Este documento describe diferentes métodos de propagación vegetativa de orquídeas, incluyendo el cultivo de meristemos, el uso de hojas jóvenes, yemas durmientes e inflorescencias jóvenes. Explica que la propagación vegetativa a través del cultivo de meristemos permite obtener plantas idénticas a la planta madre y libres de virus. Además, discute las variaciones que pueden ocurrir durante el cultivo debido a quimeras, virus o mutaciones espontáneas o inducidas.

1. Cap. 18
propagación
vegetativa de
las orquídeas
Lic. En Biología
BIOTECNOLOGIA
Aguilar Bello Mariam E.
Briones Caloca Coral
Coronado Rivera Diana A.
Ramírez Méndez Juan L.

2. INTRODUCCION
 Las orquídeas se pueden multiplicar tanto de
forma vegetativa como sexual. Si se utiliza la
propagación vegetativa la descendencia es
idéntica a la madre. Si se hace una
propagación generativa, solo raras veces se
obtiene una descendencia semejante los
padres, y esto solo en el caso de especies
silvestres.
 Las orquídeas se pueden propagar solo de
forma vegetativa.

3.  El clonada de orquídeas in vivo es un
proceso muy lento y se puede requerir de
hasta 10 años para obtener un clon de
tamaño aceptable.

4.  Morel intento obtener Cymbidium libres
de virus, por cultivo de meristemos, y para
esto aisló ápices del vástago in vitro.

5.  A partir de estos ápices del vástago se
obtuvieron unos “cuerpos protocormicos”
que eran extremadamente parecidos a los
que se forman después de la germinación de
la semilla.
 Esto se consigue cortando el protocormo en
porciones.
 En el caso de Cymbidium se pueden producir
de 6-8 protocormos a partir de uno inicial
alrededor de 6 semanas.

6.  Fig. 18.2

7.  De esta forma Morel produjo miliares de
plantas en un año a partir de un único ápice
de vástago.
 Este método se modifico mas tarde para
Cattleya y otros muchos géneros de
orquídeas.
 El “meri-clonado de orquídeas”
(propagación vegetativa por cultivo de
meristemos) se realiza ahora en gran escala
en el mundo entero.

8.  Los protocormos que se desarrollan
después de la germinación de una
semilla de orquídea, tienen un estado
morfológico que se encuentra a mitad de
camino entre un embrión indiferenciado
y un vástago.

9. Cultivo de meristemos
Producción de plantas libres de virus

10. Una de las condiciones necesarias para la
propagación, es que las plántulas obtenidas
deben estar libre de virus. Se sugiere que por
medio de cultivo de meristemos, se obtiene de
manera automática plantas libres de virus, pero
en realidad no ocurre así. Las investigaciones
llevadas por Morel (1960) con Cymbidium,
demostraron que solo se obtenían plantas libres
de virus en caso de usar meristemos con dos
primordios foliares.

11. El virus con mas frecuencia en las orquídeas es
una cepa especializada del virus del mosaico
del tabaco (TMV-O), que se conocía antes
como virus de la mancha anillada del
Odontoglossum.
Este virus se transporta en la savia y la
contaminación se puede producir a partir de las
manos o cualquier objeto cortante.

12. Produce manchas en forma de anillo en las
hojas de Cattleya y afecta a la forma y al
color de las flores de muchas otras
orquídeas. Un virus menos frecuente el
mosaico en Cymbidium, también
transportado en la savia responsable de
manchas o rayas cloróticas en las hojas de
Cymbidium, Phalaenopsis y Vanda, y de
necrosis en las flores de Cattleya.

13. Cattleya
Cymbidium,
Phalaenopsis
Vanda

14. Propagación por cultivo de
meristemos

15.  Vástagos jóvenes (10-15 cm de longitud).
 Lavar con agua corriente, y se retirar las hojas
de manera que se vean sus yemas auxiliares.
 Se baña en vástago sin hojas, en alcohol de
70%.
 Esterilizar 10 minutos en una lejía 3-10%.
 Preparar las yemas auxiliares después de
haberlas aclarado en agua estéril.
 Esterilizar una vez más incluyendo además
Tween 20 u 80, volviéndolas a aclarar en agua
estéril.

16.  Las bases de las yemas más pequeñas se
cortan y eliminan en una cámara de flujo
laminar, y se realiza la siembra. En caso de las
yemas más grandes se retiran algunas hojas.
 Aislamiento (6-10 semanas), hasta que se
forman los primero cuerpos protocórmicos, se
separan y son repicados.
 Actualmente se siembran yemas con al menos
3-4 primordios foliares, con lo que se consigue un
mejor nivel en el procedimiento de los esquejes.

17. Cymbidium:
 Solamente las zonas de
alrededor de los
primordios foliares
muestran crecimiento
para transformarse en
protocormos, sin
necesidad del meristemo
apical.
 Medio de cultivo Knudson
C.
 Fonnesbech (1972) indicó
que el GA3 inducía el
crecimiento por
elongación.

