Práctica de Microscopía desarrollada en la Fac. de Ciencias Químicas en Ocozocoautla, Chiapas, bajo la asignatura de Biología Celular

1. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS
Facultad de Ciencias Químicas Ocozocoautla
Dra. Ana Olivia Cañas Urbina
Laboratorio de Biología Celular
ALVAREZ OCAÑA JOHNNY A.
DOMÍNGUEZ MUÑOZ DEYANIRA A.
GÓMEZ CASTELLANOS DANIELA GPE.
MALDONADO GALVEZ ALEJANDRA
2 SEMESTRE.
PRÁCTICA 3.- MICROSCOPÍA
Ocozocoautla De Espinosa, Chiapas a 16 de septiembre de 2015

2. Fig. 1 Poder de resolución de un microscopio.
Fig. 2 Partes que componen un microscopio
ANTECEDENTES.
“El microscopio, este término designa, en sentido amplio, a todo instrumento
utilizado para amplificar la imagen de objetos que, por su tamaño, no son
observables a simple vista”.
El descubrimiento del microscopio compuesto tuvo un precedente atribuido a
Galileo (1564-1642).
El verdadero impulsor de la Microscopía fue, sin duda, el holandés Anton Van
Leeuwenhoek, (1632-1723). Construyó microscopios simples, con lentes muy
convexas que él mismo pulía y con los cuales realizó observaciones muy diversas:
estudió la composición de la sangre, fue el primero en observar y dibujar los
protozoos, descubrió las bacterias, etc. Sus trabajos fueron publicados por la Real
Sociedad de Londres (1683).
Hoy día, hay unanimidad en considerar a los holandeses Hans y Zacarías Janssen,
padre e hijo, como constructores del primer microscopio compuesto en 1590.
Desde entonces y hasta nuestros días, el microscopio compuesto no ha cesado de
perfeccionarse, incorporándole mejoras, revolver porta objetivos, visión binocular,
iluminación halógena de gran rendimiento, filtros polarizadores, equipo de contraste
de fase, microscopio de contraste interferencial, microscopio de luz ultravioleta, etc.
Pese a todo, el microscopio óptico presenta una serie de limitaciones que le impone
la naturaleza de la propia LUZ. Por encima de los 1500-2000 aumentos, las
aberraciones que origina la luz impiden hacer observaciones con nitidez. Es por ello
que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones en lugar de
rayos luminosos y potentes electroimanes, en lugar de lentes. Con ello nació el
microscopio electrónico. (Breve historia del microscopio, 2009).

3. OBJETIVO.-Identificar las partes y sistemas que componen al microscopio, así
como el montaje y enfoque de distintas muestras problema.
MATRIALES.
Azul de metileno
Verde malaquita
5 porta-objetos
Reactivos de Gram (cristal
violeta, lugol, alcohol
cetona, safranina).
Microscopio
PREMIERE®
KOH Aceite de
inmersión
Reactivos de Wright (azul
de metileno-eosina y sol.
Buffer)
METODOLOGÍA.
1
•Se acudió al laboratorio de la Faculta de Ciencias Químicas, con
el material, el conocimiento de lo que se realizó más el uso
adecuado de la bata.
2
•Para la realización de la práctica de microscopía, estaban ya
preparadas muestrasqueseencontraban teñidas. (tinciónes
simples y diferenciales)
3
•Cada una de las muestras secolocaron en la platina del
microscopio y con ayuda de los tornillos macro y micrométrico
se trató de enfocar un campo, comenzando por el objetivo 10x.
4
•El procedimiento de enfoque serealizó en cada una de las
muestras:a)tinción simple, b)tinción diferencial, c)tinción simple,
d)tinción diferencial
5
•Al concluir éstas muestras, fueopcionalel enfoquey análisis de
una muestra teñida bajo la técnica de Wright
6
•Finalmente se apagó el microscopio utilizado y se procedió a
limpiar el área de trabajo
MICROSCOPÍA
(PRÁCTICA lll)

