control biologico usando hongos

1. Virología de Hongos

2. Propiedades generales de los
micovirus
• Corresponden a partículas ribonucleoproteicas
citoplasmáticas que poseen un genoma de RNA de
doble hebra, el que generalmente se encuentra
encapsidado por una cubierta proteica esférica o
isométrica, con un tamaño aproximado entre 25 y 50
nm de diámetro.
• Son latentes o crípticos.
• Se transmiten por rutas intracelulares y por
anastomosis de hifas.
• En algunos casos le confieren características fenotípicas
a su hospedador tales como el fenotipo killer y la
hipovirulencia.

3. Killer phenomenon. An agar plate buffered at pH4.7 and containing methylene
blue to stain dead cells is seeded with a lawn ofa sensitive strain. Streaks
ofa killer strain (above) and a nonkiller (below) are applied, and the plate
is incubated for 3 days at 20C. A clear zone is observed only around the
killer strain.

4. Métodos de detección

6. Ácidos nucleicos de B. cinerea 149

7. DNA
dsRNA
rRNA
rRNA
St 1 2
Electroforesis en gel de
agarosa al 0.8% de los ácidos
nucleicos totales de una cepa
silvestre de Botrytis cinerea
infectada con un totivirus.
Carril St, estándar de tamaño
molecular correspondiente al
DNA del fago lambda
digerido con HindIII y EcoRI;
carriles 1 y 2, ácidos nucleicos
totales de Botrytis cinerea. La
banda correspondiente al
dsRNA tiene un tamaño
molecular aproximado de 6.5
kilopares de bases.

8. CF11 cellulose chromatography

9. 1.6
1 2 3 4 5 6 7 8
21
4.9
2.0
0.9
Carriles: 1 DNA/EcoRI+Hind II Marker,2 Bc. Thompson, 3 Bc Sultanina,
4 Bc Aconex, 5 Bc SMC , 6 Bc. Red Globe, 7 Bc R, 8 Bc 103

10. 1 2 3 4
Carriles: 1 DNA/EcoRI+HindIII Marker,2 Bc. 166, 3 Bc 40, 4 Bc C4.
21
4.9
2.0
1.6
0.9

11. 45
R 40
23.1
4.4
2.3
23.1
4.4
2.3

14. Organización del genoma de los
micovirus de dsRNA
• Familia Totiviridae
– Partículas isométricas de 30-40 nm de
diámetro
– Cápside compuesta de un polipéptido
principal de 70-100 kDa
– RNA polimerasa de 165-175 kDa
– Una molécula de dsRNA de 4.6-7.0
kilopares de bases

15. ORF gag
Proteína de la cápside (Gag)
Proteína de fusión Gag-Pol (RNA polimerasa dependiente de RNA)
5’ 3’
ORF pol
Fig. 1. Organización del genoma del virus L-A de S. cerevisiae, el miembro
tipo del género Totivirus de la familia Totiviridae. El rectángulo lleno
representa la hebra (+) del genoma de dsRNA (4579 nucleótidos). Las
cajas abiertas representan los marcos de lectura abiertos (ORFs). Las
flechas representan las proteínas traducidas a partir de los ORFs.

16. • Familia Partitiviridae
– Partículas isométricas de 30-35 nm de
diámetro
– Un polipéptido principal de la cápside de 42-73
kDa
– RNA polimerasa dependiente de RNA (RdRp)
– Genoma compuesto de dos segmentos
monocistrónicos de dsRNA, cada uno de 1.4-
2.2 kpb, uno de ellos codifica para el
polipéptido mayoritario de la cápside y el otro
para la RdRp

17. ORF M1
Proteína de la cápside
RNA polimerasa dependiente de RNA
5’ 3’
ORF M2
5’ 3’
Fig. 2. Organización del genoma del virus FusoV de Fusarium solani f. sp.
robiniae (Nogawa y col., 1996), un miembro del género Partitivirus de la
familia Partitiviridae. Los rectángulos llenos representan la hebra (+) del
genoma de dsRNA. Las cajas abiertas representan los marcos de lectura
abiertos (ORFs). Las flechas representan las proteínas traducidas a partir de
los ORFs. Los tamaños de los dsRNAs M1 y M2 son 1645 y 1445 pares de
bases (pb), respectivamente.

18. • Familia Hipoviridae
– Sólo una molécula lineal de dsRNA de
10-13 kpb
– No poseen cápside viral
– El dsRNA junto con la RdRp están
encerrados en vesículas polimórficas
de 50-80 nm

19. Hypovirus taxonomy and genome organization
Figure 2 | Genetic organization and basic expression strategy for prototypic hypovirus CHV1-EP713. The coding strand
RNA of hypovirus CHV1-EP713 consists of 12,712 nucleotides (nts), excluding the poly(A) tail. The 5′ proximal coding domain,
ORF A (composed of 622 codons), encodes two polypeptides, p29 and p40 that are released from a polyprotein, p69, by an
autoproteolytic event mediated by p29 (arrowed). During translation, cleavage occurs between Gly248 and Gly249 of the
target sequence RIG GRL, and is dependent on Cys162 and His215 in the putative p29 catalytic site. Expression of ORF B
(composed of 3,165 codons) also involves an autoproteolytic event (arrowed) in which a 48-kD polypeptide, p48, is released
from the N-terminal portion of the encoded polyprotein. Cleavage, in this case, occurs between Gly418 and Ala419 of the
target sequence LVG AEE. The junction between ORF A and ORF B consists of the sequence 5′-UAAUG-3′. Translational
mapping studies indicated that the UAA portion of the pentanucleotide serves as a termination codon of ORF A, whereas the
AUG portion is the 5′ proximal initiation codon for ORF B, as indicated by the overlapping UAA/AUG codons. Computer-
assisted analysis revealed five distinct domains in the CHV1-EP713 coding regions that showed significant sequence similarity
with previously described domains, including polymerase (pol) and helicase (hel) domains, in plant potyvirus-encoded
polyproteins.

20. VIRUSES REDUCING VIRULENCE OF
Cryphonectria parasitica

21. Figure 1 | Taxonomic families and primary modes of hypovirulence-associated mycovirus transmission. a |
Taxonomic families represented by mycoviruses that are associated with hypovirulence of plant pathogenic fungi (see
TABLE 1) are shown with the virus structure and genome composition. Totiviruses and chrysoviruses form isometric
particles 30–35 nm in diameter, whereas the double-shelled fungal reovirus particles are 80 nm in diameter. b |
Mycoviruses are not infectious by an extracellular route. Transmission is restricted primarily to intracellular routes that
include cytoplasmic exchange during anastomosis (fusion of hyphae) or during the formation of spores. However, the
Cryphonectria parasitica mitovirus NB631 has been shown to be efficiently transmitted to sexual spores
(ascospores)117. dsRNA, double-stranded RNA; ssRNA, single-stranded RNA.

23. Cryphonectria (Endothia) parasitica
10 mm
Efecto del dsRNA sobre C. parasitica Bioensayos
155 CN2 2B
713 CN3 3B

25. Organización genómica y estrategia de expresión del
cDNA que codifica para el hipovirus CHV1-EP713

34. Fig. 2. Microfotografía de micovirus de B. cinerea CC4g427. A, B, C, D, E, F, G, H, I;
tinción negativa con fosfotungstato de potasio al 2% (p/v), pH 7.0. J, K; tinción negativa
con molibdato de amonio al 2%. A y B; fracción 4; C, fracción 5; D y E; fracción 7; F y G;
fracción 8; H, I, J y K; fracción 9.