Este documento presenta un informe sobre el reconocimiento de equipos de laboratorio realizado por estudiantes de ingeniería agroindustrial. Describe siete equipos analizados: cromatógrafo de gases, HPLC, texturómetro, reómetro programable, colorímetro, espectrofotómetro UV/VIS y refractómetro. Para cada equipo, explica sus aplicaciones en el análisis de alimentos, como la detección de vitaminas y compuestos químicos. El objetivo del informe fue familiarizar a los estudiantes con los equipos y sus
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UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZÁN
E.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
Análisis por Instrumentación
INFORME N° 01
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS DE LABORATORIO
Roy E. Arpasi Bartolo, Margarita S. Celestino Maylle, Percy Gómez Samudio, Luz Y. Paz Timoteo
I. INTRODUCCIÓN
La presente práctica se realizó en el laboratorio de análisis de instrumentación con el objetivo de conocer las diferentes áreas
y equipos básicos de un laboratorio de análisis por instrumentación, conocer las principales normas de comportamiento y
seguridad dentro del laboratorio, para lo ello se hizo un recorrido por el laboratorio, describiendo donde se encontraba cada
área y los materiales y equipos que hay en cada una de ellas. El resultado de esto fue conocer como está organizado el
laboratorio de análisis por instrumentación, así como las funciones de las áreas, que reactivos se encuentran en ellas y cuál es
el cuidado, manejo y mantenimiento de las áreas con el fin de conocer todo el funcionamiento de este laboratorio para realizar
las prácticas de manera adecuada y obtener resultados deseados.
Los refractómetros manuales digitales, proporciona mediciones de azúcar con compensación de temperatura al toque de un
botón, eliminando errores del operador frecuentemente asociados con refractómetros ópticos. Los instrumentos son pequeños
y robustos permitiendo su uso en el campo o en el laboratorio. Entre las aplicaciones típicas se incluyen bebidas, azúcar,
agricultura, industrias y el sector de alimentos (Billingam y Stanley, 2010, p. 5).
Los Texturómetro contribuyen en la determinación de la firmeza este es un atributo de la textura de las frutas y vegetales que
está relacionada con el punto de cosecha, la calidad para su comercialización y el procesamiento. Este atributo está ligado con
los cambios físico-químicos y estructurales del material biológico (Zapata et al., 2010, p. 161).
Entre los métodos utilizados para la identificación y cuantificación de riboflavina en los alimentos se encuentran los
fluorimétricos, microbiológicos y espectrofotométricos. Sin embargo, algunos de ellos tienen baja especificidad y un tiempo
de análisis largo es por ello que la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una técnica ampliamente utilizada en
la industria alimentaria para un análisis rápido de vitaminas, debido a su alta sensibilidad y especificidad en comparación con
la detección ultravioleta, la de fluorescencia es más rápida, selectiva y detecta cantidades más pequeñas del analito (Bueno et
al., 2009, p. 136).
En el contenido de algunas vitaminas en cultivos de microalgas Chlorella sp. Se determina la Vitamina C. por el método
espectrofotométrico, con el empleo de ácido tricloroacético y reactivo UTC (tiourea, sulfato de cobre y dinitrofenil hidracina)
en el sobrenadante, luego de la extracción de la biomasa con ácido oxálico y cuyas lecturas se realizaron a 515 nm. Por otra
parte, en la determinación de Vitamina A también por método espectrofotométrico, después de extraída la biomasa con una
mezcla de hexanol: zacetona: etanol absoluto: tolueno (10:7:6:7) y tratada más tarde con una solución saturada de ácido
tricloroacético con lecturas realizadas a 620 nm (Quintana et al., 1998, p. 10).
La espectroscopia estudia la interacción de la radiación electromagnética con la materia. NIRS comprende el segmento de luz
de longitudes de ondas entre 800 y 2600 nm del espectro electromagnético y analiza la absorción de energía en dicha región
por los grupos funcionales de las moléculas de la muestra; También se debe mencionar que presenta algunas desventajas,
entre las cuales se destacan: el alto costo de los equipos, la competencia técnica que debe poseer el operador y el tiempo
requerido para desarrollar una base de datos que permita obtener ecuaciones de calibración robustas, que originen predicciones
confiables (Zossi et al., 2010, p. 2).
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II. OBJETIVOS
Reconocer los equipos del laboratorio y su uso en
el curso de análisis por instrumentación.
Conocer el manejo de equipos y su aplicación en
la agroindustria.