4. RESULTADOS.
Antes de observar el contenido de cada tinción, cada integrante tomó el
microscopio (microscopio PREMIERE ®) y enfocó. Esto para familiarizarse con el
funcionamiento de las partes del microscopio.
TINCIÓN
SIMPLE
OBSERVACIONES
HIDROXIDO
DE
POTASIO
(KOH)
La tinción del KOH es simple ya que solo se usa un colorante.
Esta fue la primera tinción que se observó.
Después de encontrar el campo observación, se enfocó. Ahí se logró
observar ciertas esferas llamadas esporas y algunos objetos
alargados llamados hifas
AZUL DE
METILENO
El azul de metileno es una tinción simple ya que solo se usa un
colorante.
En esta tinción se pudo observar la presencia de una bacteria.
TINCIÓN
DIFERENCIAL
OBSEVACIONES
VERDE DE
MALAQUITA
La tinción de verde de malaquita es una tinción diferencial ya que
no se utiliza solo un colorante; con el verde de malaquita se
colorean las esporas de verde.
DE GRAM
Es una tinción diferencial ya que no solo se utiliza un colorante.
Esta tinción es comúnmente utilizada para la identificación gram
positivas o negativas, según el tipo de coloración que adopte. La
que se observó tenía un color púrpura o violeta (gram positiva)
TINCIÓN
EXTRA
OBSERVACIONES
TINCIÓN DE
WRIGHT
La tinción de Wright es una tinción diferencial. En ésta tinción se
observaron células que parecían segmentadas que no
comprendíamos que eran.
Para reafirmar que cada integrante comprendió el uso de las partes del
microscopio, se decidió enfocar un cabello. Sí se logró enfocarlo y por lo tanto se
afirma que los integrantes comprendieron y aprendieron a manejar el microscopio.

5. DISCUSIÓNDE RESULTADOS.
En la práctica de microscopía, existieron ciertos inconvenientes en el momento de
observar las muestras. En la mayoría de las muestras hubo dificultades a la hora de
enfocar con los objetivos, probablemente por falta de práctica y/o experiencia.
En una muestra que fue la de azul de KOH, se debía observar hongos. Fue difícil
poder observar las hifas de los hongos, porque se dejó secar la muestra, debido a
que tardamos demasiado tiempo enfocando. Y seguido de la falta de experiencia.
La otra muestra que dio problemas para la observación fue la de Gram en donde se
necesitó de colocar el aceite de inmersión, se buscó el campo con el objetivo de 4X
pero en el momento de cambiar el objetivo al 100X se perdía el campo y por lo tanto
no se lograba enfocar y poder observar con claridad la muestra.
Además creemos que los problemas también fueron causados por el tipo de
microscopio, ya que el microscopio utilizado fue de una marca de menor calidad en
comparación con los Nikon: Premiere en este caso. Al ser de menor calidad se
refiere a que las lentes de este microscopio son menos “pulidas” que las de la otra
marca, por lo tanto con aquellas lentes se obtiene una mejor resolución.
Otro inconveniente que dificultó la observación de las muestras, fue que
probablemente el microscopio utilizado, había estado en demasiado uso y sin las
medidas necesarias para el mantenimiento, esto deriva que se observó en todas las
muestras una “raya” así podría definirse, que se mantenía fija en todos los campos
de observación.
CONCLUSIÓN.
En conclusión, a partir de la identificación de partes y del uso de microscopio, con
defectos que se tuvieron, si se pudo conocer cada parte del microscopio, las
funciones que tiene cada una de sus partes y a pesar de todo se manipuló bien al
momento de enfocar, pero eso sí, totalmente de acuerdo a que hace falta practicar
más.

6. CUSTIONARIO.
Defina longitud de onda, espectro visible, resolución y apertura
numérica
>la longitud de onda es la distancia existente entre dos crestas o valles
consecutivos.
>es el espectro de radiación electromagnética que es visible para el ojo humano.
>indica la cantidad de detalle que puede observase de una imagen.
>medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar los rayos refractados
por las estructuras finas de las cuales está constituido el objeto que se observa.
¿Cuál es la importancia del uso del condensador?
Componente óptico que tiene como función principal concentrar y regular los rayos
luminosos que provienen de la fuente luminosa.
¿Qué diferencia hay entre el ojo humano, microscopio óptico y
microscopio electrónico?
El ojo humano solo puede observar hasta
0.1mm (100 µm), la mayoría de las células
son mucho menores y necesitan todo el
poder de la resolución del microscopio
óptico (0.2µm) a diferencia del microscopio
electrónico que va de 0.4 a 200nm.(Fig. 3.)
Fig. 3 Gráfico que muestra las distintas capacidades
de resolución.

