informe de AYFA I

1. ANATOMIA Y FISIOLOGÍA ANIMAL I Mg. Edgar Quispe Ch. & Mg. Adolfo Ramos P.
PRÁCTICA Nº 5:
HOMEOSTASIS MINERAL
INTRODUCCION
El esqueleto es un órgano metabólicamente activo que experimenta cambios de manera
continua a través de la vida, con lo que se logra mantener su integridad estructural y cumplir
con las funciones metabólicas de almacenamiento de minerales. Estos cambios conducen a la
remodelación esquelética y puede ser desencadenada por las fuerzas mecánicas, microtraumas
y/o por respuestas hormonales en los niveles circulantes de calcio y fósforo. La dinámica del
tejido óseo está dada por varios subtipos celulares: los osteocitos son las células más abundantes
en el hueso que corresponden al 95%. Los osteocitos dirigen el trabajo de los osteoblastos en la
formación del hueso y de los osteoclastos en la reabsorción del hueso, mediante factores que
permiten que el esqueleto se adapte a las necesidades mecánicas y los cambios hormonales. Los
osteoblastos sintetizan la matriz orgánica (osteoide) y controlan la mineralización de la nueva
matriz mientras que los osteoclastos producen hidrogeniones para movilizar los minerales y
enzimas proteolíticas que hidrolizan la matriz orgánicaa.
Las concentraciones plasmáticas de calcio, fósforo y magnesio dependen del balance entre la
formación y la resorción mineral ósea, así como la absorción intestinal y la excreción renal. Las
principales hormonas que regulan este proceso son la paratohormona (PTH), la calcitonina y la
1,25-dihidroxi vitamina D, las cuales pueden ser estimuladas e inhibidas bajo ciertas
condiciones.
CALCIO
El calcio es esencial en la mayoría de las reacciones de la coagulación sanguínea y en la
regulación de la excitabilidad de las fibras musculares. Su concentración en suero y orina está
regulada por la acción de factores tales como niveles de parathormona, vitamina D y fósforo,
observándose fluctuaciones fisiológicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad física,

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cambios estacionales (por acción de la luz solar). La hipercalcemia está relacionada con
distintas patologías: hiperparatiroidismo, neoplasias óseas, intoxicaciones con vitamina D. La
hipocalcemia se asocia con desórdenes tales como hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina
D, malabsorción.
FOSFORO
El fósforo se encuentra en el organismo formando parte de compuestos orgánicos (proteínas,
lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos, etc.) o como fosfatos inorgánicos, cumpliendo diversas
funciones (transporte de energía, estructura de los tejidos, mantenimiento del pH de los líquidos
corporales). Los tejidos óseo y muscular lo contienen como constituyente esencial y es notable
su participación en la composición del tejido nervioso. Su concentración en circulación está
regulada entre otros factores por los niveles de vitamina D y las glándulas endócrinas,
observándose variaciones fisiológicas de acuerdo a la edad, ingesta, actividad física, embarazo,
etc. Existen situaciones patológicas en las que se altera este equilibrio, produciéndose
anormalidades en la concentración de fósforo circulante.
Niveles elevados de fósforo sérico son encontrados en el hipoparatiroidismo, mientras que el
hiperparatiroidismo conduce a la situación contraria. También puede encontrarse
hiperfosfatemia por hipervitaminosis D y diversos trastornos renales, mientras que la
hipofosfatemia se relaciona con deficiencias de vitamina D y defectos en la reabsorción de
fósforo a nivel renal.
MAGNESIO
El magnesio (Mg) es uno de los iones más abundantes del organismo. El 60% del Mg del
organismo se encuentra en los huesos y el resto está repartido entre músculos y otros tejidos
blandos. El Mg cumple un rol muy importante en la fisiología humana. Participa en el
metabolismo energético a través de la activación del ATP, en la transferencia de fosfatos de alta

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energía y es el ion activador de muchas enzimas involucradas en el metabolismo de lípidos,
carbohidratos y proteínas. El Mg es un mediador en mecanismos de conducción y transporte a
través de membranas. Es esencial en la preservación de estructuras macromoleculares de DNA,
RNA y ribosomas y en la formación del hueso y el mantenimiento de la presión osmótica.
La hipomagnesemia está muy asociada a la deficiencia de otros iones como el P, K y Ca. Las
causas de hipomagnesemia son múltiples: diarreas crónicas y agudas, síndromes de mala
absorción, succión nasogástrica prolongada y vómitos, fístulas intestinales y biliares, deterioro
de la conservación renal, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hiperaldosteronismo primario,
alcoholismo crónico. El exceso de Mg puede darse por incorporación o administración excesiva
de sales de Mg y en general se asocia a falla renal. Otras patologías asociadas a
hipermagnesemia son: hipercalcemia hipocalciúrica, hipotiroidismo, deficiencia de
mineralocorticoides, etc.
OBJETIVOS
1. Comprender la homeostasis mineral en los organismos
2. Determinar los niveles de calcio, fosforo y magnesio en muestras biológicas
3. Explicar las aplicaciones que se desprenden de la práctica.
MATERIAL REQUERIDO
- Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
- Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Tubos o cubetas espectrofotométricas.
DESARROLLO

