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1. FACULTAD DE ZOOTECNIA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIA ANIMAL
COLORACIONES MICROSCOPICASCOLORACIONES MICROSCOPICAS
CURSO : BIOLOGIA GENERAL
DOCENTE : CHUQUILIN BUSTAMANTE, Edilberto.
ALUMNOS AREVALO GARCIA, Máx.
AREVALO DIAS, Diana del C.
ALDAVA PARDAVE, Uriel.
AQUINO VARA, Bananin.
BARRIOS SANTOS, Karen.
ALANIA GARCIA, Mishella.
CACHIQUE PUJAI, Alva.
BALDEON VALLES, Antonio.
BUSTILLOS BENANCIO, Romer A.
CANCHANYA LOAYSA, Carlos.
ASCENCIO MALPARTIDA, Gerson.
17 / 07 / 06
I. INTRODUCCION

2. Todas las actividades de la célula, tanto a nivel molecular como a nivel superior
están controladas y determinadas directa o indirectamente por una sola clase
de sustancias (ADN). Estas moléculas maestras son, por naturaleza, las
responsables de la transferencia e información de una generación de células a
otra (Herencia).
El tamaño de las células es muy variable algunas son grandes otras pequeñas,
el color que poseen y el contraste muchas veces impiden observarlas bien por
el microscopio óptico por lo cual el medio más simple de aumentar su contraste
es utilizando colorantes tiñendo así su morfología, para lo cual se emplean dos
métodos:
Preparados en fresco: para observar células vivas. En este método no se utiliza
ningún colorante. Las células que se observan se encuentran en su propio
medio u otro similar y el índice de refracción de estas es muy similar al medio
que lo rodea, al no existir un contraste suficiente que los haga claramente
visibles.
Preparados en seco: para observar células muertas y teñidas. Para la correcta
observación del material celular, mediante este método, requiere una serie de
pasos previos como extensión, fijación y tinción de este material. Este método
permite observar y diferenciar claramente tanto varios tipos morfológicos de
célula; los siguientes objetivos son:
 Observar correctamente un preparado en fresco y en seco.
 Conocer métodos de observación de las células y técnicas de coloración
más comunes.
 Reconocer los microorganismos existentes en el agua estancada
 Conocer las distintas formas y tipos de células que componen en los
tejidos animales.

3. II. REVISION DE LITERATURA
2.1. CELULA
La célula es la unidad más pequeña de la materia viva, capaz de llevar a cabo
todas las actividades necesarias para el mantenimiento de una vida. Tiene
todos los componentes físicos y químicos necesario para su propio
mantenimiento, crecimiento y división, cuando cuentan con los nutrientes
necesarios y un medio adecuado. Ningún componente celular es capaz de
sobrevivir fuera de la célula. Según ville (1992).
2.1.1. Formas celulares
La forma de una célula se relaciona con la función y que está realiza, algunas
células como la ameba y los leucocitos pueden hacer variar su forma durante
su trayectoria, los espermatozoides tienen una cola larga, en forma de látigo
que ayuda en la locomoción, y las células nerviosas poseen extremos delgados
y largos que les permiten transmitir mensajes a través de grandes distancias,
otras células como las epiteliales asumen una forma casi rectangular y se unen
a otras como si fuesen ladrillos, hasta formar estructuras laminadas, célula
circulares, etc. (VILLE, 1992).
Los organismos pueden clasificarse en dos grupos fundamentalmente
diferentes, según la estructura y complejidad de sus células.
2.2. Células procariotas
Son aquellos que carecen de núcleo y generalmente son más pequeñas que
los eucarióticas, el ADN de las células procarióticas esta confinado a una o
más regiones nucleares, que a veces se le denominan nucleoides, los
nucleoides no están limitados por una membrana independiente
2.3. Células eucariotas
Son aquellos que contienen una estructura llamado núcleo, que se encuentran
limitado por una membrana nuclear y varios organelos membranosos
complejos, con las mitocondrias.

