El documento proporciona información sobre el mantenimiento de cultivos celulares. Explica que los cultivos celulares son modelos de estudio in vitro que permiten mantener las propiedades de las células. Describe los tipos de cultivos, la historia, obtención y aplicaciones de los cultivos celulares, así como protocolos para congelación y descongelación de células.

1. MANTENIMIENTO
DE
CULTIVO CELULAR
integrantes:
• Roxana Paredes Mendieta
• Janet Cinthya Quispe Ríos
• Carmen Balderrama
• Carla Ibáñez
• Gabriela Chusco
• Katherin Sanchez

2. DEFINICIÓN
Es un modelo de
estudio in vitro
realizado con unas
técnicas que permiten
mantener al máximo
las propiedades
fisiológicas
bioquímicas genéticas

3. HISTORIA
El primer investigador fue Wilhelm Roux que cultivó células de embrión de pollo en
solución salina durante días. Demostrando que las células embrionarias podían
sobrevivir sin requerir la presencia de un organismo. Tenían una limitación inicial: Los
cultivos no tenían medios nutritivos adecuados para la propagación celular.
M. Burrows descubrió que el plasma era un nutriente esencial en los medios de cultivo,
óptimos para la propagación de células.
Para el estudio de las variaciones/comportamiento de las células animales libres
ocurridas dentro del organismo y bajo el estrés de un experimento.

4. TIPOS DE CULTIVOS CELULARES
•EXISTEN DOS CATEGORÍAS DE CULTIVO CELULAR:
•CULTIVO PRIMARIO
•LÍNEA CELULAR
CULTIVOS PRIMARIOS LINEAS CELULARES
Se obtienen de un animal recién sacrificado Provienen de un cultivo primario que ha sido sometido a
procesos que le conferirán capacidad ilimitada de
multiplicación o tienen origen tumoral
100% cariotipo original Aneuploides
Formado por células indeferenciados que se
diferenciaran de forma similar al tejido que le dio
origen.
Estan formadas por células que se diferencian genética
y morfológicamente de las células de las cuales se
originaron.
Su duración es aprox. 7 días Proliferan de forma ilimitada
1 solo pasaje Varios pasajes

5. OBTENCIÓN Y ESTABLECIMIENTO DE LÍNEAS
CELULARES
• UNA LÍNEA CELULAR QUEDA ESTABLECIDA CUANDO SE DEMUESTRA SU
POTENCIALIDAD DE REPLICARSE INDEFINIDAMENTE.
• LAS LÍNEAS CELULARES POSEEN PROPIEDADES CONFERIDAS POR
DIFERENCIAS EN LA DOTACIÓN CROMOSÓMICA (ANEUPLOIDÍA)
MUTACIÓN O TRANSFORMACIÓN GENÉTICA QUE DEBEN PERSISTIR
ENTRE SUCESIVOS PASAJES O SUBCULTIVOS.
• LAS LÍNEAS O CEPAS CELULARES CON ALGUNA CARACTERÍSTICA
PUNTUAL PUEDEN SER SELECCIONADAS ESPECÍFICAMENTE MEDIANTE
CLONACIÓN.

6. USO DE LOS CULTIVOS
1- Estudio virológicos
2- Producción de vacunas
3- Ingeniería de proteínas
4- Estudios de interacción/señalización celular
5- Producción para transplantes
6- Reproducción “in vitro” de plantas de interés
comercial
7- Ensayo de nuevos medicamentos
8- Estudio de toxinas

7. PROTOCOLO

8. RECUENTO CELULAR

10. APLICACIONES
• VIROLOGÍA: CULTIVO DE VIRUS ANIMALES Y DE PLANTAS, PRODUCCIÓN DE
VACUNAS, ETC.
• BIOTECNOLOGÍA: PRODUCCIÓN INDUSTRIAL DE FÁRMACOS EN BIORREACTORES
(INTERFERÓN, INSULINA, HORMONA DE CRECIMIENTO, ETC.)
• INMUNOLOGÍA: PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES, SEÑALIZACIÓN,
FENÓMENOS DE INFLAMACIÓN.
• FARMACOLOGÍA: EFECTO DE DIVERSOS FÁRMACOS, INTERACCIONES CON EL
RECEPTOR, FENÓMENOS DE RESISTENCIA, ETC.
• INGENIERÍA DE TEJIDOS: PRODUCCIÓN DE TEJIDOS ARTIFICIALES (PIEL,
CARTÍLAGOS) PARA EL TRATAMIENTO DE GRANDES QUEMADOS, INJERTOS O
AUTOTRANSPLANTES, DESDIFERENCIACIÓN Y DIFERENCIACIÓN INDUCIDA, ETC.
• TOXICOLOGÍA: CITOTOXICIDAD, MUTAGÉNESIS, CARCINOGÉNESIS, ETC.

