GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO Nro. 04 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE CÉLULAS PROCARIONTES Y EUCARIONTES

1. MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
ASIGNATURA: BIOLOGÍA CELULAR Y
MOLECULAR
Yesenia Zorrilla Gutarra
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GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
Nro. 04
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE CÉLULAS
PROCARIONTES Y EUCARIONTES
1. INTRODUCCIÓN
El entendimiento de la configuración detallada de la célula ha sido posible gracias a la
microscopía. Las observaciones de la célula a través del microscopio se dan actualmente
con tal detalle siempre que se utilicen las técnicas adecuadas de visualización.
Los microscopios son instrumentos que han contribuido mucho al avance de las ciencias
biológicas principalmente. La naturaleza de las imágenes depende del tipo de microscopio
utilizado y de la forma en la que la muestra ha sido tratada. Cada técnica es diseñada para
atender determinadas características estructurales de la célula.
La propiedad principal del microscopio, no es el poder de aumento o magnificación de la
imagen en sí misma sino el poder de la resolución o la posibilidad de distinguir claramente
entre dos objetos muy cercanos entre sí.
Las células según posean su material genético ADN protegido por una membrana nuclear
o no pueden dividirse en dos grupos: Las que no poseen esta mebrana nuclear son las
procariontes y las que sí la tienen son las eucariontes. Esta es una característica distintiva
básica, sin embargo también hay otras diferencias morfológicas y fisiológicas entre estos
tipos celulares.
En esta práctica experimental se observará con ayuda del microscopio la morfología de
células procariontes y eucariontes utilizando las técnicas más adecuadas de fijación y
coloración.
2. OBJETIVO
Reconocer a través del uso de técnicas adecuadas de microscopía las diferencias
morfológicas de células procariontes (bacterias de sarro dental) y eucariontes (célula
epiteliales de mucosa bucal).

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3. PARTE TEÓRICA
3.1. EL MICROSCOPIO ÓPTICO:
Los microscopios ópticos pueden clasificarse en simples y complejos,
diferenciándose en su capacidad amplificadora y en la complejidad del sistema de
lentes asociado. La principal ventaja de un microscopio óptico es que permite
observar organismos vivos y tejidos. Su principal desventaja, es que su potencia
amplificadora está limitada por la longitud de onda de la luz visible.
MICROSCOPIO SIMPLE:
El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble, cuya distancia focal es
corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. También se les
denomina microscopios de bajo poder. Existen al menos dos tipos de microscopios
de bajo poder: monoculares y binoculares. Los microscopios monoculares tienen
muy bajo poder amplificador, siendo utilizado esencialmente por niños. Los
microscopios binoculares, estéreo microscopios o lupas, en cambio, proveen un
aumento mayor. Se caracterizan, porque presentan dos objetivos, de modo que el
objeto se puede ver en forma estereoscópica o tridimensional.
MICROSCOPIO COMPUESTO:
Los microscopios complejos disponen de varias lentes con las que se consiguen
aumentos mayores, pudiendo inclusive aumentar un objeto más de 2.000 veces.
Estos microscopios son, en general, los más utilizados. En este caso, el objetivo
está compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto
examinado. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de
los dos sistemas de lentes.
3.1.1. PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

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SISTEMAÓPTICO:
OCULAR: Lente situada cercadel ojo del observador. Amplia la imagen del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplia la imagen de ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
SISTEMAMECÁNICO
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares (Monocular o binocular).
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar
los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico, que aproxima el enfoque y
micrométrico que consigue el enfoque correcto.
3.1.2. MANEJO Y USO ADECUADO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
a) Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería estar en estas condiciones.
b) Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
c) Comenzar la observación con el objetivo de menor aumento (4x) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la muestra es de bacterias.
d) Para realizar el enfoque:
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular
para evitar incrustar el objetivo en la muestra.
 Una vez realizado el acercamiento, mirar a través de los oculares, ir
separando lentamente el objetivo de la preparación con el tornillo
macrométrico y, cuando se observe la muestra con cierta nitidez, ajustar el
tornillo micrométrico lentamente hasta obtener un enfoque más fino.
e) Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr mayor nitidez. Caso
contrario repetir la operación desde el paso c).
f) Uso del objetivo de inmersión:
 Bajar la platina por completo.
 Abrir por completo el condensador hasta ver el círculo de luz íntegro.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino
entre éste y el de 40X.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
 Girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
 Mirando al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toque la
gota de aceite y se adose a la misma.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico dejando una distancia mínima
entre el objetivo de inmersión y la preparación, aún menor que con el objetivo
de 40x puesto que el riesgo de accidente es muy grande.
 Una vez puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede
volver a usar el objetivo de 40x sobre esta zona, pues semarcharía de aceite.