4. 2.3.1 Estructura celular de las células eucariota.
Estructura celular Función
Célula
vegetal
Célula
animal
Membrana celular
Contiene al citoplasma, regula
el paso de materiales hacia
adentro y fuera de la célula,
ayuda a mantener la forma
celular, comunica a la Célula
con otras.
Presente Presente
Pared celular
Protección contra los agentes
mecanismos, evita la dilatación
excesiva provocada por la
presión interna del citoplasma.
Presente:
Contiene
celulosa
Ausente
Lisosomas
Contiene enzimas que
degradan material ingerido, las
secreciones y desperdicios
celulares
Generalment
e ausente
Suelen estar
presentes
Ribosomas Síntesis de polipéptidos Presente Presente
Aparato de Golgi
Modifica, empaca y distribuye
proteínas a vacuolas y otras
organelos
Presente Presente
Vacuolas
Transporta y almacena
material ingerido, desperdicios
y agua.
Generalment
e presente
Pequeñas o
ausente
Retículo
endoplasma tico
Sitio de síntesis de lípidos y de
proteínas de membrana
Presente Presente
Plastidios
La clorofila captura energía
luminosa, se producen ATP y
otros compuestos energéticos
que después se utilizan en la
conversión de CO en glucosa
Presente Presente
Cromosomas
Contiene genes (unidades de
información hereditaria que
gobiernan la estructura y
actividad celular)
Formados por
ADN y
proteínas
lineales
Formados
por ADN y
proteínas
lineales
Fuente: (ville, 1992)
2.4. TEJIDO

5. Es un conjunto de células especializadas de forma similar entre si, y de
sustancia intercelular, que se asocian para realizar una función especifica o un
grupo de funciones (VILLE, 1992).
2.5. Tejido animal
Un tejido esta formado por varias células, estrechamente asociadas entre si, y
se clasificas en:
2.5.1. Tejido epitelial
Está formado por células acopladas, formando una capa o láminas continúas,
que cubren la superficie o algunas cavidades del cuerpo. Otra superficie de
esta capa se une al tejido subyacente, mediante una membrana basal,
compuesta por fibras muy delgadas, de un material formando por polisacáridos
producidos por las células epiteliales. Además de la capa externa de la piel, las
membranas de los sistemas digestivas y respiratorias, y tubulos renales, son
ejemplo de tejido epitelial.
Las funciones de los tejidos epiteliales son de protección, absorción, secreción
y sensación (VILLE, 1992).
Características
 Sus células están íntimamente unidas por uniones celulares.
 Sus células adoptan formas geométricas.
 Dichas células se apoyan sobre la membrana basal.
 Presentan abundantes terminaciones nerviosas.
 El tiempo de vida de las células epiteliales es limitada de modo que hay
procesos de renovación celular constante.
2.5.2. Tejido conectivo
La principal función de los tejidos conectivos es la unión de otras tejidos, pues
también dan soporte al cuerpo, sus estructuras y protegen a los órganos
subyacentes (VILLE, 1992).

6. 2.5.3. Tejido cartilaginoso.
El esqueleto de soporte de los vertebrados consta de cartílagos. El cartílago
esta presente en el esqueleto de las fases embrionarias de todos los
vertebrados, aunque en adulto es reemplazado por huesos (excepto en el caso
de tiburones y rayas).
La estructura de sostén del pabellón de la oreja, los anillos de soporte de las
paredes de vías respiratorias y la punta de la nariz son ejemplo claros de
estructura cartilaginosa en el ser humano (VILLE, 1992).
2.5.4. Tejido muscular estriado
Son tejidos con células especializadas en la contracción, sus células se
denomina fibras musculares o miocitos. Este tejido es responsable del
movimiento del cuerpo.
Las fibras del músculo estriado pueden contraerse rápidamente pero no
pueden permanecer contraídas. Una fibra de músculo estriado debe relajarse y
descansar momentáneamente antes contraerse de nuevo las fibras del
músculo estriado por lo general se encuentra bajo control voluntario (VILLE,
1992).
2.5.5. Tejido nervioso
El tejido nervioso está compuesto por neuronas, células especializadas en la
conducción de impulsos electroquímicos, y células líales, que dan soporte y
nutrición a las neuronas. Algunas neuronas reciben señales del medio interno y
externo y la transmisión a la medula espinal y al cerebro, otras prolongaciones
de las células nerviosas procesos y almacenan información. Esta es la base
celular en los complejos funciones de conciencia, memoria, pensamiento y
movimiento dirigido (VILLE, 1992).
El tamaño y forma de las neuronas es variable, pero generalmente cada una
posee un cuerpo celular, que contiene al núcleo del cual se proyectan dos
prolongaciones con forma de pelo.

