micro

1. INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
“METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS”

2. INTRODUCCIÓN
Existen microorganismos con la capacidad de degradar proteínas
(que son macromoléculas), dándonos como resultado, unidades
mas sencillas como son los aminoácidos.
La acción de las enzimas sobre los aminoácidos nos ponen en
evidencia diversos productos nitrogenados y azufrados, que
pueden ser detectados con la utilización de algunos medios
diferenciales y pruebas bioquímicas.
Un ejemplo de estos medios son el medio SIM, el caldo triptona y
el medio LIA.

3. ¿QUÉ SON LOS AMINOÁCIDOS?
o Son unidades que forman proteínas
o Son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino y un
grupo carboxilo
o Esenciales en procesos metabólicos
No los puede producir el
cuerpo. Deben provenir de
los alimentos.
 Lisina
Nuestros cuerpos producen
un aminoácido, aun cuando
no lo obtengamos de los
alimentos que consumimos.
 Arginina
 Ortinina.
ESENCIALES
NO ESENCIALES

4. OBJETIVOS
• Poner de manifiesto la capacidad de los
microorganismos para actuar sobre los aminoácidos
mediante el uso de pruebas bioquímicas.

5. CEPAS
• Klebsiella pneumoniae • Staphylococcus aureus
• Escherichia coli • Pseudomonas
aeruginosa
• Bacillus subtilis • Salmonella typhi
• Shigella flexneri • Proteus vulgaris

6. MEDIO SIM
Medio diferencial que permite efectuar pruebas de producción de acido
sulfhídrico, producción de indol y de movilidad.
INGREDIENTES
• Cisteína
• Fierro peptonizado
• Tiosulfato de sodio
• Agar 0.3%
REVELADOR (para indol)
• Reactivo de Erhlich o
Kovac’s

7. FUNDAMENTO
• La acción de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína
desulfurilasa forman H2S que al estar en presencia del fierro
peptonizado, forman un precipitado negro.
• Las enzimas triptofanasas oxidan el triptófano para formar tres
metabolitos, entre ellos, el indol que al reaccionar con el reactivo
de Erhlich o Kovac’s produce un compuesto quinónico color rojizo.
• El medio de cultivo tiene consistencia semisólida por lo que la
movilidad se observa por el crecimiento del microorganismo más
allá de la zona de inoculación (picadura). Los microorganismos
inmóviles solo crecerán en la zona inoculada.

8. AGAR SEMI SOLIDO
TIOSULFATO DE
SODIO H2S
REACTIVO DE EHRLICH
O KOVAC’S
Reaccione con
el hierro que
contiene
Compuesto
negro
Detectar
movilidad
INDOL
Compuesto rojo

9. REACCIONES
• Producción de acido sulfhídrico
• Formación del indol

10. • Reactivo de Kovac’s o Ehrlich con indol
Indol
Reactivo de
Ehrlich o Kovac’s
Complejo
quinoide

11. INTERPTERACION DE RESULTADOS
Producción de acido sulfhídrico:
• (+): Presencia de un precipitado del medio de cultivo a lo
largo de la línea de siembra o en el medio.
• ( - ): No hay presencia de precipitado.
Producción de indol:
• (+): Anillo rojo en la superficie del medio.
• ( - ): No aparece el anillo rojo.
Movilidad
• (+): Presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la
línea de siembra.
• ( - ): Crecimiento solo en la línea de siembra.

12. MÉTODO
Incubar a 37°C
durante 24
horas
Tomar lectura
para
movilidad y
acido
sulfhidrico
Agregar 3-5
gotas de
reactivo de
Kovac’s o
Ehrlich
Tomar lectura
para indol
Prueba de
indol

13. RESULTADOS
Prueba
Klebsiella
pneumonia
e
Escherichia
coli
Bacillus
subtilis
Salmonell
a typhi
Shigella
flexneri
Staphylococcu
s aureus
Pseudomona
s aeruginosa
Proteus
vulgari
s
H2S - - - - - - + + - - - - - - + +
Indol - - + + - - - - + - - - - - + -
Movilida
d
- - + + + + + + - - - - + + + +

14. CALDO TRIPTONA
Medio diferencial para pruebas de producción de amoniaco y
producción de indol.
INGREDIENTES
• Peptona de caseína
REVELADOR
• Reactivo de Erhlich o Kovac’s (para indol)
• Tira de papel tornasol (para amoniaco)
Tornasol
Ácido (<4.5): Rojo-
anarajado
Básico (>8.5): Violeta

15. FUNDAMENTO
• El triptófano es degradado por las enzimas triptofanasas
produciendo indol como metabolito. Al agregar el reactivo de
Erhlich o de Kovac’s se produce el compuesto quinonico de
color rojizo, dando una prueba positiva.
• El papel tornasol al estar en contacto con el amoniaco gaseoso
vira, debido al medio alcalino que se produce al calentar.