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Si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación
desde el paso c).
 Al finalizar la observación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor
aumento girando el revólver. Retirar la muestra. ¡Nunca retirar la muestra si
se tiene el objetivo de inmersión en posición de observación!
 Limpiar el objetivo de inmersión utilizando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo de 40x esté bien limpio.
3.1.3. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
g) Al finalizar las observaciones con el microscopio,dejar el objetivo de menoraumento
en posición de observación y cubrir con la funda respectiva y si no seusará por largo
tiempo guardarlo en su respectiva caja para proteger del polvo.
h) No se tocan las lentes con la mano, la limpieza de las mismas se realiza utilizando
un papel de óptica.
i) NO se debe dejar portaobjetos colocados en la platina si no está utilizando el
microscopio.
j) En el caso de usar objetivo de inmersión, limpiarlo utilizando el papel de óptica
moviéndolo en un sólo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse en
el objetivo, limpiarlo utilizando una mezclade alcohol acetona (7:3) o xilol. No abusar
de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso sepueden
dañar las lentes y su sujeción.
k) No forzar los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
l) El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a
la preparación para prevenir el roce con la lente. No cambiar nunca el objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo, ni hacerlo mientras se está observando a través
del ocular.
m) Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño
humedecido de xilol.
n) Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión
práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de
los mismos.
3.2. OBERVACIÓN MICROSCÓPICADE CÉLULAS PROCARIOTAS Y
EUCARIOTAS:
La materia viva puede entenderse como el resultado de la interacción de
componentes, los cuales están organizados de un modo particular, que la hace
reconocible. De acuerdo con la naturaleza, número de unidades constituyentes y
tamaño de los componentes es posible reconocer distintos niveles de organización
de la materia viva.
El conjunto integrado de procesos generados a partir de la organización de los
componentes, que se conoce como la "vida", se materializa en una unidad
fundamental, la célula. Es en la célula donde es posible reconocer, desde el punto

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de vista morfológico, la presencia de agregados supramoleculares y organelos, los
que pueden ser estudiados, ya sea aprovechando algunas de las propiedades de
las macromoléculas que las componen, o bien mediante el uso de instrumentos
ópticos cuyo poder de aumento y resolución permite la visualización directa de las
estructuras celulares.
Dado que el ojo humano solo es capaz de resolver dos puntos separados por más
de 0.1 mm (10 μm) y como la mayoría de las células son de tamaño mucho menor,
es imprescindible hacer uso del poder de resolución del microscopioóptico (0.2 μm).
Los diversos tipos de microscopios de luz se basan fundamentalmente en su
capacidad para detectar pequeñas diferencias de índice de refracción de las
estructuras celulares. Los colorantes utilizados en citología e histología acentúan
estas diferencias permitiendo un mayor contraste de las estructuras observadas.
Para estudiar la morfología celular, es posible hacerlo directamente “in vivo”, o
bien, después de un proceso que implica la muerte celular por medio de fijación.