7. Las dendritas son fibras especializadas para recibir impulsos de los estímulos
ambientales o de otras células (VILLE, 1992).
El axón sencillo se especializa en la conducción de impulsos fuera del cuerpo
de la célula. Los axones generalmente son largos y lisos, pero en ocasiones
pueden ramificarse (VILLE, 1992).
2.5.6. Tejido sanguíneo
La sangre, que el líquido que corre por las arterias y venas, esta formada por
glóbulos rojos, blancos y plaquetas, todos suspendidos en el plasma, que es la
parte a otra del cuerpo. Algunos de esas sustancias se disuelven simplemente
en el plasma, mientras que otras van fijas a proteínas como albúminas.
Casi todos los biólogos clasificas a la sangre entre los tejidos conectivos; sin
embargo, otros consideran que la sangre es un tipo especial de tejido ya que
las células del tejido conectivo secretan su matriz circundante y las células de
la sangre no secretan el plasma (VILLE, 1992).
2.6 Tejido vegetal
Clasifican a los tejidos vegetales, algunas células parecen en contraste en
situación intermedia entre los tipos celulares, asimismo, hay células que
cambian de aspecto durante su vida.
No obstante, en general los tejidos pueden ser asignados a una de los
categorías principales: tejidos meristemáticos formados por células inmaduros
en proceso de división celular y los tejidos permanentes, integrados por células
maduras diferenciadas (VILLE, 1992).

8. 2.6.1. Clasificación de los tejidos vegetales
Los tejidos vegetales se clasifican en los siguientes tipos:
Meristemos.- Constituidos por células proliferantes que causan el crecimiento
y desarrollo de la planta.
Parénquima.- Formando por células más diferencias que realizan funciones
fotosintéticos o de almacén de sustancias nutritivas, como agua almidón, etc.
De sostén.- Tejidos de células especializadas, con paredes muy engrosadas
para cumplir esa misión lo constituyen la colénquima y esclerenquima. También
contribuyen la sostén de las plantas. Los vasos, sobre todos los leñosos.
Vasculares o conductores.- Constituyen el sistema circulatorio de la planta.
Son el leño o xilema y el liber o floema.
Protectoras.- Protegen de la perdida de agua y de la acción de
agentes externos son la epidermis y la peri dermis.
Secretoras.- Hay tejidos secretores formando parte de la epidermis, como
las glándulas, pelos, o coloraciones
Son compuestos, orgánicos y otros internos, como las células que forman los
conductos resiníferos que contienen radicales cromóforos esto es que
producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-
NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-
NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad
cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con
la fibra o tejido. (Ville, 1988).
3.1.COLORACIONES
Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que
producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-
NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-
NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad

9. cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con
la fibra o tejido. (Ville, 1988).
3.1.1. Coloración Bacteriana
Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro
líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y
delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son
fijados por sustancias químicas o por el calor moderado. (Ville, 1988).
Tinciones: Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (No vivos);
en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de
microorganismos. (Ville, 1988).
3.2 .TIPOS DE COLORANTES
3.2.1 Colorantes básicos
 Verde de metilo (verde).
 Azul de metileno (azul).
 Pironina G (rojo)
 Azul de toluidina (azul)
 Reaccionan con los grupos de aniónicos de los componentes estúrales
que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (DNA, RNA) los
grupos sulfato de los glucosaminoglucanos y los grupos carboxilo de las
proteínas. (Sherman, 1994)
 Los tres grupos se ionizan y quedan disponibles para la reacción con el
colorante básico por medio de uniones electrostáticas; a un pH
ligeramente ácido o neutro. (Sherman, 1994)
 Hematoxilina no es colorante básico en sentido estricto. (Sherman,
1994)
 Hematoxilina se presta para aquellos procedimientos tintoriales no los
que a ella le sigue la eosina u otro colorante ácidos. (Sherman, 1994)

10.  Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencias en
donde el colorante básico es seguido por un ácido por que la anilina
básica tiene a disociarse del tejido durante los lavados posteriores en
soluciones acuosas. (Sherman, 1994)
3.2.2 Colorantes Ácidos
 Fucsina ácida (rojo)
 Azul de anilina (azul)
 Eosina (rojo)
 Naranja G (naranja)
 Se unen primariamente a los componentes estúrales por medio de
enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los
colorantes básicos. (Otto, 1993).
 Las anilinas ácidas reaccionan con grupos cationicos, como son los
grupos Aminos ionizados de las proteínas. Aunque el enlace
electrostático constituye el principal factor en la unión primaria del
colorante con el tejido. (Otto, 1993).
 En la técnica de MALLORY se usan tres colorantes ácidos, azul de
anilina, fucsina ácida, y naranja G. Estos tiñen con selectividad el
colágeno, el citoplasma en general y los eritrocitos, respectivamente.
(Otto, 1993).
 La fucsina ácida también tiñe los núcleos. (Otto, 1993).
 En otras técnicas con anilinas ácidas múltiples se emplea la
hematoxilina para teñir los núcleos primero y luego se aplican los
colorantes ácidos con el fin de teñir selectivamente el citoplasma y las
fibras extracelulares. (Otto, 1993).