III. EQUIPOS DE LABORATORIO
3.1 CROMATÓGRAFO DE GASES
Este equipo separa las diversas sustancias volátiles que
están presentes en una muestra. La separación permite
identificar y cuantificar sus componentes con un solo
análisis. El equipo dispone de un detector de ionización de
flama y se aplica en el ámbito de las moléculas orgánicas
volatilizables (Ozores, 2015).
3.2 HPLC (CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE
ALTO RENDIMIENTO)
El HPLC es un equipo de cromatografía líquida cuya
técnica es utilizada para separar los componentes de una
mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar
(columna) y una fase móvil.
La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los
componentes de la solución emigran de acuerdo a las
interacciones de los compuestos con la columna. Estas
interacciones químicas, determinan la separación de los
contenidos en la muestra. (Bueno et al., 2009).
3.3 TEXTURÓMETRO
El texturometro es un equipo de laboratorio que se utiliza
para medir la firmeza de una fruta y relacionarla con el
nivel de madurez, esta ´pude estar influenciada por la
variedad del producto, la región o las condiciones de un
cultivo. Este equipo tiene medidores métricos calibrados
en el sistema métrico(kg) o imperial (lb) y cuentan con
distintos intervalos de presión según sea el caso a utilizarse
(Zapata et al., 2010).
3.4 REÓMETRO PROGRAMABLE
Un reómetro es un instrumento de laboratorio que se usa
para medir la forma en que fluyen un líquido, mezcla o
suspensión bajo la acción de fuerzas externas. Se emplea
para fluidos que no pueden definirse con un único valor de
viscosidad y por tanto requieren más parámetros que los
que puede proporcionar un viscosímetro. Mide la reología
del fluido. Reómetros con cilindro de medida y cono de
medida (Huaringa & Matos, 2011).
3.5 COLORÍMETRO
El colorímetro es el dispositivo que permite la
cuantificación de un color y permite su comparación con
otro, son dispositivos triestímulo (con tres filtros) que usan
los filtros rojo, verde y azul para emular la respuesta del
ojo humano a la luz y el color. Una vez hecha la
cuantificación, el valor numérico asignado al color
estudiado permitirá su adecuada clasificación en la escala
de colores. Este aparato basado en la ley de absorción de
la luz (Quipo et al., 2013).
3.6 ESPECTROFOTÓMETRO UV/VIS
Un espectrofotómetro de infrarrojos es un dispositivo
utilizado para recopilar información acerca de las
propiedades estructurales de moléculas orgánicas y
compuestos. En este tipo particular de espectrofotómetro,
la luz infrarroja es absorbida por los compuestos químicos,
y se analiza el movimiento de los enlaces químicos.
Espectrofotómetros de infrarrojos pueden ser utilizados
para identificar sustancias químicas desconocidas y para
determinar la pureza de la muestra (Quintana et al., 1998).
3.7 REFRACTÓMETRO
Un refractómetro es un instrumento óptico que se usa para
determinar el porcentaje de sólidos solubles en una
disolución líquida, para ello, el refractómetro hace uso del
principio de refracción total de la luz (originada por el tipo
y la concentración de las sustancias disueltas en una
disolución líquida (Billingam y Stanley, 2010).
Cuando la luz atraviesa de un medio a otro, la velocidad a
la cual viaja cambia en relación con la diferencia de la
densidad entre los dos materiales. El radio o cambio en la
velocidad de la luz es llamado índice de refracción y los
instrumentos que miden este parámetro se llaman
refractómetros (Billingam y Stanley, 2010, p. 2).
IV. RESULTADOS
APLICACIONES DEL CROMATÓGRAFO DE
GASES
Medioambientales: Análisis de pesticidas y
herbicidas, análisis de hidrocarburos, semivolátiles y
volátiles, análisis del aire.
Alimentos y aromas: Fragancias y aromas, aceites,
bebidas, ácidos orgánicos, azúcares, ésteres metílicos,
triglicéridos, alcoholes.
Química Industrial: Alcoholes, ácidos orgánicos, aminas,
aldehídos y cetonas, ésteres y glicoles, hidrocarburos,
disolventes, anilinas, gases inorgánicos.
Biociencia: Drogas, fármacos, alcoholes y contaminantes
en sangre, disolventes residuales.
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Derivadas del petróleo: Gas natural, gases permanentes,
gas de refinería, gasolinas, gasóleos, parafinas (Ozores,
2015).
APLICACIONES HPLC (CROMATOGRAFÍA
LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO)
Separación y purificación de metabolitos, separación y
purificación de los metabolitos de las drogas procedentes
de muestras de orina, purificación y separación de
enantiómeros, purificación de compuestos naturales,
purificación y caracterización de enzimas y proteínas
(Ozores, 2015).