7. ¿Para qué se emplea el microscopio de campo oscuro, el microscopio
de contraste de fases y el microscopio de fluorescencia? ¿Qué es
microscopia LED?
>El Microscopio de campo oscuro se emplea para aprovechar el conjunto de rayos
luminosos oblicuos que inicialmente no entran a la lente frontal del objetivo,
observándose el campo microscópico totalmente oscuro. Para que esto ocurra se
requiere en primer lugar que la apertura numérica del condensador sea mayor que
la apertura numérica del objetivo.
Cuando estos rayos oblicuos encuentran en su recorrido, alguna partícula, son
desviados hacia la lente frontal del objetivo y la imagen de la partícula se observa
brillante en medio de un fondo oscuro.
>El microscopio de contraste de fases es el microscopio de fotones más utilizado
para observar objetos o estructuras transparentes sin teñir, facilita la observación
de células vivas para distinguir y analizar sus componentes morfológicos y ciertas
funciones que ellas pueden desarrollar (fagocitosis, mitosis, movimientos ciliares o
flagelares, etc.)
>El microscopio de fluorescencia se emplea para demostrar una serie de
componentes celulares o tisulares pues al unirse de manera específica a los
fluorocromos (colorantes artificiales que emiten fluorescencias cuando son
excitadas), resplandecen ofreciendo imágenes de colores diferentes, generalmente
de las longitudes de ondas azules, verdes, amarillas, naranjas o rojas.
>la microscopia led es aquella que ofrece una iluminación uniforme, de alto
contraste, muy difusa, o iluminación casi sin sombra
Explique qué son tinciones simples y qué son tinciones diferenciales y
dé 2 ejemplos de cada una de ellas
>las tinciones simples son aquellas que se
basa en la afinidad del colorante por los
componentes celulares. La tinción simple se
utiliza para destacar el microorganismo
completo para que se vean las formas y las
estructuras celulares básicas. (Fig. 4.) En las
tinciones simples se usa un único reactivo, que
preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da
color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee
componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan
solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante
y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la
Fig4. Bacillusmegaterium. Tinción
simple concristal violeta.

8. observación de la célula completa. Se fija el espécimen, se añade el colorante y se
deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la
preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia
química utilizada para intensificar la coloración), hay que añadirlo justo antes del
colorante.
Se utiliza un solo colorante
(Básicos). - Azul de metileno - Safranina - Cristal violeta
>las tinciones diferenciales son aquellas que se utilizan para distinguir entre tipos
de microorganismos. Se basan en el uso de dos colorantes. Se realiza una tinción
primaria, con la misma técnica de la tinción simple y posteriormente una tinción de
contraste para teñir las células que no se hayan teñido previamente.
Procedimiento que se utiliza para diferenciar organismos en base a sus distintas
características tinción. Reaccionan de manera diferente entre las distintas clases
de bacterias.
¿Por qué existen objetivos con diferentes aumentos? ¿Le sirvieron en
la presente práctica? Explique sus respuestas ¿Qué dificultades se
presentarían si se iniciara un enfoque de muestra con la lente de mayor
aumento? ¿Porqué debe emplearse aceite de inmersiónconel objetivo
de 100X?
Porque de esa forma podemos ver el objeto en diferentes aumentos, los objetivos
establecen la calidad de la imagen y están constituidos por un juego de lentes. Estos
aumentos son en 10x, 40x y 100x, en este último es necesario utilizar aceite de
inmersión, esto es porque los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia
focal muy pequeña y además la primera lente del objetivo es de pequeño diámetro.
El aceite de inmersión no incrementa el aumento de los lentes, pero mejora la
resolución y la nitidez de la imagen producida por dicho objetivo. Cuando la luz pasa
a través de un material a otro, por ejemplo del vidrio al aire, la luz se refracta o
distorsiona.
Fig 5. Tinción de Ziehl Neelsen Fig. 6 Tinción de Gram

9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Breve historia del microscopio. (2009). Recuperado el 03 de septiembre de 2015, de claicarubio-
quil.jimdo.com/app/download/.../Microscopio_Manual.pdf?t...
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