11.  Los colorantes básicos también pueden emplearse combinados, pero
estas combinaciones no son de uso tan extendido como las de los
colorantes ácidos.
3.3. TINCION GRAM
Es un extendido bacteriano fijado al calor sobre un portaobjetos se trata con el
colorante básico, violeta de cristal. Todos los organismos toman este colorante,
luego se cubre el extendido con la solución yodada de gram. Después de un
enjuague con agua y una decoloración con acetona, se lava el preparado
minuciosamente en agua y se contratiñe con un colorante rojo, generalmente
saframina. El preparado teñido se enjuaga entonces con agua, se seca y se
examina bajo el microscopio.
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos, según
lo implementara a comienzo del siglo XVIII el bacteriólogo danés Cristian
Gram.
a). Microorganismos Gram.-positivos
Estos microorganismos se tiñen de color azul o violeta intensa
b). Microorganismos Gram.-negativos
Estos microorganismos pierden el cristal violeta y se vuelven a teñir con la
saframina, apareciendo el color rojo.
3.4. NUEVO COLORANTE DE CÉLULAS
La técnica de tinción celular o coloración de las células facilita el estudio de la
composición y estructura microscópica de tejidos orgánicos. El proceso
consiste en teñir una muestra del tejido a observar y cuando éste tiene contacto
con el colorante o pigmento, los núcleos y el citoplasma de las células resaltan,

12. con lo que se simplifica la localización de cualquier tipo de daño. (Sanboh,
1996).
En la estructura celular de los seres vivos es posible observar y detectar la
existencia de anomalías o patologías, que generalmente se relacionan con
enfermedades. Este método ha permitido a los científicos localizar
padecimientos múltiples
III. MATERIALES Y METEDOS.
3.3 Lugar y fecha de ejecución de la práctica.
Esta practica fue realizada el 19 junio y el 26de julio del 2004, en el laboratorio
de la UNAS, que se encuentra ubicado en el distrito de Rupa Rupa, provincia
de Leoncio Prado, Departamento de Huanuco, con una temperatura promedio
de 24 C, con una altitud de 660m.s.n.m.; con una precipitación anual de
3100mm, con una humedad relativa aproximada de 85% en promedio.
3.1. Materiales.
 Mucosa labial.
 Laminas de porta y cubre objetos.
 Eosina.
 Fucsina.
 Cristal violeta.
 Aceite de cedro.
 Lugol.
 Mechero.
 Agua destilada.
 Azul de metileno.
 Microscopio compuesto,
 Sangre humana.
 Agua estancada.

13.  Lamina porta y cubre objetos.
 Gotero.
 Bisturí.
 2 laminas de frotis sanguineo.
3.2Metodología
La práctica fue visual-experimental, se empezó poniendo las muestras en los
portaobjetos, luego se tiñeron dichas muestras para ser observadas en el
microscopio.
.
3.4 Procedimiento.
a). Coloración simple.-
Muestra de mucosa labial
 En este tipo de preparado se uso como muestra la mucosa labial, para
observar en el microscopio su morfología, y para ello se siguió los
siguientes pasos.
 Se coloco la mucosa labial en una lámina porta objeto, luego con otra
lámina se hizo un frotis, para extenderla sobre la primera lamina.
 Una vez extendida se hizo una fijación, flameándole sobre el fuego de
manera vaivén, para que la fijación sea uniforme y rápida para matar a
las células.
 Después de la fijación pasamos a la coloración de la muestra, en
nuestra mesa usamos el colorante azul de metileno; también se puede
usar otros colorantes como son: Eosina, Fucsina, Cristal violeta, Verde
de metileno, etc.
 Después de una pequeña tinción se paso al lavado para quitar el exceso
de colorante y para que se visualice, mejor en el microscopio.
 Luego se observo al microscopio en 10X y 40X, dependiendo de la muestra,
para una mejor visualización de la mucosa labial..
 Esquematizar resultados

