1. 42 REB 28(2): 42-51, 2009
EL FACTOR INDUCIDO POR LA HIPOXIA-1 (HIF-1)
Y LA G LUCÓLISIS EN LAS C ÉLULAS T UMORALES*
Alvaro Marín-Hernández
RESUMEN ABSTRACT
El factor inducido por la hipoxia 1 (HIF-1) tiene un papel The hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) is an important
fundamental en la respuesta a la baja tensión del oxígeno, key mediator during low-oxygen cellular adaptation.
ya que regula la expresión de una gran variedad de genes, Several genes involved in angiogenesis,
cuyos productos participan en procesos como la erythropoiesis, energy metabolism and cell survival
angiogénesis, el metabolismo energético, la eritropoyesis are up-regulated by HIF-1. In tumour cells, HIF-1
y la proliferación celular. Diversos estudios indican que overexpression and activation is associated with
existe una relación estrecha entre el cáncer y el HIF-1, malignancy, development and angiogenesis; whereas
debido a que los mecanismos que regulan su expresión se HIF-1 low expression has been determined in normal
encuentran alterados en las células tumorales. El HIF-1 tissues and benign tumors. At metabolic level, HIF-
es uno de los factores involucrados en el incremento de 1-activation stimulates transporters (GLUT1, GLUT3)
la glucólisis en las células tumorales, ya que aumenta la and glycolytic enzymes (HKI, HKII, PFK-L, ALD-A,
actividad de ciertas isoformas de las enzimas glucolíticas ALD-C, PGK1, ENO-, PYK-M2, LDH-A, PFKFB-
(GLUT1, GLUT3, HKI, HKII, PFK-L, ALD-A, ALD-C, 3) transcription. In consequence, a significant
PGK1, ENO-, PYK-M2, LDH-A, PFKFB-3), increment in the glycolytic flux (lactate ,ATP, and H+)
promoviendo un aumento del flujo glucolítico (producción and glycolytic intermediates levels are attained. An
de lactato, H+, ATP e intermediarios de la glucólisis). Por additional role of some of these HIF-induced isoforms
otra parte, algunas de estas isoformas participan as activators of survival, histones transcriptional
activamente en otros procesos como son la inhibición de activation (LDH-A), apoptotic inhibition (HKI y
la apoptosis (HKI y HKII), la transcripción de histonas HKII) and cellular migration (ENO-) pathways is
(LDH-A) y la migración celular (ENO-), las cuales discussed.
favorecen el desarrollo tumoral.
KEY WORDS: Hypoxia, glycolysis, HIF-1, glycolytic
PALABRAS CLAVE: Hipoxia, glucólisis, HIF-1, enzymes, tumour cells.
isoenzimas glucolíticas, células tumorales.
INTRODUCCION permitiendo a la célula adaptarse a tensión de oxígeno presente en los tu-
La baja tensión de oxígeno altera la estas condiciones tan adversas (1). mores y las alteraciones en los meca-
homeostasis de la célula, lo que con- En la mayoría de los tumores pri- nismos que regulan su expresión. Por
duce a la activación del factor induci- marios de cerebro, páncreas, mama, lo anterior, el HIF-1 puede conside-
do por la hipoxia 1 (HIF-1). El HIF-1 colon, ovario, pulmón y próstata, y sus rarse como un marcador tumoral y un
tiene como función incrementar la metástasis, se detectan altos niveles blanco terapéutico.
transcripción de genes cuyos produc- del HIF-1 comparados con los tejidos En esta revisión se analiza el pa-
tos son proteínas que participan en la normales de los cuales provienen o pel que juega el HIF-1 en la regula-
angiogénesis, la eritropoyesis, la pro- tumores benignos (2). Las causas que ción de la glucólisis, así como las
liferación celular, la remodelación promueven la sobreexpresión del HIF- ventajas que ofrece a las células
vascular y el metabolismo energético; 1 en las células tumorales son la baja tumorales la expresión de las enzimas
*Recibido: 19 de agosto de 2008 Aceptado: 14 de abril de 2009
Instituto Nacional de Cardiología Ignacio Chávez". Departamento de Bioquímica. Juan Badiano No. 1. Col. Sección XVI. México DF,
14080. Correo E: marinhernndez@yahoo.com.mx

2. REB 28(2): 42-51, 2009 El factor HIF-1 y la glucólisis en las células tumorales 43
glucolíticas inducida por este factor Proteosoma
transcripcional.
Destrucción Inactivación
Mecanismos de regulación del HIF-1
El HIF-1 es un heterodímero que
incrementa la transcripción de varios ODDD
genes al unirse al ADN en regiones
consenso 5´-RCGTG-3´ (R= A o G). b HLH A PAS B N-TAD C-TAD
Este factor transcripcional está cons-
tituido por dos proteínas llamadas Pro 402 Pro 564 Asn 803
HIF-1 y HIF-1 también conocido
como ARNT (Aryl hydrocarbon Re- HO pVHL OH OH
ceptor Nuclear Translocator), las cua-
les tienen en su extremo amino termi-
nal, un dominio bHLH (basic-Helix-
Loop-Helix) y dos dominios PAS Prolil-hidroxilasas
(Period clock-Aryl hydrocarbon re-
ceptor nuclear translocator-Single Asparaginil-hidroxilasas
minded) (Fig. 1). El dominio bHLH
regula la dimerización del HIF-1 lo Figura 1. Mecanismos de regulación del HIF-1. Para que VHL se asocie con el HIF-1, éste
deberá ser hidroxilado en las prolinas (Pro) 402 y 564 en las regiones ODDD por las HIF-1
cual controla su unión al ADN. El
prolil-4-hidroxilasas, el HIF-1 es degradado por el proteosoma. Cuando el HIF 1 no es
dominio PAS, al parecer, participa en degradado, su actividad transcripcional puede ser inhibida al ser hidroxilada la asparagina
la selección del gen blanco (1, 3, 4). (Asn) 803 del dominio de transactivación (CAD) por las asparaginil-aspartil hidroxilasas, lo
Debido a que la expresión del HIF- cual inhibe el reclutamiento de los co-activadores (p300) que se unen a HIF-1 para formar el
1 es constitutiva, la actividad del complexo transcripcional. Esta es una figura modificada a partir de la referencia 4.