Bueno et al. (2009) utilizó el HPLC en la cuantificación de
riboflavina (vitamina B2) en productos lácteos y mencionó
que:
La riboflavina es una vitamina hidrosoluble del
complejo B, y su contribución es esencial para el buen
funcionamiento del cuerpo. La leche es una de las
principales fuentes de riboflavina en la dieta humana;
Sin embargo, en la mayoría de los alimentos se degrada
durante los procesos térmicos convencionales y el
almacenamiento. En este trabajo se determinó el
contenido de riboflavina en productos lácteos
comerciales, leche para consumo directo y yogur,
mediante análisis cromatográfico líquido de alto
rendimiento (HPLC) con detección de fluorescencia.
La preparación de la muestra incluyó una hidrólisis
ácida (HCl 0,1N) seguida por una digestión enzimática
y una precipitación de proteínas al final (TCA al
100%). Para el análisis HPLC se utilizó un programa
de bomba isocrática (acetato de amonio-metanol 0,005
M, 72:28 v/v). Las concentraciones de riboflavina en
muestras de yogur fueron de 0,289 - 3,078 μgB2/g de
DW, mientras que en la leche pasterizada de ultra alta
temperatura y leche pasteurizada fue de 0,61-13,64
μgB2/g de DW y 11,73-15,41 μgB2/g de DW,
respectivamente. La leche para consumo directo y el
yogur son buenas fuentes de riboflavina; su consumo
regular ayuda a satisfacer las necesidades diarias.
APLICACIONES DEL TEXTURÓMETRO
Determinación de la firmeza de un fruto, Estudio de
textura de suelos, Determinación y obtención de
resistencia de frutos para apilamiento, Determinación
firmeza y textura relacionada a la etapa de madurez en
frutos.
Zapata et al. (2010) utilizó el Texturómetro en el estudio
sobre cambios de firmeza de bayas de arándanos durante
su maduración y mencionó que:
Se estudiaron los cambios de firmezas de arándanos
durante su maduración. Se trabajó con Texturómetro
(Texture Analyzer TA-XT2i) sobre las variedades
O´Neal, Misty, Reveille y Emerald, producidas en la
región de Santo Grande (Argentina). Los parámetros
de textura disminuyeron a medida que las bayas
desarrollaron su coloración característica, lo que
indicaría que la firmeza disminuye con la maduración.
En bayas maduras, la fuerza máxima tomó valores:
1,53; 1,94; 1,56 y 1,83N en O´Neal, Misty, Reveille y
Emerald, respectivamente; pendiente: 0,46; 0,62; 0,44
y 0,50N/mm; área: 1,76; 2,57; 2,20 y 2,30N mm;
curvatura: -0,13; -1,07; -0,25 y -0,13N/mm y fuerza
final: 0,36; 0,47; 0,39 y 0,75N. Como valores más altos
indican bayas más firmes, se puede concluir que Misty
presentó mejor textura, seguida de Emerald, O´Neal y
Reveille.
APLICACIONES DEL REÓMETRO
PROGRAMABLE
Permite Identificar fluidez, procesabilidad y desempeño
de un producto; Estructura y estabilidad; Viscosidad,
punto de gel y curado; Nivelación, sedimentación y vida
de anaquel. (Novoa 2013).
Huaringa y Matos (2011) utilizó el reómetro programable
en el estudio sobre la Importancia de los parámetros
reologicos de la pulpa de Capulí (Physalis peruviana) a
diferentes Temperaturas de Procesamiento y mencionó
que:
Las medidas reológicas se realizarán mediante un
reómetro rotacional Brookfield DV-III+. (Lewis 1993;
Alvarado y Aguilera 2001) y a partir de los datos de
porcentaje de corte y velocidad de rotación del spindle
se calculará la tensión cizalla y el gradiente de
velocidad mediante la metodología de Mitschka
(1982).
APLICACIONES DEL COLORÍMETRO
En la agroindustrial se utiliza para el análisis de color de
frutos y el cómo estos van variando según en cambio en su
maduración. Para determinar la variación de color de
pulpas o néctares según el paso del tiempo, es muy útil
para verificar el tiempo de vida de los productos y también
se utiliza para estandarizar colores en el proceso de algún
producto agroindustrial.