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Entre las células procarióticas y eucarióticas hay diferencias fundamentales en
cuanto a tamaño y organización interna. Las procarióticas, que comprenden
bacterias y cianobacterias (antes llamadas algas verdeazuladas), son células
pequeñas, entre 1 y 5 µm de diámetro, y de estructura sencilla; el material genético
(ADN) está concentrado en una región, pero no hay ninguna membrana que separe
esta región del resto de la célula. Las células eucarióticas, que forman todos los
demás organismos vivos, incluidos protozoos, plantas, hongos y animales, son
mucho mayores (entre 10 y 50 µm de longitud) y tienen el material genético envuelto
por una membrana que forma un órgano esférico conspicuo llamado núcleo. De
hecho, el término eucariótico deriva del griego núcleo verdadero, mientras que
procariótico significa antes del núcleo.
Pese a las muchas diferencias de aspecto y función, todas las células están
envueltas en una membrana -llamada membrana plasmática- que encierra una
sustancia rica en agua llamado citoplasma. En el interior de las células tienen lugar
numerosas reacciones químicas que les permiten crecer,producir energía y eliminar
residuos. El conjunto de estas reacciones se llama metabolismo (término que
proviene de una palabra griega que significa cambio). Todas las células contienen
información hereditaria codificada en moléculas de ácido desoxirribonucleico (DNA);
esta información dirige la actividad de la célula y asegura la reproducción y el paso
de los caracteres a la descendencia. Estas y otras numerosas similitudes (entre ellas
muchas moléculas idénticas o casi idénticas) demuestran que hay una relación
evolutiva entre las células actuales y las primeras que aparecieron sobre la Tierra.

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Los procariontes constituyen un amplio y variado número de organismos
unicelulares que incluye a los dominios de las eubacterias y arqueobacterias; cuyos
tamaños oscilanentre 0,2 y 2,0 µm de diámetro pudiendo presentar formas esféricas
o cocos, bastoncillos y espirales. El colorante que se utiliza mayormente para poner
en evidencia microscópica su presencia es el azul de metileno.
En el caso de las bacterias que habitan en el sarro dental se encuentran
principalmente las a) Estreptococos: mutans, sobrinus, sanguis, salivalis. Son los que
inician las caries. Tienen propiedades acidúricas:desmineralizan el esmalte y la dentina.
b) Lactobacilus casei: Es acidófilo, continua las caries ya formadas, con proteolíticos:
desnaturalizan las proteínas de la dentina.
c) Actinomyces: viscosus, naeslundii. Tienen acción acidúrica y proteolítica.
Las células eucariontes son más complejas que las procariontes principalmente por
la presencia en interfase de una envoltura nuclear. Es posible el reconocimiento de
las estructuras internas gracias a las coloraciones o tinciones.

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4. PARTE PRÁCTICA
4.1. PROBLEMA
¿Cuáles son las diferencias microscópicas entre
una célula procarionte (bacteria de sarro dental) y
una célula eucarionte (célula epitelial de la mucosa
bucal)?
4.2. PLANTEAMIENTO DE LAHIPÓTESIS
4.3. EXPERIMENTACIÓN
4.3.1. Aparte de la indumentaria personal y materiales de equipo que en forma
obligatoria deben portar. Disponer en forma ordenada y rotulada en su mesa de
trabajo lo siguiente:
INSTRUMENTAL REACTIVOS Y MUESTRAS
Láminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
Mondadientes o explorador bucal.
Hisopos.
Microscopio compuesto.
01 mechero de alcohol.
05 tubos de ensayo.
01 gradilla.
01 piseta o frasco lavador.
Tijeras.
02 goteros.
Papel de limpieza de lentes.
Papel toalla.
Pinza.
Colorante: azul de metileno.
Xilol.
Aceite de inmersión.
Muestra de sarro dentario.
Muestra de epitelio bucal.
 Realizar los siguientes procedimientos:

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a) Observaciónmicroscópica de células eucariotas (epiteliode la mucosa bucal):
- Coloque una gota de agua en el centro de una lámina portaobjetos limpia.
- Por un extremo sin punta de un mondadientes raspe suavemente el lado interior
de una mejilla para obtener unas cuantas células epiteliales, en el extremo del
mondadientes se pegarán varias células aunque crea que sólo hay una gota de
saliva.
- Frote suavemente el extremo del mondadientes con las células en la gota de agua
que colocó en la lámina portaobjetos.
- Coloque el cubreobjetos sin formar burbujas.
- Tire el mondadientes al basurero.
* Observación sin tinción:
Enfoque la lámina con el objetivo de menor aumento. Las células se verán
transparentes y como gránulos agrupados. Necesitará cerrar un poco el diafragma
del microscopio para mejorar el contraste y observar las células con mayor nitidez.
Busque un par de células que se encuentren aisladas. Cambie el lente objetivo de
mayor aumento. Use el ajuste fino para enfocar una sola célula. Grafique lo
observado.
* Observación con tinción:
Agregar un colorante permitirá observar con mejor contraste las células que se
observan dificultosamente casi transparentes.
Retire la lámina portaobjetos del microscopio y colóquela sobre un pedazo de papel
toalla. Coloque una gota de azul de metileno por un extremo del cubreobjetos. Por
el lado extremo coloque un pequeño trozo de papel toalla (puede sostenerlo con
una pinza) para que por capilaridad ayude a ingresar al colorante por debajo el
cubreobjetos. Tenga cuidado de no mancharsecon el colorante. Observelas células
teñidas con los objetivos secos de menor y mayor aumento e identifique núcleo,
citoplasma y membrana celular.
b) Observación microscópica de células procariotas (bacterias de sarro dental):
* Recolecciónde la muestra: Con mucho cuidado y conayuda de un mondadientes
o un explorador bucal extraer sarro dentario preferentemente de un diente premolar.
* Frotis o extensión de la muestra: Colocar la muestra en una lámina portaojetos
y extender la muestra de la forma más delgada posible evitando si se usa
mondadientes de no presionar mucho para no dejar rastros de la madera. Tire el
mondadientes al basurero o desinfecte el explorador dental.
* Fijación de la muestra: Con cuidado pasar el portaobjetos con la muestra varias
veces cerca a la llama del mechero, sin permitir que entre en contacto, hasta que se
seque.

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* Tinción: Añadir una gota de azul de metileno y esperar 02 minutos. Lavar la
muestra con un chorro suave de agua. Colocar sobre la muestra el cubreobjetos y
secar las zonas libres con agua.
* Observación microscópica de la muestra: Colocar primero el objetivo de 40x,
ubicar una zona no muy densa con ayuda del tornillo de arrastre. Colocar sobre la
muestra la zona intermedia de los objetivos de 40X y 100X y colocar sobre la fuente
de luz de la imagen seleccionada una gota de aceite de inmersión y observar con el
objetivo de 100x según las indicaciones que se dio en la parte teórica.
4.4. REGISTROS
Aum ento
del objetivo
Aumento
del
ocular
FOTO DE LA MUCOSA BUCAL FOTOS DEL SARRO DENTAL
4X
10X
40X
100X
Descripción
de la
m uestra al
m ayor
aum ento

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5. REFLEXIÓN
1. ¿Por qué debe utilizarse primero el objetivo de menor aumento?
2. ¿Cuál es la forma más adecuada de utilizar el revólver para observar las
muestras?
3. ¿En qué casos debe fijarse una muestra para observarla
microscópicamente?
4. ¿Cuál es la razón de utilizar colorantes para la observación
microscópica?
5. ¿En qué caso se utiliza el objetivo de inmersión y cuál es el
procedimiento correcto?
6. ¿Cuáles son las diferencias en forma, tamaño y partes entre la célula
procariota y la eucariota que se han observado?
6. APLICACIÓN
6.1. Escriban 5 tipos de colorantes que se utilizan en microscopíay expliquen en qué
casos.
6.2. Si tuvieras que observar células sanguíneas (glóbulos rojos y blancos). ¿Qué
procedimientos seguirías y cómo crees que las diferenciarías?
6.3. Elabore un cuadro de diferencias entre una célula eucariota y procariota.
7. REFERENCIAS
Alberts , B. (2004) Biología Molecular de la Célula. 4 ª edición, Ed. Omega. w w w .iesizpisuabelmonte.es
Asociación Universidad Privada San Juan Bautista Facultad de Ciencias de la Salud Escuela profesional de medicina
humana Semestre (2013) Guía de práctica de Biología Celular y Molecular
De la Cruz Lazo, Jessie (2011) Guía de Prácticas: Biología Celular y Molecular. Universidad Privada de Huancayo Franklin
Roosevelt.
Franco Navia, José (2010). Guía de Prácticas. Facultad De Ciencias De La Salud Carrera Profesional de Estomatología
Universidad Andina de Cusco. Recuperado el 03 de abril del 2014 desde: w w w .http://biologiageneralestomatologia