HIF-1 puede ser regulada exclusiva-
mente por la expresión del HIF-1. En
normoxia (concentración normal de dad transcripcional es bloqueada cuan- inactivas aún en normoxia dejando al
oxígeno ~ 20-50 M), el HIF-1 no do las asparaginil-aspartil hidroxilasas HIF-1 estable, lo cual no ocurre
se detecta y su tiempo de vida media hidroxilan la asparagina 803, que se fisiológicamente. Otra propuesta al-
(t ½) es de 5 minutos, pero en hipoxia encuentra en el dominio de ternativa es que la disminución en la
(concentración de O2 del 1% o 12.5 transactivación (CAD) (Fig. 1) (3, 4). concentración de O2 promueve un au-
µM), su t ½ aumenta considerable- Las hidroxilasas juegan un papel mento en la generación de los radica-
mente hasta 30 minutos (3). importante en la regulación de la acti- les libres en la mitocondria, al pare-
El HIF-1 tiene un dominio de de- vidad del HIF-1, sin embargo, bajo cer producidos por el complejo III de
gradación altamente sensible al oxí- hipoxia no es claro cómo su actividad la cadena respiratoria (6), aunque no
geno (ODDD: Oxygen -dependent disminuye. Ambas enzimas necesitan es claro como se generan los radica-
degradation domain) que regula su de varios sustratos para catalizar la les libres (7). Estos radicales oxidan
estabilidad. Bajo normoxia, este do- hidroxilación del HIF-1: Fe2+, - el Fe2+ a Fe3+ lo que limita la activi-
minio es hidroxilado en las prolinas cetoglutarato, ascorbato y oxígeno. Lo dad de las hidroxilasas. Esta propues-
402 y 564 por las HIF-1 prolil-4- que se propone es que bajo hipoxia, la ta se ha comprobado experimental-
hidroxilasas, esto permite su reducción en la concentración de O2 mente en diversos tipos de células
interacción con los aminoácidos 549- es la que limita la actividad de las (células de hepatoma, células
572 del dominio  de la proteína von hidroxilasas (3, 4). Sin embargo, con vasculares de músculo liso, células
Hippel-Lindau (pVHL) (Fig. 1). El respecto a la concentración de O2 que cardíacas, células de epitelio gástri-
pVHL es un componente del comple- se puede encontrar en el citosol, en los co, células epiteliales de túbulo re-
jo E3 ubiquitin ligasa que es el encar- capilares y en las arteriolas (~12.5- 50 nal y macrófagos), al no encontrarse
gado de ubiquitinar al HIF-1, con- µM) (5), las afinidades (Km) de las HIF-1 estable y activo cuando las
duciéndolo a ser degradado por el hidroxilasas por el O2 son demasiado células son sometidas a hipoxia y tra-
proteosoma (Fig 1). Por otra parte, si altas (90 y 230 µM); esto supondría tadas al mismo tiempo con anti-
el HIF-1 no es degradado, su activi- que las dos enzimas se mantendrían oxidantes (8, 9).

3. 44 Marín-Hernández A
¿Cómo es que el HIF-1 se mantie- piruvato generados por la glucólisis de la mayor parte de las enzimas que
ne estable en las células tumorales? (incrementada en células tumorales), forman la glucólisis (Fig. 2) (Tabla 1)
La estabilización del HIF-1 se debe a pueden estabilizar al HIF-1y evitar (1). Sin embargo, a pesar de que algu-
la hipoxia a la que se ven sometidas las que sea degradado. Se sospecha que nas de las enzimas de la glucólisis tie-
células tumorales desde que el tumor ambos monocarboxilatos inhiben la nen varias isoformas (Tabla 1), el HIF-
tiene un tamaño de 2-3 mm de diáme- actividad de las hidroxilasas porque 1 solo induce el incremento de algu-
tro, y aunque los tumores puedan ge- compiten por el sitio de unión del - nas de ellas (Fig. 2). En esta sección
nerar nuevos vasos sanguíneos (proce- cetoglutarato (9). se analizan las características que po-
so conocido como angiogénesis) estos d) Mutaciones en los genes de la see cada una de las enzimas induci-
están desorganizados, son frágiles y succinato deshidrogenasa (SDH) y de das por el HIF-1, así como las venta-
angostos por lo que tienen un flujo irre- la fumarato hidratasa (FH) que propi- jas que brindan a las células tumorales.
gular y dejan, bajo hipoxia, zonas gran- cian una respuesta de pseudo-hipoxia
des del tumor (1,3). que mantiene al HIF-1 estable. Esto Transportador de glucosa (GLUT)
Bajo normoxia, la estabilización ocurre porque al incrementarse el La familia de transportadores de glu-
del HIF-1se promueve por diversos succinato, producto de la reacción de cosa se divide en tres clases. En la cla-
mecanismos en las células tumorales: las hidroxilasas, induce una inhibición se 1 se agrupa a cuatro transportadores
a) La activación de algunos por producto, en tanto que el fumarato (GLUT1-GLUT4) (Tabla 1) que tienen
oncogenes como v-src, HER2neu y H- compite por el sitio de unión del - como sustrato a la glucosa, de los cua-
RAS o con la pérdida de supresores cetoglutarato de estas enzimas (8, 9). les el GLUT1 y el GLUT3 son blanco
de tumores como p53 y PTEN. Aún del HIF-1(Fig.2). El GLUT1 se ex-
no es muy claro el mecanismo por el Glucólisis presa normalmente en todos los tejidos,
cual ocurre esto (1, 3). En las células tumorales se observa en en tanto que el GLUT3 se encuentra
b) Mutaciones en el factor pVHL general un aumento en la velocidad de preferentemente en el cerebro. El por
que modifican o eliminan el dominio glucólisis con respecto a los tejidos de qué estos transportadores son sobre-
(el cual interacciona con el domi- origen, inducido por varios mecanis- expresados específicamente por el HIF-
nio ODDD del HIF-1) lo que impi- mos, entre los que destaca la activa- 1 tiene que ver probablemente con sus
de la degradación del HIF-1(1,3). ción del HIF-1, que induce el incre- afinidades por la glucosa (lo que pue-
c) La acumulación del lactato y del mento en la transcripción de los genes de favorecer una mayor entrada de
TABLA 1
Isoformas de los transportadores y enzimas que forman parte de la glucólisis
Enzimas Genes Isoformas Oligomerización
Oligomerización
Transportador de glucosa (GLUT) 4 GLUT1, GLUT2, GLUT3 y GLUT4 M
Hexocinasa (HK) 4 HKI, HKII, HKIII y HKIV M
Hexosa fosfato isomerasa (HPI) 1 No se conocen isoformas D
Fosfofructocinasa (PFK-I) 3 PFK-L, PFK-M, PFK-P T
Aldolasa (ALD) 3 ALD-A, ALD-B, ALD-C T
Triosa fosfato isomerasa (TPI) 1 No se conocen isoformas D
Gliceraldehído 3-P deshidrogenasa (GAPDH) 1 No se conocen isoformas T
Fosfoglicerato cinasa (PGK) 2 PGK1 y PGK2 M
Fosfoglicerato mutasa (PGAM) 2 PGAM-A y PGAM-B D
Enolasa (ENO) 3 ENO-α, ENO-, ENOγ D
Piruvato cinasa (PK) 2 PK-R, PK-L, PK-M1, PK-M2 T
Lactato deshidrogenasa (LDH) 3 LDH-A y LDHB T
Fosfofructocinasa tipo 2 (PFK-II) 4 PFKFB1, PFKFB2, PFKFB3 y PFKFB4 D
Transportador de monocarboxilatos (MCT) 4 MCT1, MCT2, MCT3, MCT4 M
M, monómero; D, dímero; T, Tetrámero.

