1. CETis 62
PRACTICA No. 6
“IDENTIFICACION DE PROTEINAS”
EQUIPO No. 4
6 “E”
PROFESORA: I.B.Q. MARTA GABRIELA ACEVES MORALES
INTEGRANTES
Hilda Mayela Aran Adriano
Maria del Carmen Cuellar Cuevas
Maria Lisset Lona Cornejo
Uriel de Jesus Mendoza Perez
OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la
identificación por el reactivo BIURET.
2. Realizar las técnicas de reacciones coloreadas específicas (BIURET), reacción xantoproteica,
coagulación por calor, obtención de caseína de la leche.
INTRODUCCION:
Las proteínas son compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos unidos por enlaces
peptídicos que intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la
contracción muscular o la respuesta inmunológica.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las proteínas
plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos:
1.-fibrinógenos
2.-globulinas
3.-albuminas
Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a su solubilidad en soluciones
salinas, y se logra una separación simple o burda mediante precipitación salina de dichas
proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en muchas técnicas de
aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2 tipos de lograr esta etapa de
purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio sólido, ya sea con una solución saturada
neutra del mismo.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y
el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y
desencadenar reacciones metabólicas.
Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de las que solo un 2% se ha
descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo para construir y mantener las células,
aunque su descomposición química también proporciona energía, con un rendimiento de 4
kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono.
Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás hormonas, los
anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.
3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS
(BIURET)
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los
aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-
NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un
medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos
formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de
color depende de la concentración de proteínas.
MATERIAL
1 gradilla
pescado, espinaca, levadura,
Tubos de ensaye
Albúmina, grenetina y caseína
REACTIVOS
NaOH al 10%
Sulfato cúprico al 1% en gotero
PROCEDIMIENTO
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de un color rosa
o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
RESULTADOS
Observaciones
Es esta práctica nuestras observaciones
fueron que la mayoría de las proteínas
Solución
de
proteína
Gota en la que
aparece el color
(reacción)
Levadura
4 Gotas
Espinaca 10 Gotas
Pescado 5 Gotas
Caseína 2 Gotas
Grenetina 2 Gotas
Albumina 4 Gotas
4. reaccionaron fácilmente la única que tardó en reaccionar fue la espinaca ya que por su color
intenso no lográbamos distinguir la reacción finalmente nos dio un color como azul intenso,
mientras que las demás proteínas reaccionaron con 2a 5 gotas tomando todas un color violeta.
También observamos que el color que cada proteína tomo no se disolvía en toda la cantidad de
proteína si no que solo quedaba en la parte de arriba. Y así pudimos observar que en cuanto la
manera que reaccionaban las proteínas era muy parecida.
REACCION XANTOPROTEICA
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia
de proteínas solubles en una solución.
MATERIAL
Tubos de ensaye
Gradilla
Baño maría
REACTIVOS
Proteínas
NaOH concentrado (gotero)
HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él vire de color.
Observar y reportar resultados.
RESULTADOS
Solución
de
proteína
Gota en la que
aparece el
color
(reacción)
Levadura
3 Gotas
Espinaca 9 Gotas
Pescado 10 Gotas
Caseína 4 Gotas
Grenetina 5 Gotas
Albumina 1 Gotas
5. Observaciones
En esta práctica
observamos que
hubo diferentes
reacciones la primera fue cuando a cada proteína
le colocamos 1ml de HNO3 parecía que se había
separado comosi fuera sedimento pero este estaba
en la parte de arriba después que calentamos a
baño maría observamos definitivamente la
separación de las proteínas en la parte de arriba se
tomó un color un poco más fuerte y abajo un color
claro aunque un poco turbio. Al agregar las gotas de NaOH observamos que la proteínas
tardaron en reaccionar casi todas las proteínas cambiaron de color con más de 3 a 10 gotas la
única que reacciono fácilmente con una sola gota fue la albumina. En la grenetina parecía como
si tuviera aceite y en la levadura, caseína y albumina se formó un color amarillo claro y amarillo
intenso ,en cuanto a las otras dos del pescadoy la espinaca se tomó un color amarillo demasiado
claro aparte de que el sedimento que estaba arriba comenzó a esparcirse por toda la cantidad .
Y así observamos que las reacciones de las proteínas aunque eran diferentes las reacciones
coincidían un poco en cuanto la manera de reacción
COAGULACION POR CALOR
Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones
coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a
temperaturas superiores a los 70°C o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol,
etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por
los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su
estructura terciaria y cuaternaria.