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PROCEDIMIENTO
DETERMINACIÓN DE CALCIO
Método colorimétrico para la determinación de calcio en suero, plasma heparinizado y orina
FUNDAMENTOS DEL METODO
El calcio reacciona con la o-cresolftaleín complexona (oCPC) a pH alcalino, dando un complejo
de color magenta que se mide fotocolorimétricamente a 570 nm.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: solución de o-cresolftaleín complexona y 8-hidroxiquinolina.
B. Reactivo B: solución de aminometil propanol (AMP).
S. Standard: solución de calcio 10 mg/dl.
Concentraciones finales
o-Cresolftaleín complexona..............................0,08 mmol/l
8-Hidroxiquinolina..................................................4 mmol/l
AMP.......................................................................3,5 mol/l
CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 570 nm en espectrofotómetro o 560-590 nm en fotocolorímetro con filtro
rojo. Ca-Color C AA 864113524 / 00 p. 2/12
- Temperatura de reacción: temperatura ambiente (15-25 ºC).
- Tiempo de reacción: 5 minutos
- Volumen de muestra: 50 ul
- Volumen final de reacción: 2,05 ml
PROCEDIMIENTO
I- TECNICA CON REACTIVOS SEPARADOS
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:

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Mezclar, incubar 5 minutos a temperatura ambiente(15-25oC) y leer la absorbancia en
espectrofotómetro a 570 nm o en fotocolorímetro con filtro rojo (560-590 nm).
Microtécnica
Seguir el procedimiento indicado en la Técnica I) pero usando 25 ul de Muestra, 0,5 ml de
Reactivo A y 0,5 ml de Reactivo B.
II- TECNICA CON REACTIVO UNICO (PREMEZCLADO)
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
Mezclar, incubar 5 minutos a temperatura ambiente (15-25oC) y leer la absorbancia en
espectrofotómetro a 570 nm o en fotocolorímetro con filtro rojo (560-590 nm).
Microtécnica
Seguir el procedimiento indicado en la Técnica II) pero usando 25 ul de Muestra y 1 ml de
Reactivo único. En caso de muestras lipémicas o hemolizadas es necesario procesar un Blanco
de Muestra de la siguiente manera: mezclar 50 ul de muestra con 2 ml de agua

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destilada. Medir la absorbancia llevando el aparato a cero con agua destilada. Restar esta
absorbancia de la obtenida inicialmente y utilizar esta diferencia para los cálculos.
VALORES DE REFERENCIA
Suero: 8,5 - 10,5 mg/dl
Orina: hasta 300 mg/24 hs (para una dieta normal)
DETERMINACION DE FOSFORO
El fósforo inorgánico (Pi) reacciona en medio ácido con el molibdato para dar un complejo
fosfomolíbdico que se mide espectrofotométricamente a 340 nm.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: solución de molibdato de amonio 2 mmol/l en ácido sulfúrico 1%.
S. Standard*: solución estabilizada de fosfatos equivalente a 4 mg/dl de fósforo inorgánico.
PROCEDIMIENTO
En tres cubetas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), agregar:
Incubar 10 minutos a temperatura ambiente. Luego leer en espectrofotómetro a 340 nm (Hg
334 ó 366 nm), llevando el aparato a cero con el blanco.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma Adultos: 2,5 - 5,6 mg/dl
Niños: 4,0 - 7,0 mg/dl
Orina 0,3 - 1,0 g/24 horas

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DETERMINACION DE MAGNESIO
El magnesio presente en la muestra se une al clorofosfonazo III (CPZ III) produciendo un
incremento de absorbancia a 660 nm. El agregado de EDTA sustrae el Mg del complejo Mg-
CPZ III, libera el CPZ III y permite la lectura del blanco. La diferencia de absorbancia entre
Mg-CPZ III y CPZ III equivale a la absorbancia debida sólo al Mg. La presencia de EGTA
evita que el calcio interfiera en la reacción.
Mg2+ + CPZ III ----- pH 7,5 ----- Mg-CPZ III
Mg-CPZ III + EDTA ----- pH 7,5----- Mg-EDTA + CPZ III
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: buffer TES 145 mM, CPZ III 0,2 mM, EGTA 10 mM, pH 7,5.
B. Reactivo B: buffer TES 100 mM, EDTA 17 mM, pH 7,5.
PROCEDIMIENTO (analizadores automáticos)
A continuación se detalla un procedimiento general para Magnesium CPZ en un analizador
automático. Cuando se implemente la técnica para un analizador en particular seguir las
instrucciones de trabajo del mismo.
Reactivo A 160 ul
Muestra o Calibrador 4 ul
Incubación durante 300 segundos a 37o C.
Lectura de absorbancia inicial a 660 nm (DO1).
Reactivo B 28 ul
Incubación durante 180 segundos a 37o C.
Lectura de absorbancia a 660 nm (DO2).
Para obtener los resultados, el analizador calcula la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 -
DO1)

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VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma: 1,7 a 2,5 mg/dl (0,70 a 1,05 mmol/l)
Orina: 60 a 210 mg/24hs 2,5 a 8,5 mmol/24 hs 4,10 a 13,80 mg/dl*
*Considerando un volumen de orina de 1,5 L/24 hs
En la literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rango de referencia:
Suero o plasma: 1,6 a 2,6 mg/dl (0,66 a 1,07 mmol/l)
Orina: 3,0 a 5,0 mmol/24 hs
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1.. Esquematice la homeostasis mineral
2..Integre la función de la D3 PTH calcitonina OPG
3.. Función del rank y Rank-l
4. Cual es la asociación de los estrógenos con la OPG