4. REB 28(2): 42-51, 2009 El factor HIF-1 y la glucólisis en las células tumorales 45
Figura 2. Enzimas de la glucólisis cuyos genes son blancos de HIF-1. HIF-1, factor inducible por la hipoxia-1; GLUT, transportador de
glucosa; HK, hexocinasa; HPI, hexosa fosfato isomerasa; PFK, fosfofructocinasa tipo 1; ALD, aldolasa; PFKFB, fosfofructocinasa tipo II;
TPI, triosa fosfato isomerasa; GAPDH, gliceraldehído 3-P deshidrogenasa; PGK, fosfoglicerato cinasa; PGAM, fosfoglicerato mutasa; ENO,
enolasa; PK, piruvato cinasa; LDH, lactato deshidrogenasa; MCT, transportador de monocarboxilatos; Glu, glucosa; ext, externa; int, inter-
na; G6P, glucosa 6-fosfato, F6P, fructosa 6-fosfato; F2-6BP, fructosa 2, 6 bifosfato; F1-6BP, fructosa 1,6 bifosfato; DHAP, dihidroxi acetona
fosfato; G3P, gliceraldehído 3-fosfato; 1,3BPG, 1,3 bifosfo-glicerato; 3PG, 3-fosfoglicerato; 2PG, 2-fosfoglicerato; PEP, fosfoenolpiruvato;
PIR, piruvato; LAC, lactato.
glucosa a la célula, para incrementar la na ejerce un control de flujo importante Hexocinasa (HK)
glucólisis), aunque experimentalmente sobre la glucólisis (30-70%), tanto en La HK tiene cuatro isoenzimas (Ta-
solo se han determinado las afinidades las células tumorales como en las no bla 1, la reacción que cataliza se indi-
de estos transportadores por análogos tumorales (11).Así pues, pequeños cam- ca en la Fig. 2). HKI, HKII y HKIII
como la 2-desoxi-glucosa (GLUT3, Km bios en la actividad del GLUT modifi- tienen un peso molecular de 100 kDa
= 1.8 mM; GLUT4, Km = 4.6; GLUT1, can significativamente el flujo de la y la glucocinasa (HKIV) un peso de
Km = 6.9 mM; GLUT2, Km = 17.1 mM) glucólisis. 50 kDa; la diferencia entre las
(10), pero no por la glucosa. Por lo tan- El GLUT1 es el transportador que isoenzimas es su afinidad (Km) por la
to, es difícil establecer si en realidad tie- más se incrementa en los diversos ti- glucosa (HKIII >HKI > HKII
nen una afinidad alta por su sustrato fi- pos de cáncer (Tabla 2) (12) sobre >HKIV), que va de 0.003 hasta 5 mM.
siológico. Sin embargo, cabe señalar que todo en aquellos con alta proliferación La actividad de las isoenzimas I-III es
para observar un incremento en la velo- y malignidad. En cambio, el GLUT3 regulada por la concentración de la
cidad de glucólisis es necesario incre- se puede encontrar en el cáncer de pul- glucosa 6-fosfato (G6P) que ejerce
mentar la cantidad del transportador, món, de colon, de ovario, de laringe y mientras que la HKIV es insensible a
pues se ha determinado que esta proteí- de glándula mamaria (13). esta inhibición (14).

5. 46 Marín-Hernández A
Los genes de las HKI y HKII son Bax y Bid (proteínas pro-apoptóticas) con tres isoenzimas (Tabla 1, la reac-
blanco del HIF-1 (Fig. 2) (1). La so- con lo cual la célula tumoral se prote- ción que cataliza se indica en la Fig.
bre-expresión de la HKII ocurre en la ge contra la apoptosis (15). 2). La PFK-M que se encuentra en el
mayoría de los tumores, en tanto que músculo, la PFK- L que se localiza en
en tumores cerebrales se encuentra Hexosa fosfato isomerasa (HPI) el hígado y la PFK-P o C que se en-
preferentemente la HKI (Tabla 2) (11). Esta enzima es un homodímero con dos cuentra preferentemente en las
Con el incremento en la actividad de subunidades de 63-kDa (14) de la cual plaquetas. La combinación de las tres
ambas isoenzimas de la HK se propi- no se conocen isoenzimas (Tabla 1, la isoenzimas se encuentra en el resto de
cia un aumento en la velocidad de la reacción que cataliza se indica en la Fig. los tejidos (16).
