Compuestos bioactivos en diferenciación, proliferación y muerte de células madre. José Alberto Carrodeguas Villar
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Ponencia presentada en el marco de las I Jornadas Científicas del Instituto de Investigación Sanitaria Aragón (8-9 noviembre, 2010. Zaragoza)
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Compuestos bioactivos en diferenciación, proliferación y muerte de células madre. José Alberto Carrodeguas Villar
- 1. Compuestos bioactivos en diferenciación, proliferación y muerte de células madre José Alberto Carrodeguas Villar http://bifi.es/ carrode@unizar.es
- 2. iPS
- 3. Patologías que se pueden tratar con células madre • Enfermedad de Parkinson • Diabetes tipo I • Artritis • Quemaduras • Enfermedades cardiovasculares • Cáncer • Daño en la médula espinal • Enfermedades de la retina
- 5. Problemas que puede presentar la terapia con células madre • Transmisión de virus • Enfermedades animales • Crecimiento incontrolado, formación de teratomas • Crecimiento no dirigido
- 9. Factores que determinan la diferenciación de células madre a tipos celulares concretos
- 10. Hipótesis En colecciones de compuestos químicos (quimiotecas) debe haber moléculas capaces de inducir diferenciación celular específica, muerte o proliferación en células madre
- 11. Ensayo Línea celular de células madre modificada genéticamente para expresar un gen reportero bajo el control de un promotor específico de un tipo celular. GFP: fluorescencia Luciferasa: luminiscencia
- 12. Línea celular • Células madre embrionarias de ratón modificadas genéticamente: AMPIGX-7 (CGR8) • Expresan GFP bajo el control de un promotor específico de cardiomiocitos • Emiten fluorescencia verde cuando se diferencian a cardiomiocitos
- 13. Preparación de cuerpos embrioides 1d EBs 2d EBs 3d EBs 4d EBs 500µm 500µm 500µm 500µm 5d EBs 6d EBs 7d EBs 10d EBs 500µm 500µm 500µm
- 19. DIFERENCIACIÓN CLONES METRIDIA LUCIFERASA 25000 20000 15000 2000 células/EB 500 células/EB 10000 5000 0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M14 CGR8 Medio Clones
- 20. 30000 25000 20000 C- Verapamil RLU 15000 Forskolin Ciclosporina A 10000 5000 0 CGR8 M1 M5 M6 M14
- 22. Ensayo XTT: proliferación celular (actividad mitocondrial) Línea celular: CGR8 Contracribado: MEFs Apoptosis: MEFs DKO Bax/Bak, caspasas, etc.
- 23. 100 120 140 160 180 200 20 40 60 80 0 G CP ro T u G p1 ro up G ro 2 u G p3 ro up G ro 4 u G p5 ro up G ro 6 u G p7 ro u G p8 ro G up ro u 9 G p1 ro u 0 G p1 ro u 1 G p1 ro u 2 G p1 ro u 3 G p1 ro u 4 G p1 ro u 5 G p1 ro u 6 G p1 ro u 7 G p1 ro u 8 G p1 ro u 9 G p2 ro u 0 G p2 ro u 1 G p2 ro u 2 G p2 ro u 3 G p2 ro u 4 G p2 ro u 5 G p2 ro u 6 G p2 ro u 7 Grupos de 4 compuestos/pocillo G p2 ro u 8 G p2 ro u 9 G p3 ro u 0 G p3 ro u 1 G p3 ro u 2 G p3 ro u 3 G p3 ro u 4 G p3 ro u 5 G p3 ro u 6 G p3 ro u 7 G p3 ro u 8 G p3 ro up 9 40
- 24. 100 120 140 160 180 200 20 40 60 80 0 G CP ro T u G p ro 1 u G p ro 2 up G ro 3 u G p ro 4 u G p ro 5 u G p ro 6 u G p ro 7 u G p ro 8 G up ro u 9 G p1 ro u 0 G p ro 1 1 u G p ro 1 2 u G p1 ro u 3 G p ro 1 4 u G p ro 1 5 u G p ro 1 6 u G p ro 1 7 u G p ro 1 8 u G p ro 1 9 u G p2 ro u 0 G p2 ro u 1 G p2 ro up 2 G ro 2 3 u 100 120 140 20 40 60 80 G p 0 ro 2 4 u G p ro 2 5 u G p2 ro u 6 G p ro 2 7 u G p Grupos de 4 compuestos/pocillo ro 2 8 up G ro 2 9 u G p ro 3 0 u G p3 ro u 1 G p3 ro u 2 G p3 ro u 3 G p CPT ro 3 4 up G ro 3 5 u G p ro 3 6 u G p ro 3 7 u G p ro 3 8 up G ro 3 9 up 40 26A 26B Compuestos químicos 26C 26D ESCs MEFs
- 25. 140 120 100 80 ESCs 60 MEFs 40 20 0 CPT 26D 199A 223A Compuestos Químicos
- 26. Co Co nt n tr ro o l D lD 100 120 140 160 M 20 40 60 80 M 0 SO SO 0,5 1,5 2,5 0 1 2 3 CP C T PT P4 P4 F2 F2 P4 P4 A3 A 3 P4 P4 E3 E3 P4 D P4 5 D P4 5 D 6 P4 D P4 6 H 8 P4 H P5 8 B2 P5 P5 B 2 C2 P5 P5 B3 C2 XTT BrdU ELISA P5 P5 B5 B 3 P5 P5 Compuestos Químicos C B 5 5 Compuestos Químicos P5 A6 P5 C5 P5 B6 P5 A 6 P5 C6 P5 P5 B 6 E7 P5 P5 C6 F Ba P 8 c k 5F P5 gr 8G E7 ou nd P5 F8 Bl P5 a nk FG 8 ESCs MEFs ESCs MEFs
- 27. Planes Viabilidad celular Muerte celular En marcha Efecto en diferenciación EB En marcha Mecanismos moleculares Proliferación celular En marcha Actividad mitocondrial Mecanismos moleculares Luciferasa. Colaboración con Agapios Sachinidis Diferenciación celular (Colonia) Mecanimos moleculares hES y iPS Ensayos muerte iPS. Colaboración con Xavier Doss (NY) Estudio en teratomas. Colaboración con Eduardo Ensayos en ratones Romanos.
- 28. Celia Conesa Verónica Tomey Javier Sancho Agapios Sachinidis. Universidad de Colonia Michael Xavier Doss. Masonic Medical Research Laboratory, NY Programa Aragonés de Medicina Regenerativa (PAMER)