapas y Tabasco)
•Estados colindantes con el océano pacífico (Baja California Sur,
Sinaloa, Colima, Nayarit, Jalisco, Guerrero y Michoacán).

3. ANTECEDENTES
•Detección de HLB en junio de 2009 en el estado de Yucatán
(posteriores detecciones de los estados que conforman la Península)
•Detección en 2010 en Colima (posteriores detecciones en los
estados colindantes)
•Generan preguntas sobre el origen del patógeno.
•Sintomatología acentuada en cítricos ácidos: implicaciones.
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4. ANTECEDENTES
La secuencia del genoma completo de ‘Ca. L. asiaticus’ Strain Psy 62,
facilita el desarrollo de marcadores de ADN encaminados a la comprensión
de la diversidad genética de poblaciones mundiales de HLB, la
epidemiología y la patogénesis (Islam et al.,2012).
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5. MATERIALES.
Se analizaron 165 muestras positivas a CaLas,:
**116 de material vegetal **49 del psílido vector
Procedentes de 11 estados del país.
•Quintana Roo, Yucatán, Campeche, Chiapas
•Colima, Jalisco, Nayarit, Sinaloa, Guerrero, Baja California Sur, Michoacán.
OBJETIVO
Determinar la posible diversidad genética entre aislados de CaLas, analizando
muestras de material vegetal y del insecto vector procedentes de los estados
citrícolas de México con presencia de CaLas.
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6. MÉTODOS
Se obtuvo la secuencia parcial del gen ribosomal 16S de
CaLas de 36 muestras de plantas, utilizando los iniciadores
OI1 y OI2cJ (Jagoueix et al., 1996).
Considerando que el análisis de secuencias del gen
ribosomal 16S rRNA es un región conservada y que se
requiere de loci genómicos más variables para
caracterizar mejor a la bacteria, se utilizaron
también los iniciadores Lap5640f / Lap5650r
diseñados por Wang et al., (2012).
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7. MÉTODOS
•El set de primers Lap5640f y Lap5650r flanquean la región cromosómica de CaLas
(CLIBASIA_05640 a CLIBASIA_05650) y generan diferentes perfiles electroforéticos
de las diferentes cepas.
•Los productos de PCR se secuenciaron.
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8. RESULTADOS
Del análisis de las 36 secuencias, sólo una muestra de limón mexicano de
Yucatán mostró un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP).
Clave Hospedero Estado Clave Hospedero Estado
YLP-30 Limón Persa
Yucatán
CoLM-17 Limón Mexicano Colima
YLP-31 Limón Persa CoLM-18 Limón Mexicano
YLM-39 Limón Mexicano CoLM-19 Limón Mexicano
YLM-40 Limón Mexicano JaLM-24 Limón Mexicano
Jalisco
YLi-41 Lima JaLM-25 Limón Mexicano
YLiCh-35 Lima China JaCi-65 Cítricos
YND-32 Naranja dulce JaCi-66 Cítricos
YND-33 Naranja dulce JaTo-82 Toronja
YMa-46 Mandarina JaMa-83 Mandarina
CaND-15 Naranja dulce Campeche NaCi-63 cítricos Nayarit
ChLP-79 Limón Persa
Chiapas
NaCi-64 cítricos
ChLi-77 Lima GuCi-84 cítricos
GuerreroChMa-78 Mandarina GuCi-85 cítricos
ChMa-80 Mandarina GuCi-86 cítricos
SiCi-58 cítricos Sinaloa
BCLM-69 Limón Mexicano Baja California Sur
BCLM-70 Limón Mexicano
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9. RESULTADOS
•Con el set de primers Lap5640f / Lap5650r se obtuvieron distintos
perfiles electroforéticos.
Fragmento Tipo # de
muestras
% Estados
810 a 8 6.89 Quintana Roo, Yucatán, Campeche , Chiapas
790-1100 b 1 0.86 Yucatán
810-1100 c 7 6.03 Yucatán
810-1200 d 9 7.75 Quintana Roo, Yucatán, Campeche , Chiapas
810-900-1100 e 2 1.72 Yucatán
810-900-1200 f 5 4.31 Quintana Roo, Chiapas
900 g 84 72.41 Baja California Sur, Sinaloa, Colima, Nayarit,
Jalisco, Guerrero y Michoacan
116 100%
Frecuencia de perfiles o patrones electroforéticos obtenidos en muestras vegetales
positivas a CaLas procedentes de 11 estados citrícolas.
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10. RESULTADOS
Fragmentos Tipo Estados Fragmentos Tipo Estados
810 a Quintana Roo, Yucatán,
Campeche , Chiapas
810-900-1100 e Yucatán
790-1100 b Yucatan 810-900-1200 f Quintana Roo, Chiapas
810-1100 c Yucatán 900 g Baja California Sur, Sinaloa, Colima,
Nayarit, Jalisco, Guerrero y
Michoacán
810-1200 d Quintana Roo, Yucatán,
Campeche , Chiapas
Muestras vegetales de Yucatán, Quintana Roo, Campeche y Chiapas
presentaron seis perfiles (a, b, c, d, e, f,)
a
b cd ef
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11. RESULTADOS
Fragmentos Estados Fragmentos Estados
810 a Quintana Roo, Yucatán,
Campeche , Chiapas
810-900-1100 e Yucatán
790-1100 b Yucatan 810-900-1200 f Quintana Roo, Chiapas
810-1100 c Yucatán 900 g Baja California Sur, Sinaloa, Colima,
Nayarit, Jalisco, Guerrero y Michoacán
810-1200 d Quintana Roo, Yucatán,
Campeche , Chiapas
Muestras vegetales de Baja California Sur (BCS), Sinaloa, Colima, Nayarit,
Jalisco, Guerrero y Michoacán presentaron un solo perfil (f).
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12. Muestras de psílidos de Quintana Roo y Yucatán mostraron dos perfiles (a, d)
Nayarit, Guerrero y BCS exhibieron un único perfil (g).
RESULTADOS
Fragmento tipo Estados
810 a Quintana Roo, Yucatán
810-1200 d Quintana Roo
900 g Nayarit, Guerrero y Baja
California
a
d
g
g
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13. RESULTADOS

14. CONCLUSIONES.
Los resultados sugieren mayor diversidad genética en cepas
de CaLas presentes en la Península de Yucatán y Chiapas, la
cual podría estar relacionada con:
oEl origen geográfico del patógeno
oLas rutas de introducción- dispersión
oy/o a mutaciones inducidas por el ambiente
oLa interacción con cítricos ácidos.
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