glucólisis en las células tumorales, 2). La HPI (también conocida como La PFK-M tiene mayor afinidad
debido a que ejercen un control signi- AMF, autocrine motility factor) además por la fructosa 6-fosfato (F6P) (K0.5 =
ficativo sobre esta vía (11). de participar en la glucólisis, puede 0.6-2 mM) y es menos sensible a la
Otra característica que comparten promover la migración, la proliferación inhibición inducida por el ATP; la
las dos enzimas es que pueden unirse celular y la metástasis (15). Es factible PKF-L es menos susceptible a la inhi-
a la membrana externa mitocondrial, que esta sea la razón por la cual el HIF- bición por el citrato (Ki aparente =
a través de un segmento de 15 1 incrementa la expresión de esta enzi- 0.18 mM); la PFK-P es la isoenzima
aminoácidos hidrofóbicos del extremo ma y se encuentre elevada en los tu- que tiene la afinidad mas baja por F6P
amino terminal. La asociación de la mores (Tabla 2). (K0.5 =1.4-4 mM) y es la más suscep-
HK es preferentemente con el canal tible al efecto inhibitorio del citrato
dependiente de voltaje (VDAC); a tra- Fosfofructocinasa tipo I (PFKI) (Ki aparente = 0.08 mM) (17). Con-
vés de esta unión se puede impedir la La PFKI es un homo-heterotetrámero secuentemente, resulta comprensible
salida del citocromo c mediado por con un peso aproximado de 380 kDa, que en los tumores las isoenzimas
TABLA 2
Tipos de cáncer en donde se han encontrado expresadas algunas isoformas de las enzimas de la glucólisis
Isoformas Tipos de cáncer
T estícu lo
C artíla go
P ánc re as
E stóm a g
Estomago
Plac enta
Tiro id es
Pró stata
Esó fago
L arin ge
Cereb ro
P ulm ó n
Pulmón
Hígad o
O vario
C érv ix
N . Lin
C . y C.
Riñó n
Ú tero
C olo n
Endo .
Colon
Endo.
O jo
Gm
Piel
P ie l
MO
LR
SN
GLUT1 X X X X X X X X X X X X
GLUT3 X X X X X
HKI X X X
HKII X X X X X X X
X X X X X
HPI X X X X X X X X X X X X X X
PFK-L X X X X X X X X
ALD-A X X X X X X X X X X X X X X X
TPI X X X X X X X X X X X X X X
GAPDH X X X X X X
X X X X X X X X X X X X X X
PGK1 X X X X X X X X X X X X X X
PGAM-B X X X X
ENO-α X X X X X X X X X X X X X X X
PYK M X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
LDH A X X X X X X X X X X X X X
PFKFBP3 X X X X X
MTC4 No hay reportes
Datos obtenidos de las referencias 12, 13, 22, 35 y 36. Gm, glándula mamaria; Endo, endometrio; C y C, cabeza y
cuello; N. Lin, nódulos linfáticos; SN, sistema nervioso; LR, linfoma reticular; MO, médula ósea.

6. REB 28(2): 42-51, 2009 El factor HIF-1 y la glucólisis en las células tumorales 47
PFK- L y PFK-M sean las que se ex- señalar que también se ha reportado matozoide. El HIF-1 induce la expre-
presan preferentemente, por su baja el aumento en la expresión de las sión de la PGK1 (Fig. 2) (1) y es la
sensibilidad a sus inhibidores fisioló- isoenzimas B y C. isoenzima que se ha encontrado sobre-
gicos (aunque el HIF-1 solo afecta la expresada en los tumores (Tabla 2).
expresión de la PFK-L). Por lo que en Triosa fosfato isomerasa (TPI) La sobre-expresión de la PGK1 pue-
las células tumorales la PFK se man- Es un dímero que consta de dos de tener mayor relevancia en otros
tiene muy activa contribuyendo así al subunidades de 27 KDa de la cual no se procesos que en la misma glucólisis,
incremento de la glucólisis. conocen isoenzimas (Tabla 1, la reac- pues se ha determinado que la PGK1
Además, cabe señalar que en las ción que cataliza se indica en la Fig. 2), participa en la generación de la
células tumorales se mantienen nive- aunque pueden encontrarse proteínas angiostatina (inhibidor de la
les elevados de la fructosa 2,6 con modificaciones post-traduccionales angiogénesis y la metástasis) que es
bifosfato (F2-6BP), el activador mas (16). La expresión de la TPI es afectada un producto de la proteolísis de la
potente que se conoce de la PFK tipo por el HIF-1, aunque es la enzima con plasmina. Después de ser secretada
I (aspecto abordado en la sección de la mayor actividad de todas las enzimas por el tumor, la PGK1 reduce los en-
la PFKII) y que reduce que forman la glucólisis, pues su activi- laces disulfuro de la plasmina con lo
significativamente el efecto inhibito- dad oscila entre 6-61 U/mg, mientras que cual quedan expuestas secciones que
rio del ATP y el citrato. el resto de las enzimas de la vía tienen son eliminadas por proteasas, origi-
actividades de 0.003 a 0.8 U/mg. En- nando la angiostatina (19). Sin embar-
Aldolasa (ALD) tonces, es probable que el incremento go, se desconoce la contribución que
La ALD es un tetrámero de observado en la actividad de la TPI en puede tener la angiostatina en el de-
subunidades de 40 KDa, de la cual exis- los tumores (Tabla 2), más que para fa- sarrollo tumoral.
ten tres isoenzimas (Tabla 1), la ALD- vorecer el incremento de la glucólisis,
A que se encuentra predominantemen- su contribución sea en algún otro pro- Fosfoglicerato mutasa (PGAM)
te en el músculo, la ALD-B que se en- ceso que aún se desconoce. Esta enzima cataliza la conversión del
cuentra el hígado y la ALD-C en el 3-fosfoglicerato (3PG) a 2-fosfo-
cerebro, y combinaciones de ellas se Gliceraldehído 3-fosfato deshidro- glicerato (2PG) (Fig. 2) y tiene como
distribuyen en todos los tejidos (16). genasa (GAPDH) cofactor al 2,3-bifosfoglicerato
Las ALDs A y C son más eficien- Esta enzima es un homo-tetrámero de (2,3BPG). La PGAM es un dímero
tes en catalizar la reacción de la subunidades de 37 KDa (14) (Tabla (Tabla 1) compuesto por las isoenzimas
fructosa 1,6 bifosfato (F1-6BP) a 1, la reacción que cataliza se indica A y B (AA, BB y AB) las cuales están
gliceraldehído 3-fosfato (G3P) y en la Fig. 2). Al igual que otras codificadas por dos genes diferentes
dihidroxi acetona fosfato (DHAP) enzimas de la glucólisis, la GAPDH (20). Los parámetros cinéticos deter-
(F1-6BP > G3P + DHAP) de10 a 20 ejerce otras funciones. Por ejemplo, minados en las isoenzimas de ratón in-
veces que la isoenzima B (18), en tan- participa en la endocitosis, en la repa- dican que la afinidad de la PGAM-B
to que la ALD B presentan una mayor ración del ADN (debido a que es una por el 3PG (Km = 0.5 mM) y el 2,3BPG
afinidad por G3P y DHAP que le per- uracil ADN glucosilasa y remueve (Km = 25 µM) es mayor con respecto a
mite generar fácilmente F1-6BP (re- uracilos), en la transcripción, en la la PGAM-A (Km= 0.8 mM y 60 µM).
