genetica mcrobiana

1. Benemérita Universidad
Autónoma de Puebla
GENÉTICA MICROBIANA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
TEMA: TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Alumno: José Alberto García Orozco

2. Definición de ADN
recombinante
Clonación Genética
Vectores de clonación

3. Es una molécula de ADN formada por la unión de
dos moléculas de diferente origen.
unión in vitro de ADN
Dos organismos diferentes que
no se encuentran juntos

4. Introducir
ADN
recombinante
Modificación
genética
Adición de un
nuevo AND
Modificación
de rasgos
existentes

5. ADN
RECOMBINANTE
HERRAMIENTAS
ADN
cromosómico
COPIA DE PLÁSMIDO
RECOMBINANTE
LINEARICEN
LOS
VECTORES MULTIPLICARSE
BACTERIA
DIVISIÓN Y
FORMACIÓN DE UN
CLON

7. Agricultura y ganadería: producción de
plantas y animales transgénicos.

8. Tipos de clonación
 Clonación molecular
 Clonación celular
 Clonación de organismos
 Clonación de organismos de
manera artificial

9. Es el procedimiento de obtener una población de varios individuos
genéticamente homogéneos a partir de uno solo mediante reproducción
asexuada.
Clonación
molecular
Método
mas
conocido
Extraer una
parte del
AND
Instarlo
donde sea
conveniente

10. clonación fragmentación ligación
Transfecciónselección

11. Clonación
celular
De una sola
célula se
forma una
cierta
población
Su uso a
partir de aros
o cilindros de
clonación
Agente
mutagénico

12. Clonación de
organismos
amebas
Característica
fundamental
Se produce
una copia de
un organismo
ya existente
Misma
información
genética
Reproducción
asexuada

14. CLONACIÓN DE ORGANISMOS DE MANERA ARTIFICIAL
encontramos don tipos de células las cuales participan activamente en
la clonación de manera artificial
La primera de ellas es la que dona su material
genético (ADN)
la segunda es
la que lo recibe
Se basa en que el citoplasma del ovocito receptor tenga las cualidades necesarias para
reorientar el control genético de la célula donadora para poder crear el nuevo
organismo.
electrochoques se
fusionan
ambas células
son los encargados de
incitar al desarrollo de la
nueva célula formada
injertada en el útero de la
hembra donde se le permite un
ambiente apto para su
crecimiento.

16. Plásmidos
Fagos
Cósmidos
BAC
PAC
YAC

17. Vectores de clonación
Aquellos que permiten mantener el ADN
exógeno en la célula hospedadora.
DIFIEREN
especificidad de la célula huésped
tamaño de los insertos que pueden transportar
número de copias que producen
número y tipo de genes marcadores que
contienen

18. CARACTERISTICAS
primeros vectores
que se desarrollaron
proceden de
moléculas de ADN de
doble cadena
extracromosómicas
se replican
autónomamente
dentro de las células
bacterianas
Portan fragmentos
pequeños de ADN
pasajero, de entre
0,1 y 8 kb
pBR322, pUC18,
pBluescript

19. Tienen un origen de replicación (ORI).
Se sirven de las enzimas de la célula
bacteriana para replicarse, pero
contienen genes reguladores de la
replicación
Pueden transferirse por conjugación de
una bacteria a otra, puesto que poseen
genes tra (transferencia) y genes mob
(movilidad)
Éstos no están presentes en los
plásmidos usados como vectores, pues
no interesa que se transfieran de una
célula a otra

20. primer plásmido utilizado en biotecnología
Diseñado en 1977 por Bolívar
y Rodríguez
un gen de resistencia a la
ampicilina (ampr)
y otro de resistencia a la
tetraciclina (tetr)
Dianas de restricción:
EcoRI, PstI y BamHI

21. Bacteriófago O Fago lambda
virus complejo de ADN lineal bicatenario
Se conoce la secuencia completa de sus
48.502 pares de nucleótidos y la función de
sus genes
El tercio central del cromosoma contiene
genes que son requeridos para la
lisogenia
ciclo lítico

22. Parte central (de aproximadamente15 kb) del
cromosoma puede ser cortada con enzimas de
restricción y substituida por un fragmento de
ADN foráneo
Molécula resultante de ADN recombinante
puede ser empaquetada en las cabezas del
fago in vitro.