Quipo et al. (2013) utilizó el colorímetro en el estudio
sobre los cambios en la vitamina C y el color durante la
cocción del pimentón verde (Capsicum annuum) y
mencionó que:
La calidad del pimentón es valorada principalmente
por el sabor, el color, y el contenido de vitamina C. En
este estudio se exploró el efecto de la cocción en las
características fisicoquímicas de los frutos de
pimentón verde. Se pesaron 150 g cortados en tamaños
de 2,2 cm de largo y 1,3 cm de ancho y se sometieron
a los tratamientos térmicos (vapor y agua durante 5
min, y microondas 760 W durante 2 min), se enfriaron
rápidamente y se procedió a determinar el pH y acidez,
concentración de vitamina C por el método Indofenol,
contenido de clorofila total por espectrofotometría a
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652 nm y las coordenadas de color superficial.
Después de los tratamientos térmicos, la concentración
de vitamina C, el contenido de clorofila y la acidez
presentaron diferencias significativas (p< 0,05), por el
contrario, el pH, L*, a*, b*, C* y h° no se vieron
afecta-dos estadísticamente. La vitamina C varió
entre 147,84 ± 4,36 y 79,31± 5,44 mg de ácido
ascórbico/100 g de pimentón. La clorofila total oscilo
entre 4,44 ± 0,04 y 2,61± 0,04 mg de clorofila/100 g
de pimentón. En la acidez se registraron valores entre
0,10 ± 0,005 y 0,07 ± 0,001% ácido cítrico. El método
de cocción por microondas obtiene el mayor nivel de
retención de vitamina C, y el color superficial del
pimentón verde no es afectado por los diferentes
métodos de cocción evaluados en este estudio.
APLICACIONES DEL ESPECTROFOTÓMETRO
UV/VIS
Quintana et al. (1998) utilizó el espectrofotómetro en el
estudio sobre contenido de algunas vitaminas en cultivos
de microalgas Chlorella sp. y mencionó que:
Se presentaron las posibilidades de la biomasa de
microalga Chlorella sp. como fuente de vitaminas para
el consumo humano y animal. Se emplearon métodos
espectrofotométricos y cromatográficos, y se
desarrolló además una técnica cromatográfica que
permitió determinar simultáneamente varias
vitaminas. El cultivo de microalga Chlorella sp. aporta
una biomasa rica en vitaminas, utilizables en la
alimentación humana y animal, y constituye una forma
de depuración de residuales. La Vitamina C. Se
determinó por un método espectrofotométrico, con el
empleo de ácido tricloroacético y reactivo DTC
(tiourea, sulfato de cobre y dinitrofenil hidracina) en el
sobrenadante por otro lado la Vitamina A. Se
determinó por espectrofotometría, después de extraída
la biomasa con una mezcla de hexanol: zacetona:
etanol absoluto: tolueno (10:7:6:7) y tratada más tarde
con una solución saturada de ácido tricloroacético. Las
lecturas se hicieron a 620 nm.
Zossi et al. (2010) utilizó el espectrofotómetro en el
estudio sobre Espectroscopia por infrarrojo cercano y su
aplicación en jugo de caña de azúcar y mencionó que:
La espectroscopia por infrarrojo cercano (NIRS) es
una metodología instrumental que ha presentado un
desarrollo creciente en los últimos años en la industria
azucarera mundial. Se la utiliza tanto en centros de
investigación como en diversas industrias, por ser una
técnica no destructiva, rápida, que no emplea reactivos
químicos y que requiere menos mano de obra que los
métodos tradicionales empleados en el laboratorio. Por
tal motivo, se decidió determinar para las condiciones
de la industria azucarera de Tucumán (Argentina).
APLICACIONES DEL REFRACTÓMETRO
En la industria vinícola se usa para saber el contenido de
sólidos solubles totales de las uvas y, por lo tanto, su
potencial grado de alcohol, controlar el grado de
maduración de la uva en la viña y poder determinar el
momento óptimo para la vendimia.
Se utiliza para la medición del índice de refracción para
poder obtener de forma indirecta el porcentaje de humedad
en mieles.
Se utiliza para terminar los grados Baumé el cual indica el
índice de salinidad en una solución líquida (Billingam y
Stanley, 2010, p. 2).
V. CONCLUSIONES Y OBSERVACIONES
En conclusión, se llegó a conocer la importancia de los
equipos en el laboratorio de análisis por instrumentación y
el cómo estos ayudan al diagnóstico y seguimiento de
distintos parámetros sometidos a investigación, se conoció
la aplicación en la agroindustria y el como la tecnología
hoy en día se encuentra al alcance de todos facilitando y
abriendo puestas a investigadores valdizanos
huanuqueños.
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