14. Preparado de la cebolla
 Hacer un raspado con bisturí y sacar la catafila de la cebolla de
una a quince centímetros
 Toma una pequeña porción de muestra y colocarla en el centro de
un portaobjeto limpio
 Extender una muestra mediante movimiento concéntricos hasta
una capa fina y uniforme
 Después echar una gota de alcohol con un gotero teñir la
extensión fijada cubriéndola con azul metileno
 Después poner el cubreobjeto y ver en el microscopio 10x y 40x
Muestra de semen
 Extraer con el gotero una gota de semen
 Colocar la gota del semen en el portaobjeto
 Hacer un frotis y luego agregar solución de salina para que este
emulsione
 Colocar el cubreobjeto y observar a 10x y 40x
6.4. Tejido sanguíneo
 Se limpio el brazo de una persona con alcohol.
 Con una lancetilla se hizo una punción en el brazo, eliminándolo la
primera gota que salga.
 Luego se coloco la sangre en la lámina portaobjeto y se coloreo con azul
metileno
 Se lavo y se dejo secar a temperatura de ambiente
 Luego se hecho aceite de cedro y se le puso el cubreobjeto
 Colocar en la platina del microscopio una lámina con frotis sanguíneo
teñido (coloración Wright).
 Observar.
 Se observó que el tejido sanguíneo tenía pequeños círculos y alrededor
una coloración roja continua llamado plasma.
Muestra de agua estancada

15.  En este proceso se uso agua estancada o de charco para ello se siguió
los siguientes pasos:
 Se saco con un gotero una gota y se puso la muestra, en una lamina de
porta objeto.
 Luego se cubrió la muestra con una lamina de cubre objeto.
 Luego se llevo al microscopio para observar, de manera directa, se
observo a 10X y a 40X,
6.1. Observación de tejido nervioso
 Colocar la platina del microscopio una lámina montada con corte
Histológico de medula.
 Observar con el objetivo 40x.
 Se observó que la forma de la célula era estrellada, habían abundantes
células estrelladas.
6.3. Tejido muscular estriado
 Colocar en la platina del microscopio una lámina montada un corte
histológico de músculo estriado (lengua).
 Observar
 Se observó que la forma de las células eran rectangulares y
alargaciones en abundante.
 Se observó que las células estaban delimitadas por pequeños
espacios, por ende no estaban plegadas entre sí.
b) Coloración Doble.-
Se usa dos clases de colorantes (Coloración Gram.).
 Azul de metileno.
 Saframina (color rojo).
 Se usa la misma muestra y procedimiento que el anterior

16. IV. RESULTADOS
Glóbulos rojos
Células nerviosas
Glóbulos blancos

17. V. DISCUSIÓN
Según Ville (1988) y Otto (1993), nos mencionan de que para realizar el tipo de
coloración o preparado en fresco cumple con lo que se realizo en la practica;
también menciona que para el preparado en seco, también cumple con lo
realizado a la practica, solo con la inferencia de algunos colorantes
En la muestra de tejido sanguíneo, según la guía nos dice que debemos usar
aceite de inmersión para el objetivo de 10 x y 100 x. por lo tanto no se usó este
material ya que de ello nos habría permitido una mayor visualización.
Según Vázquez Urday (1992), existe una pequeña comparación de la mucosa
labial y de la laga vista y existe cierta relación, por lo tanto la práctica realizada
fue un éxito.
Las laminas montadas, teñidas están lista para la observación, pero nosotros
no lo hemos visualizado como era el proceso de realizar una lamina montada y
como se realiza en tejido y también no pudimos observar tejidos vegetales.
En la observación de células del Lycopersicum esculentum en mayor aumento
objetivo 40x no se pudo observar claramente los pigmentos carotenoides.
Las muestras puestas en diferentes microscopios de igual aumento no se pudo
observar la uniformidad de células presentes en un mismo material
(Lycopersocum esculentum).

18. VI. CONCLUSIONES
 Se pudo realizar los preparados en fresco y en seco, conforme a lo
establecido por la práctica.
 Se conoció las técnicas más comunes de coloración que son
coloración simple y compuesto.
 Se pudo observar los pigmentos carotenoides
 Se pudo observar la morfología que presenta la célula.
 Se realizo las muestras establecidas (Lycopersicum esculentum y
agua estancada) conforme lo establecido en la practica
 Se observó los diferentes tejidos animales vegetales
 Se observó el tejido muscular estriado con una claridad y se pudo
observar la forma de células que estaban ordenados.
VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
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875p.
 OTTO, J.Y.A. TOWLE. 1993. Biología Moderna. 11ª edic. Edit
McGraw – Hill, S.A. México. 621p.
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Water. Eur. J. Phys. 25. (2004) pp. 331-336.
 SHERMAN, I. Y V. SHERMAN. 1994. Biología. 3ra
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Graw-Hill, S.A. México. 704p.
 GERARD. J. Tortora. Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia
S.A. Zaragoza - España. 792p
 Botánica general I: Teoría y Práctica. Facultad de Recursos Naturales
renovables-UNAS. Tingo María.
 NASON, A. 1968. Biología. 1ra
Edición. Edit. Limusa S.A. México.
726p.
 VILLE, C. 1992. Biología. 2da
Edición. Edit. Interamericana. S.A.
México. 1404p.