acción reversa, G3P + DHAP > F1- exportación de tARN al núcleo y al En tanto que la afinidad por el 2PG
6BP). Debido a esto, la ALD-A y C se parecer puede participar también en de ambas isoenzimas es similar (Km
encuentran preferentemente en los te- la apoptosis (15). En los tumores su = 0.28 mM) (21).
jidos con activa glucólisis como el incremento es inducido por el HIF-1 En estudios realizados con
músculo, en cambio la ALD- B se en- lo que puede favorecer alguna de las fibroblastos de ratón se encontró que
cuentra preferentemente en los tejidos actividades antes descrita. el incremento de ambas isoenzimas
gluconeogénicos como el hígado y el favorecía la proliferación e
riñón. El HIF-1 incrementa la expre- Fosfoglicerato cinasa (PGK) inmortalización de estas células, en
sión de las ALD- A y ALD-C (Fig. 2) La PGK es un monómero de 48 kDa tanto que cuando se disminuía su
(1), lo que favorece el incremento de que tiene dos isoenzimas (Tabla 1, la transcripción con ARN de interferen-
la glucólisis. De manera interesante, reacción que cataliza se indica en la cia se inducía una senescencia prema-
la isoenzima A es la que se encuentra Fig. 2); la PGK1 que se expresa en tura (22). Por ello se les ha relaciona-
expresada predominantemente en los todas las células somáticas y la PGK2 do con la inmortalización de las célu-
tumores (12) (Tabla 2), aunque cabe que se expresa solamente en el esper- las tumorales. La sobre-expresión de

7. 48 Marín-Hernández A
la PGAM-B se ha encontrado en di- el exón 2. La isoenzima PYK-M1 se PYK-M2, propiciando la dimerización
versos tipos de cáncer (hígado, pul- encuentra en cerebro, corazón y mús- de la enzima y su inactivación. Con esto
món, colon y glándula mamaria) (22). culo y la PYK-M2 se expresa en las disminuye el flujo glucolítico y se acu-
El HIF-1 regula la expresión de la células con activa proliferación como mulan los intermediarios de la vía an-
PGAM-B (23). células embrionarias, células stem, tes de la PYK, con lo que se favorece
leucocitos, plaquetas y células la síntesis de ácidos nucleicos, proteí-
Enolasa (ENO) tumorales. Las isoenzimas M1 y M2 nas y lípidos indispensables para la du-
Es una metaloenzima dímerica (Tabla son productos de un mismo gen so- plicación celular (27, 28).
1, la reacción que cataliza se indica metido a splicing alternativo (25).
en la Fig. 2); cada subunidad tiene un La PYK-M1 es la única isoforma Lactato deshidrogenasa (LDH)
peso molecular de 82-100 KDa. Pue- que no presenta cooperatividad con Esta enzima es un tetrámero con 2
de estar constituida por la combina- respecto al fosfoenolpiruvato (PEP). isoenzimas, LDH-A (isoenzima de
ción de tres isoenzimas ,  y , en- La PYK-M1 tiene la mayor afinidad músculo) y LDH-B (isoenzima de co-
contrándose solo las siguientes com- por PEP (Km = 0.08 mM), mientras razón) y con cinco combinaciones for-
binaciones ,  ,  ,  y  (24). que la PYK-R tiene la menor afinidad madas a partir de las dos isoformas
La ENO- se encuentra en la mayoría (Km = 1.4 mM). Tres de las cuatro (Tabla 1, la reacción que cataliza se
de los tejidos incluyendo el hígado, la isoenzimas (R, L y M2) se activan por indica en la Fig. 2); LDH1(B4), LDH-
ENO- se encuentra preferentemente F1-6BP (Ka = 0.06 a 0.4 µM). El ATP 2 (B3A), LDH-3 (B2A2), LDH-4 (BA3)
en el músculo y la ENO- se encuen- ejerce una potente inhibición sobre las y LDH-5 (A4), las cuales difieren en
tra en los tejidos cerebrales (24). La isoformas L y R (Ki = 0.1 y 0.04 mM, sus propiedades cinéticas. En testícu-
caracterización parcial indica que las respectivamente) y una ligera inhibi- lo y en los espermatozoides se expre-
isoenzimas tienen una afinidad simi- ción sobre las isoformas M1 y M2 sa exclusivamente otra isoenzima de
lar por el 2PG (Km = 30 µM) (25). (Ki= 3 y 2.5 mM, respectivamente). la LDH conocida como LDH-C4 (29).
El gen de la ENO- es blanco del La actividad de la PYK- L y PYK- R En los tejidos en donde se generan
HIF-1 y se ha observado el aumento también se regula por fosforilación/ grandes cantidades de lactato (hígado
en su transcripción en diversos tipos desfosforilación en cambio, las y músculo esquelético) se encuentra
de cáncer (Tabla 2). Esta isoenzima isoenzimas M1 y M2 no son predominantemente LDH-5 y LDH-4,
puede favorecer el crecimiento y la di- fosforiladas y por lo tanto no son re- isoenzimas con alto contenido
seminación de los tumores (metásta- guladas por acción hormonal (26). subunidad A que preferentemente ge-
sis), debido a que actúa como recep- El HIF-1 incrementa la expresión nera lactato a partir del piruvato. En
tor del plasminógeno. El sistema del de la isoenzima M2, que es la princi- cambio en aquellos tejidos que con-
plasminógeno se encarga de degradar pal isoenzima que se encuentra en tu- sumen lactato (corazón, eritrocito y
los coágulos de fibrina que se gene- mores (Tabla 2). Esto puede favore- riñón) se encuentran predominante-
ran en el organismo, así como de fa- cer a la glucólisis por ser poco sensi- mente las isoenzimas con mayor pro-
vorecer la migración celular debido a ble al efecto inhibitorio del ATP y no porción de la subunidad B (LDH-1 y
que facilita la penetración a través de ser regulada por fosforilación. Ade- LDH-2) que tienen mayor afinidad por
las barreras proteicas (24). más, la PYK-M2 se encuentra como lactato (Km = 4 mM) con respecto a
dímero (poco activa) y como tetrámero la isoenzima A (Km = 7 mM) (30).