23. ciclo lisogénico
virus se inserta en un punto
concreto del genoma de la
bacteria. virus se replica cuando lo
hace la bacteria
su genoma a las réplicas de
E. coli.
ciclo lítico
se producen
partículas virales
liberadas al medioBacteria hospedadora es
lisada

24. Cartografiado
y secuenciado
completamen
te
Eliminar
partes no
útiles del
genoma
Introducir el
ADN exógeno
Cápside sólo
hay hueco
para 50 kb,

25. ADN vírico
ADN pasajero
Dos tipos de vectores
vectores de inserción

26. vector de inserción λgt10

27. vectores de sustitución
se sustituye toda la región prescindible del
genoma del fago por el ADN de interés
moléculas exógenas de mayor
tamaño (de hasta 20-25 kb).
Dos sitios de restricción
Flanquean el segmento de ADN que es
sustituido por el ADN que se va a
clonar.
Genoma del fago enzima de restricción
Tres fragmentos
brazo izquierdo, brazo derecho y región stuffer

29. Permiten la introducción de insertos de
ADN de hasta 45 kb

30. El origen de replicación y genes marcadores de
resistencia a antibióticos
plásmido
Gen lacZ
Orígenes de
replicación para
fagos como el M13

31. Fago λ
Extremos Cos
Emplean para la recircularización del mismo

32. Dos sitios cos, entre los cuales se sitúa la diana
de restricción Xba I
Un origen de replicación (ori).
Un sitio de clonaje múltiple (MCS), es un
polylinker que no interrumpe ningún gen
marcador, incluye la diana de restricción BamH I.
Dos genes marcadores: uno de resistencia a
ampicilina y otro de resistencia a neomicina
SV40 ori: origen de replicación del virus animal
SV40, usado para replicar el vector cuando se
introduce en células animales.

34. Enzima de
restricción
BamHI
Hidroliza los
grupos P de
los extremos
5'
Cortar el
vector y
linealizarlo
Extremos 5'
OH
Emplea la
enzima
fosfatasa
alcalina
Evita que el
plásmido se
circularice
de nuevo

35. cromosoma artificial bacteriano
 Usado para clonar fragmentos de ADN de 300
kb de tamaño medio
BAC
PACs BACs

36. Plásmido factor-F
Escherichia coli
Integrarse en el cromosoma
bacteriano y es responsable
de la conjugación bacteriana.
(factor de fertilidad)
Genes
oriS: origen de replicación
rep: control de la
replicación del plásmido
parA, parB, parC: genes implicados en el
mantenimiento de un número bajo de copias
(1 o 2) del plásmido en la bacteria.

37. No proceden del factor-F
gen de resistencia al
cloranfenicol
Minigen lacZ con un polylinker (MCS) en su
interior.
sitio reconocido por la
enzima recombinasa,
permite linealizar el
vector

38.  Cromosomas artificiales bacterianos
derivados del fago P1
 Alojan menos cantidad de ADN
pasajero
permiten el
empaquetamiento in
vitro
Intervienen en la
circularización del vector
Un origen de replicación
Gen marcador de
resistencia a la
canamicina
Gen marcador sac
implicado en el
metabolismo de la
sacarosa
sitio de clonaje múltiple

40. cromosoma
artificial de
levaduras
mayor capacidad (hasta 2 Mb)
Son utilizados en construcción de genotecas
genómicas
son más inestables
ADN que se inserta puede proceder
de dos regiones distintas del genoma

41. CARACTERISTICAS
BACTERIAS
LEVADURA
Origen de replicación (ori) de tipo plasmídico.
Gen marcador de resistencia a ampicilina
(ampr).
Secuencia de replicación de levaduras (SRA).
Genes marcadores
de selección
TRP
URA
metabolismo
Gen marcador de inserción sup adenina

42. Centrómero permite la segregación durante la
división celular
Dos secuencias teloméricas
(TEL), procedentes de un ciliado
del género Tetrahymena