16. REACCIONES
• Formación del indol
• Reactivo de Kovac’s o Ehrlich con indol
Indol
Reactivo de
Ehrlich o
Kovac’s
Complejo
quinoide

17. (+)( - )
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Producción de indol:
• (+): Anillo rojo en la superficie del medio.
• ( - ): No aparece el anillo rojo.
Producción de amoniaco
• (+): La tira de papel tornasol vira a azul.
• ( - ): La tira de papel tornasol se queda rosa.

18. MÉTODO
Incubar a 37°C
durante 24
horas
Observar vire
del papel
tornasol
Liberación
de amoniaco
Inocular en medio
liquido
Añadir de 3 a 5
gotas
Reactiv
o de
Ehrlich
Tomar lectura
Detectar
producción de
indol

19. RESULTADOS
Prueba
Klebsiella
pneumonia
e
Escherichia
coli
Bacillus
subtilis
Salmonell
a typhi
Shigella
flexneri
Staphylococc
us aureus
Pseudomona
s aeruginosa
Proteu
s
vulgari
s
Amonia
co
- + + + - - - + + - - + - + + -
Indol - - + + - - - - + - - - - - + -

20. MEDIO LIA (LISINA HIERRO AGAR)
Es un medio diferencial que nos permite realizar pruebas para
descarboxilación, desaminación y producción de acido sulfhídrico.
INGREDIENTES
• Dextrosa 0.1%
• Lisina 1%
• Citrato de hierro y amonio
• Tiosulfato de sodio
• Peptona
• Extracto de levadura
INDICADOR
Purpura de bromocresol

21. LISINA Detecta presencia de
enzima
Desaminasa
PEPTONA
EXTRACTO DE
LEVADURA
Aportan nutrientes
para el desarrollo
bacteriano
Descarboxilasa
CITRATO DE HIERRO Y
AMONIO
TIOSULFATO DE
SODIO
Indicadores de
producción de H2S
PURPURA DE BROMOCRESOL
pH<5.2: Amarillo
pH>6.8: Violeta

22. FUNDAMENTO
• La lisina es utilizada por las enzimas descarboxilasa y desaminasa.
La lisina al ser descarboxilada, se produce cadaverina y se libera CO2, lo
que incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol)
vira a violeta.
La desaminación de la lisina a ácido alfa cetocarbónico, forma
compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con el citrato de
hierro.
• La acción de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa
forman H2S que al estar en presencia del citrato de hierro y amonio,
forman un precipitado negro.

23. REACCIONES
• Descarboxilación de la lisina
• Desaminación
Lisina Acido cetocarbónico

24. • Producción de acido sulfhídrico

25. MÉTODO
Incubar a 37°C
durante 24
horas
Inocular por
picadura
Estriar
Tomar lectura
para:
 Descarboxila
cion
 Desanimació
n
 Producción
H2S

26. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Descarboxilación de la lisina:
(+): Color violeta en el fondo (principalmente)
( - ): Color amarillo en el fondo
Desaminación de la lisina:
(+): Color rojo en la superficie
( - ): Sin cambios
Producción de ácido sulfhídrico:
(+): Presencia de precipitado negro

27. RESULTADOS
Prueba
Klebsiella
pneumonia
e
Escherichia
coli
Bacillus
subtilis
Salmonell
a typhi
Shigella
flexneri
Staphylococc
us aureus
Pseudomona
s aeruginosa
Proteu
s
vulgari
s
Descarb
.
+ + + + + + + + - - + + + + - -
Desami
n.
- - - - - - - - - - - - - - + +
H2S - - - - - - + + - - - - - - + +

28. DISCUSIONES
• Los resultados en la prueba con caldo triptona no son
confiables ya que algunos medios no estaban en buen estado,
dando posibles falsos positivos o negativos. Podemos
denotarlo por algunas diferencias de las lecturas que se
realizaron en la practica y los resultados consultados en
internet y en la literatura.
• Otro factor que pudo haber cambiado algunos resultados, fue
el tiempo de incubación, es posible que se haya excedido el
tiempo y también se generan falsos positivos. Sin embargo, los
resultados finales son casi iguales.

29. CONCLUSIONES
• Después de realizar las pruebas bioquímicas sabemos que los
aminoácidos son moléculas esenciales para los
microorganismos que cuentan con enzimas para reducirlos y
utilizarlos para obtener energía.
• Las pruebas bioquímicas son un parámetro de suma
importancia para poder conocer el microorganismo problema.
• Se deben de respetar las condiciones de incubación para llevar
a cabo las pruebas y así obtener resultados confiables.

30. BIBLIOGRAFIA
• http://iqb.fcien.edu.uy/pdf/aminoacidos%20I%202004.pdf
• http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/practicas.pdf
• Elmer W. Koneman, Stephen Allen. Diagnostico Microbiologico.
Ed. Médica Panamericana, 2008 - 1691 páginas
• Jean F. MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación
de bacterias de importancia clínica. Ed. Médica Panamericana,
2003 - 850 páginas