18. Cattleya :
 Cortar el meristemo en líquido, y cultivarlo después en un
medio líquido, en el cual la colaboración marrón difunde con
más facilidad,
 Aislar una yema completa (3-5mm).
 Se utiliza un medio más complicado, añadiéndosele a veces
auxina, citokinina, leche de coco y peptona.
 Protocormos necesitan bastante tiempo y generalmente
empiezan con las bases de las hojas más viejas.
 Los primordios foliares aislados forman protocormos.
 Medio de cultivo especial
 Aislamiento de meristemos en medios líquidos, y el crecimiento
de protocormos hasta plántulas en medio sólido.

19. Miltonia, Odontonia
y Odontoglossum:
 Ofrecen regeneración
en la base de las hojas .
 Se cultivan también en
un medio relativamente
rico,
 Respuesta rápida.

20.  pH entres 4,8 - 5,8
 Sacarosa 1-3% (p/v) o glucosa 1,5% +
fructosa 1,5%
 Las orquídeas monopódicas en presencia
de azucar se produce amarilleamiento y la
muerte del meristemo
 Leche de coco (10-15%) en cultivo de
plántulas para estimular la formación de
protocormos en las células epidérmicas.

21.  La adición de reguladores genera
posibilidades de mutación gracias a su
presencia.
 Temperatura 22 y 28°C.
 Luz fluorescente de 12-16 horas diarias.
 Se puede usar una baja irradiación para el
aislamiento, pero ésta se debe incrementar
cuando las plántulas se forman a partir de
protocormos.

22.  Multiplicación por cultivo de meristemos:
1. Sobre un medio sólido;
2. En un medio líquido en movimiento, que
se mantiene así por acción de rueda
giratoria.
Su velocidad es extremadamente variable,
pero la mayoría prefieren una velocidad
lenta (2-5 revoluciones por minuto.

23.  La propagación y el crecimiento son mejores en
un medio en movimiento que en un sólido.
 En los medios líquidos existe un mejor suministro
de oxígeno y el transporte de nutrientes es más
eficaz.
 Las plántulas con 3 o 4 hojas alcanzan los 5-7 cm
de altura se transfieren a cajas, después de
varios repicados.
 Suelo esterilizado con vapor.
 Abono depende de la clase de orquídea.
 Generalmente se utiliza una turba suave,
a la que se sube el pH y se le añaden
nutrientes.

24. Otros métodos de
propagación.

25.  Con el paso de los años se han
desarrollado algunos otros métodos,
además del cultivo de meristemos, para
clonar orquídeas en pequeñas escalas:
1.- Utilización de hojas jóvenes: Las hojas
jóvenes y los ápices de hojas forman callos en
sus bases, a partir de los cuales se pueden
formar protocormos, que se pueden utilizar
para la regeneración de plántulas.
(Champagnat y Morel 1969).

26. 2.- Yemas durmientes: se pueden
obtener vástagos a partir de primordios
jóvenes de yemas florales, o de yemas
basales, vegetativos durmientes de
inflorescencia Dandrobium, Vanda,
Oncidium, Thunia,etc. ( Teo (1976-1978,
rotor en 1949 fue el primer investigador
que clono Phalaenopsis de esta forma.
3.- Inflorescencia jóvenes: Intuwong y
Sagawa (1973), desarrollaron un
método para propagar Vascostylis,
Neostylis y Ascofinetia, in vitro, a partir
de explantos de inflorescencia jóvenes.
Estos explantos generaban tejido que se
transformaban en protocormos cuando
se cultivaban en un medio especial.

27. 4.- Callo: Champagnat y Morel (1972),
regeneraron tejido calloso a partir de tejido
procedente de rizoma de Oplurys.
5.- Plántulas jóvenes: estas pueden ser inducidas
a regenerar, como fue demostrado por Pierik y
Steegmans (1972), con calleya aurantiaca,
siendo la citokinina el factor inductor.
6.- Etiolación: si son etioladas plántulas de
Paphiopedihum cultivadas in vitro, haciéndolas
crecer en la oscuridad o con poca irradiación,
pueden utilizarse en el método de segmentos
nodales ( Pierik y Sprenkels).

28. VARIACIONES QUE APARECEN
DURANTE EL CULTIVO

29. Vajrabhaya (1979), indico que las desviaciones
que se encuentran durante la multiplicación de
las Orquídeas se pueden deber a tres causas:
1.- Quimeras: las plantas que constituyen una
quimera natural, frecuentemente tienen una
descendencia heterogenia, cuando se
propagan in vitro; sin embargo, cuando se
regenera un protocormos, es a partir de una
única capa de células, por lo que se pierden
las características propias de la quimera.

30. 2.- virus: los virus pueden dar origen a
apariencias, que aparecen mutaciones.
3.- Mutaciones: la causa mas importante de las
desviaciones son las mutaciones, que son
especialmente frecuentes cuando se utilizan
reguladores y/o cuando tienen lugar una
multiplicación repetida.
También se pueden producir mutaciones de
forma artificial con colchicina o por medio de
radiaciones ionizantes.