MATERIAL
16 Tubos de ensaye
Gradilla
Baño maría
REACTIVOS
Acido acético al 1%
6. Acetona
Éter
Tetracoruro de carbono
Butanol
Proteínas
NaOH concentrado (gotero)
PROCEDIMIENTO
1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína
2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1%
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la
siguiente manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.
5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH concentrado, y agitar.
6. Observar y anotar diferencias.
RESULTADOS
PROTEINA ACETONA ETER BUTANOL TOLUENO
PESCADO Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
No se disolvió el
coagulo.
Se disolvió el
coagulo
LEVADURA Se disolvió el
coagulo
No se disolvió
el coagulo
Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
CASEINA(LECHE) NO se disolvió
el coagulo, pero
agregamos 3
gotas de NaOH
concentrado y
se disolvió.
Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
ALBUMINA No se disolvió el
coagulo
No se disolvió
el coagulo
No se disolvió el
coagulo
No se disolvió
el coagulo
ESPINACA Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
NO se disolvió
el coagulo, pero
agregamos 3
gotas de NaOH
concentrado y
se disolvió.
Se disolvió el
coagulo
7. GRENETINA Se disolvió el
coagulo
Se disolvió el
coagulo
NO se disolvió
el coagulo
Se disolvió el
coagulo
Observaciones:
En esta práctica observamos diferentes reacciones, al tiempo de poner cada una de las
proteínas en agua hirviendo, se produjo una coagulación en algunas de las proteínas,
siguiendo con el procedimiento le agregamos a cada tubo la solución que le correspondía,
agitando cada uno de los tubos notamos que el coagulo no se disolvió en algunas de las
proteínas, para esto tuvimos que agregarles tres gotas de NaOH concentrado algunas aun asi
no lograron disolver su coagulo.
OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
La caseína es una proteína de la leche del tipo fosfoproteína que se separa de la leche por
acidificación y forma una masa blanca.
MATERIAL
2 vasos de precipitados de 250ml
1 probeta de 100ml
1 embudo
2 papel filtro
REACTIVOS
Leche entera
HCl 0.2 N
Acetona
Éter
PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado
2. Agregar 100ml de agua destilada
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la proteína.
8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar y filtrar.
Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de acetona, y
filtrar.
8. 10. Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y
pesar el polvo 24 horas después.
RESULTADOS
Efectivamente nuestro resultado fue la obtención de la proteína de la
leche (caseína), no pudimos obtener el polvo ya que el tiempo no nos lo permitió, debido a que
se tenía que dejar reposar 24 horas para poder obtener este polvo.
Observaciones:
En esta práctica agregamos 100 ml de leche y 100 ml de agua destilada en un vaso de
precipitado, enseguida a este mismo le añadimos HCl 0.2N hasta que el pH de la leche fuera
menor a 5, pero se nos complico ya que el valor que necesitaba no era correcto pero
seguíamos agregando le HCl 0.2N para que nos diera el valor correcto pero no veíamos
resultamos, así que por ultimo le agregamos un poco de vinagre y así el pH de la leche fue
menor de 5. Seguimos con el procedimiento dado y en este no hubo ninguna complicación.
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las proteínas?
Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior
(secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero
estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su
estabilidad en disolución y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia
del fenómeno llamado desnaturalización y se dice entonces que la proteína se encuentra
desnaturalizada.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Porque al realizar la prueba de Biuret, esta origina un color violeta y es lo que significa que es
una proteína. En si determina la presencia del enlace peptídico --CONH2 unido a otro --CONH2.
4. Que coloración da la reacción de Biuret
9. MATERIAL COLORACION
Pescado Violeta
Espinaca Azul
Levadura Violeta
Albumina Violeta
Grenetina Violeta
Caseína Violeta
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret?
Si, el reactivo reacciona con cualquier proteína liquida o sólida. El reactivo de Biuret es aquel
que detecta la presencia de proteínas, peptidoscortos y otros compuestos con dos o más
enlaces peptídicos en sustancias de descomposición desconocida.
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué?
Si analizamos solo un aminoácido, la reacción debería dar negativa ya que no hay ningún
enlace peptídico (solo 1 aminoácido y enlace peptídico se da entre 2 aminoácidos)
7. Explica la reacción de Xantoproteica
Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo,
cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. Generalmente, se forma
primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo. El color se empieza a
tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve básica. La prueba da resultado positivo en
aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y
triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en
medio fuertemente alcalino.