Piruvato cinasa (PYK) (activa); la proporción de estas dos for- Es claro que para favorecer el au-
Esta enzima es un tetrámero con cua- mas depende de las concentraciones de mento en la velocidad de glucólisis y
tro isoenzimas (Tabla 1, la reacción F1-6BP y de algunas oncoproteínas por lo tanto la producción de lactato, el
que cataliza se indica en la Fig. 2). La (pp60 v-src y HPV-16 E7) (27). Recien- HIF-1 induce la sobre-expresión de la
PYK-L que se encuentra en hígado y temente se ha establecido que la PYK- LDH- A (Fig. 2). Sin embargo, puede
riñón (tejidos gluconeogénicos) y la M2 es la única isoenzima que une que el incremento en la cantidad de esta
PYK- R que se expresa en eritrocito péptidos fosforilados en tirosina; estos enzima también sea para favorecer otras
son codificadas por el mismo gen péptidos se inducen al ser estimulada de las actividades que realiza. Diversos
(compuesto de 12 exones), pero por la célula por factores de crecimiento reportes indican que la enzima se une a
el uso de promotores alternativos se (28). A su vez, los péptidos y las ADN de una sola cadena por lo cual se
transcribe una u otra isoforma. El pro- oncoproteínas que interaccionan direc- especula sobre su participación en la
motor específico para PYK-R se lo- tamente con la enzima, inducen la li- transcripción. La unión de la LDH al
caliza en el exón 1 y para PYK-L en beración del activador (F1-6BP) de la ADN se inhibe por NADH, porque los

8. REB 28(2): 42-51, 2009 El factor HIF-1 y la glucólisis en las células tumorales 49
sitios de la enzima que permiten la unión la enzima recombinante) en compara- baja por ambos sustratos (Km = 28 y
a la cadena de ADN son próximos al ción de la actividad de cinasa (140 mU/ 150 mM) (33).
sitio de unión de la coenzima; por ello mg); estos valores de actividad corres- Hasta el momento, no hay estudios
se considera que la relación NADH/ ponden a una relación cinasa/fosfatasa enfocados en determinar que
NAD+ puede regular la unión de la LDH de 710 que, comparado al valor de otras isorformas de los MCTs se expresan
al ADN. Además, se ha encontrado que isoenzimas (0.4-4.1) es muy alto. Ade- en los diversos tipos de cáncer, aun-
la LDH forma parte de un complejo más se ha descrito que la actividad de que recientemente se describió que
transcripcional denominado OCA-S el cinasa de PFKFB-3 no se inhibe por MCT4 se sobre-expresa por el HIF-
cual en fase S induce la transcripción fosforilación, debido a que esta 1(34). Por lo tanto, no se descarta que
de la histona H2B (15). isoenzima carece del sitio de MCT4 se sobre-exprese en algunos
fosforilación (serina 36) (31). tipos de cáncer.
Fosfofructocinasa tipo II (PFK-II) El aumento en la concentración de La expresión del MTC4 favorece
Esta es una enzima homodimérica F2-6BP en las células tumorales favo- el incremento de la glucólisis debido
bifuncional con actividad de cinasa y rece el incremento en el flujo a que la baja afinidad del transporta-
bifosfatasa que se localizan en los ex- glucolítico, debido a que la PFK-I se dor por piruvato impide la rápida ex-
tremos carboxilo y amino terminal, activa al máximo y deja de ser inhibida pulsión de esté del interior de la célu-
respectivamente (31). Regula las con- por el ATP y el citrato. la. Esto permite que la LDH-A lo uti-
centraciones de F2-6BP (el activador lice para regenerar NAD+ (Fig. 2),
más potente de la PFK-I ), ya que la Transportador de monocarboxi- sustrato indispensable para que se
cinasa sintetiza F2-6BP a partir de F6P latos (MCT) mantenga la glucólisis activa.Además,
y ATP, en tanto que la bifosfatasa de- Con el aumento en la glucólisis, el este transportador expulsa al lactato y
grada la F2-6BP a F6P y fosfato inor- lactato y los H+ que se producen tie- los H+ (productos de la reacción de la
gánico (Fig. 2). Así, la relación cinasa/ nen que ser expulsados por las célu- LDH-A), impidiendo la disminución
bifosfatasa determina que reacción se las tumorales antes de que induzcan del pH intracelular que afectaría la
favorece y por lo tanto el contenido estrés osmótico y la acidificación del actividad de las enzimas de la
de F2-6BP en la célula. A su vez, las citosol, lo cual afectaría la glucólisis (Fig. 2).
dos actividades en la enzima se regu- homeostasis de la célula (33). Integrando la información anterior,
lan por algunos metabolitos (PEP, - La familia de MCTs está compues- el HIF-1 incrementa la velocidad de
glicerol fosfato y citrato) y por ta por 14 miembros. Se ha documen- la glucólisis en las células tumorales
fosforilación en la serina 32 por la tado experimentalmente que los pri- debido a que induce un aumento en la
proteína cinasa A, que inhiben la acti- meros cuatro miembros (MTC1- actividad de todas las enzimas que
vidad de cinasa y favorecen la de MTC4) transportan y expulsan L- forman parte de esta vía metabólica.
fosfatasa (31). lactato así como otros importantes En primera instancia el HIF-1
En el genoma de la rata y del huma- monocarboxilatos (piruvato y cuerpos incrementa la actividad de las enzimas
no hay cuatro genes (PFKFB-1, 2, 3 y cetónicos) junto con un protón. La que controlan la glucólisis como el
4) que codifican para cuatro isoenzimas expulsión del lactato (generado por la transportador de glucosa (GLUT1 y
(hígado, corazón, placenta y testículo) glucólisis) se favorece con la dismi- GLUT3) y la hexocinasa (HKI y
(Tabla 1) de la PFK-II. Al parecer los nución del pH a nivel intracelular. HKII). Con ello se facilita la entrada
cuatro genes pueden ser regulados por El MCT1 se encuentra en todos los de la glucosa y su fosforilación,
HIF-1, aunque solo para el gen de la tejidos, mientras, el MCT2 se expre- generándose G6P. Con el incremen-
PFKFB-3 se ha demostrado la presen- sa en el riñón y el cerebro. En retina to en la actividad de la HPI se favo-
cia de secuencias consenso para la se localiza el MCT3, en tanto el MCT4 rece la conversión de la G6P a F6P.