11. VENTAJAS
A) PERMITEN UN CONTROL PRECISO Y FINO DEL MEDIO AMBIENTE
B) CARACTERIZACIÓN Y HOMOGENEIDAD DE LA MUESTRA
C) ECONOMÍA
D) CUESTIONES ÉTICAS

12. DESVENTAJAS
a) Técnica sensible
b) Cantidad y coste
c) Inestabilidad
d) Desdiferenciación e identificación de las células

13. CONGELACIÓN Y DESCONGELACIÓN
DE CÉLULAS
ES IMPORTANTE DISPONER DE ALÍCUOTAS CONGELADAS
DE LAS CÉLULAS CON EL FIN DE MINIMIZAR LA
ACUMULACIÓN DE CAMBIOS GENÉTICOS EN LAS LÍNEAS
CONTINUAS Y LA TRANSFORMACIÓN EN LAS LÍNEAS
FINITAS Y EVITAR LA PÉRDIDA ACCIDENTAL DE UNA
LÍNEA POR MUERTE O CONTAMINACIÓN.

14. CONGELACIÓN DE CELULAS
• 1.- SELECCIONAR LAS CÉLULAS DE UN CULTIVO ACTIVO PARA
CONGELADAS.
• 2.- CAMBIAR EL MEDIO POR UN MEDIO FRESCO 24 HORAS ANTES.
• 3.- ELIMINAR EL MEDIO Y TRIPSINAR LAS CÉLULAS.
• 4.- CENTRIFUGAR 10 MIN. A 800RPM.
• 5.- PREPARAR EL MEDIO DE CONGELACIÓN: 10%DMSO+90%SFB EN
AUSENCIA DE CÉLULAS.
• 6.- LLEVAR LA SUSPENSIÓN CELULAR A UNA CONCENTRACIÓN DE 2-4
X 106CEL/ML.
• 7.- RE SUSPENDER EL PELLET CELULAR EN LA SOLUCIÓN DE
CONGELACIÓN.

15. •8.- FRACCIONAR, LLENANDO LAS CRIOAMPOLLAS SÓLO HASTA
LAS ¾ DEL VOLUMEN TOTAL DE ESTÁ.
•9.- CERRAR HERMÉTICAMENTE.
•10.- ROTULAR: LÍNEA CELULAR, PASAJE, NRO.DE CÉLULAS Y
FECHA.
•11.- COLOCAR LAS AMPOLLAS EN UN RECIPIENTE
ESENCIALMENTE DISEÑADO QUE EMPLEA ALCOHOL
ISOPROPILICO Y BAJA LA TEMPERATURA 1°C POR MIN. AL
COLOCARLO EN EL CONGELADOR A -70°C.
•12.- LUEGO DE 4 HORAS TRASLADAR LAS AMPOLLAS A
NITRÓGENO LÍQUIDO.

16. DESCONGELACIÓN DE CÉLULAS
•LA DESCONGELACIÓN DEBE SER MUY RÁPIDA,
PUESTO QUE ESTO PREVIENE LA FORMACIÓN
DE CRISTALES EN EL MOMENTO EN QUE LA
TEMPERATURA BAJA DE -50°C A 0°C, SI EL
PROCESO SE LLEVA A CABO LENTAMENTE
CAUSA UN DAÑO CELULAR Y PÉRDIDA DE
VIABILIDAD.

17. PROCEDIMIENTO
1.- SACAR LA AMPOLLA RÁPIDAMENTE Y SUMERGIDA EN BAÑO A 37°C.
2.- TAPAR EL RECIPIENTE Y AGITAR SUAVEMENTE HASTA DESCONGELAR.
3.- ABRIR LA AMPOLLA EN EL FLUJO LAMINAR.
4.- CON UNA MICRO PIPETA RECOGER EL CONTENIDO Y TRASLADARLO AL
TUBO DE CENTRÍFUGA.
5.- DILUIR LAS CÉLULAS CON MEN 10 VECES, ESTO PARA CONSEGUIR QUE
EL DMSO QUEDE REDUCIDO A UNA CONCENTRACIÓN DE UN 1% YA QUE ESTE
DAÑA LAS CÉLULAS.
6.- SEMBRAR EN FRASCO DE 25CM2.
7.- ROTULAR, INDICANDO FECHA Y HORA DE DESCONGELACIÓN.
8.- 4-6HORAS DESPUÉS, CAMBIAR CON SUMO CUIDADO EL MEDIO Y
AGREGAR MEDIO DE CRECIMIENTO (MEM,SFB 5% Y GLIC. 1%).