unión de este factor de transcripción se localiza preferentemente en los te- Posteriormente la PFK-L toma la F6P
(32). El producto de este gen jidos con una activa glucólisis, como para generar F1-6BP, esta enzima es
(isoenzima de placenta) se llega a en- músculo esquelético, leucocitos, tes- muy activa debido a su baja
contrar sobre-expresado en una gran tículo, pulmón, placenta y corazón. sensiblilidad a la inhibición ejercida
variedad de tumores (Tabla 2). La pre- Las afinidades que se han determina- por el ATP y el citrato, lo que permi-
sencia de esta isoenzima propicia un do para las cuatro isoformas oscilan te que no se frene la glucólisis. El au-
aumento en la concentración de la F2- entre 0.7 a 28 mM por L-lactato y de mento en la concentración de la F2-
6BP, debido a que la actividad de 0.1 a 150 mM por piruvato, siendo el 6BP (potente activador de la enzima)
fosfatasa es muy baja (0.2 mU/mg para MTC4 el que mostró la afinidad mas inducido por la PFKII (isoenzima

9. 50 Marín-Hernández A
PFKFB-3) contribuye en esta falta de tener a la glucólisis. Finalmente la procesos (transcripción reparación
sensibilidad. A partir de la F1-6BP la expresión del MTC-4 permite que el del ADN, migración celular, inhibi-
ALD A o ALD C generan G3P y piruvato generado no salga de la célu- ción de la apoptosis, proliferación
DHAP, como estas enzimas catalizan la para que se regenere el NAD+, ade- celular, inmortalización celular, inva-
con mayor eficiencia esta reacción que más de expulsar eficientemente el sión y metástasis), que permiten el
la reacción reversa (G3P+DHAP > F1- lactato y los H+ que afectan el pH desarrollo de los tumores. Por ello,
6BP), permiten la acumulación de intracelular. el HIF-1 es un blanco terapéutico
G3P y DHAP, para que puedan ser to- Por otra parte el HIF-1 favorece atractivo.
mados por la TPI (que transforma la el desarrollo de las células tumorales A este respecto, existen avances
DAHP a G3P) y la GAPDH (que trans- al inducir la expresión de enzimas de y la inhibición del HIF-1 ha dado
forma al G3P a 1,3 bifosfoglicerato). la glucólisis, que pueden participar como resultado una reducción en el
Con el incremento en la actividad de en otros procesos como: la transcrip- crecimiento tumoral. Sin embargo, en
la PGK, de la PGAM y de la ENO se ción (GAPDH, LDH-A) , la repara- algunos tipos de cáncer la inhibición
favorece la transformación del 1,3 ción del ADN (GAPDH), la migra- del HIF-1 causó un aumento en la
bifosfo-glicerato a PEP con la gene- ción celular (HPI), la inhibición de proliferación celular (37). Por tal
ración de ATP. El PEP es tomado por la apoptosis (HKI y HKII), la proli- motivo, es indispensable establecer
la PYK-M2 para producir piruvato y feración celular (PGAM-B, HPI), la cuales son las circunstancias que fa-
ATP. Esta enzima es muy activa a cau- inmortalización celular (PGAM-B), vorecen uno u otro efecto, ya que
sa de que no es inhibida por el ATP, es la invasión (ENO-, HPI) y la me- hasta el momento no es muy claro.
activada por la F1-6BP y no es tástasis (ENO-, HPI). Adicionalmente, la inhibición del
fosforilada por acción hormonal. El HIF-1 puede acarrear algunos efec-
piruvato producido es transformado en Conclusiones tos secundarios adversos, sobre todo
lactato por la LDH-A regenerando el Con base en la información vertida por que este factor participa en va-
NAD+ (Fig. 2), lo que permite que se en esta revisión, podemos concluir rios procesos fisiológicos como en el
mantenga funcionando la glucólisis. que el HIF-1 incrementa la expresión desarrollo del corazón, del sistema
La baja afinidad que tiene la LDH-A de determinadas isoformas de las vascular y de los osteoblastos. Ade-
por el lactato impide catalizar enzimas glucolíticas en las células más de ser un factor clave en el desa-
eficientemente la reacción reversa tumorales (Tabla 2), para favorecer rrollo embrionario y en el manteni-
(lactato > piruvato) y por lo tanto de- el aumento de la glucólisis y de otros miento del sistema inmune (37).
REFERENCIAS
1. Semenza GL (2000) HIF-1: mediator of physiological 6. Bell EL, Klimova TA, Eisenbart J, Moraes CT, Murphy
and pathophysiological responses to hypoxia. J Appl MP, Budinger GRS, Chandel NS (2007) the Qo site
Physiol 88: 1474-1480. of the mitochondrial complex III is required for the
transduction of hypoxic signaling via reactive oxygen
2. Zhong H, De Marzo AM, Laughner E, Lim M, Hilton species production. J. Cell. Biol. 177: 1029-1036.
DA, Zagzag D, Buechler P, Isaacs W, Semenza GL,
Simons JW (1999) Overexpresion of hypoxia-inducible 7. Guzy RD, Schumacker PT (2006) Oxygen sensing by mito-
factor 1 in common human cancers and their me- chondrial at complex III: the paradox of increased reactive
tastases. Cancer Res 59: 5830-5835. oxygen species during hypoxia. Exp. Physiol. 91: 807-819.
8. Lee K, Roth RA, LaPres JJ. (2007) Hypoxia, drug
3. Fedele AO, Whitelaw ML, Peet DJ (2002) Regulation therapy and toxicity. Pharmacol. Ther.113, 229-246.
of gene expression by the hipoxia-inducible factors. Mo-
lecular Interventions 2, 229-243. 9. Pouysségur J, Mechta-Grigoriou (2006) Redox regu-
lation of the hypoxia-inducible factor. Biol. Chem.
4. Pouysségur J, Dayan F, Mazure NM (2006) Hypoxia 387: 1337-1346.
signalling in cancer and approaches to enforce tumour
regression. Nature 441: 437-443. 10. Burant CF, Bell GI (1992) Mammalian facilitative
glucosa transporters: evidence for similar substrate
5. Ward JPT (2008) Oxygen sensors in context. Biochim. recognition sites in functionally monomeric proteins.
Biophys. Acta 1777: 1-14. Biochemistry 31: 10414-10420.

10. REB 28(2): 42-51, 2009 El factor HIF-1 y la glucólisis en las células tumorales 51
11. Marín-Hernández A, Rodríguez-Enríquez S, Vital- 25. Shimizu A, Suzuki F, Kato K (1983) Characterization of
González PA, Flores-Rodríguez FL, Macías-Silva M, alpha alpha, beta beta, gamma gamma and alpha gamma
Sosa-Garrocho M, Moreno-Sánchez R (2006) Determin- human enolase isoenzymes, and preparation of hybrid
ing and understanding the control of glycolysis in fase- enolases (alpha gamma, beta gamma an alpha beta) from
growth tumor cells. Flux control by an over-expressed homodimeric froms. Biochem. Biophys. Acta 748:278-
but strongly product-inhibited hexokinase. FEBS J. 273: 284.
1975-1988.
26. Imamura K, Tanaka T (1982) Pyruvate kinase isozymes
12. Alterberg B, Greulich KO (2004) Genes of glycolysis from rat. Methods Enzymol. 90:150-165.
are ubiquitously overexpressed in 24 cancer classes.
Genomics 84: 1014-1020. 27. Mazurek S, Grimm H, Boschek CB, Vaupel P, Eigenbrodt
E (2002) Pyruvate kinase type M2: a crossroad in the
13. Macheda ML, Rogers S, Best JD (2005) Molecular and tumor metabolome. Brit. J. Nutr. 87:23-29.
cellular regulation of glucose transporter (GLUT) pro-
teins in cancer. J. Cell. Physiol. 202: 654-662. 28. Chirstofk HR, Vander Heiden MG., Wu N, Asara JM,
Cantley LC (2008) Pyruvate kinase M2 is a
14. Wilson JE (2003) Isozymes of mammalian hexokinase: phosphotyrosine-binding protein. Nature 452:181-188.
structure, subcellular localization and metabolic func-
tion. J. Exp. Biol. 206:2049-2057. 29. Drent M, Cobben NAM, Henderson RF, Wouters EFM,
van Dieijen-Visser M (1996) Usefulness of lactate de-
15. Kim JW, Dang CV (2005) Multifaceted roles of gycolytic hydrogenase and its isoenzymes as indicators of lung
enzymes. TRENDS Biochem. Sci. 30: 142-150. damage or inflammation. Eur. Respir. J. 9:1736-1742.
16. van Wijk R, van Solinge WW (2005) The energy-less 30. Buhl SN, Jackson KY, Vanderlinde RE (1977) The effect
red blood cell is lost-erythrocyte enzyme abnormalities of temperature on kinetic constants of human lactate dehy-
of glycolysis. Blood 106: 4034-4042. drogenase 1 and 5. Clin. Chem. Acta 80: 265-270.
17. Danaway GA, Kasten TP, Sebo T, Trapo R (1988) 31. Okar DA, Manzano A, Navarro-Sabate A, Riera Ll,
Análisis of the phosphofructokinase subunits and isoen- Bartrons R, Lange AJ (2001) PFK-2/FBPase-2: maker
zymes in human tissues. Biochem. J. 251:677-683. and breaker of the essential biofactor fructose-2, 6-
bisphosphate. TRENDS Biochem. Sci. 26: 30-35.
18. Pezza JA, Choi KH, Berardini TZ, Beernink PT, Allen
KN, Tolan DR (2003) Spatial clustering of isozyme-spe- 32. Obach M, Navarro-Sabate A, Caro J, Kong X, Duran J,
cific residues reveals unlikely determinants of isozyme Gómez M, Perales JC, Ventura F, Rosa JL, Bartrons R
specificity in fructose-1,6-bisphosphate aldolase. J. Biol. (2004) 6-phosphofructo-2-kinase (pfkfb3) gene promoter
Chem. 278: 17307-17313. contains hypoxia-inducible factor-1 binding sites neces-
sary for transactivation in response to hypoxia. J. Biol.
19. Lay AJ, Jiang XM,, Kisker O, Flynn E, Underwood A, Chem. 279: 53562-53570.
Condron R, Hogg PJ (2000) Phosphoglycerate kinase
acts in tumour angiogenesis as a disulphide reductase. 33. Halestrap AP, Meredith (2004) The SLC16 gene family-
Nature 408: 869-873. from monocarboxilate transporters (MTCs) to aromatic
amino acid transporters and beyond. Pflugers Arch.
20. Repiso A, Ramirez Bajo MJ, Vives Corrons JL, Carreras J, 447:619-628.
Climent F (2005) Phosphoglycerate mutase BB isoenzyme
deficiency in a patient with non-spherocytic anemia: famil- 34. Ullah MS, Davis AJ, Halestrap AP (2006) The plasma
ial and metabolic studies. Haematologica 90: 257-259. membrane lactate transporter MCT4, but not MCT1, is
up-regulated by hypoxia through a HIF-1-dependent
21. Fundele R, Krietsch WKG (1985) Purification and prop- mechanism. J. Biol. Chem. 281:9030-9037.
erties of the phosphoglycerate mutase isoenzymes from
the mouse. Comp. Biochem. Physiol. 81:965-968. 35. Balinsky D, Platz CE, Lewis JW (1983) Isozyme pat-
terns of normal, benign, and malignant human breast tis-
22. Kondoh H, Lleonart ME, Gil J, Wang J, Degan P, Peters G, sues. Cancer Res. 43: 5895-5901.
Martinez D, Carnero A, Beach D (2005) Glycolytic enzymes
can modulate cellular life span. Cancer Res. 65: 177-185. 36. Atsumi T, Chesney J, Metz A, Leng L, Donnelly S,
Makita Z, Mitchelll R, Bucala R (2002) High expres-
23. Tarahashi Y, Tarahashi S, Yoshimi T and Miura T (1998) sion of inducible 6-phosphofructokinase-2-kinase/fruc-
Hypoxia-induced expression of phosphoglycerate mu- tose-2,6-biphosphatase (iPFK-2; PFKFB3) in human
tase B in fibroblast. Eur. J. Biochem. 254:497-504. cancers. Cancer Res. 62: 5881-5887.
24. Pancholi V (2001) Multifunctional -enolase: its role 37. Weidemann A, Johnson RS (2008) Biology of HIF-1.
in deseases. Cell. Mol. Life Sci. 58:902-920. Cell Death Differ. 15: 621-627.