3. VIDA
El proceso dinámico por el que los organismos completan su ciclo biológico
MUERTE
Nivel metabólico a partir del cual las células que componen esos organismos
no son capaces de recuperar las funciones vitales que le son propias
AUTOLISIS PUTREFACCION
• De la localización y la naturaleza del tejido considerado
• De la temperatura existente en el medio donde se encuentra el tejido.
4. ¿QUE ES FIJACION
TISULAR?
Es interrumpir los procesos de
degradación que aparecen
tras la muerte celular,
tratando de conservar la
arquitectura y composición
tisular lo mas próxima posible
a como se encontraba en el
organismo vivo
6. …Es la imagen
obtenida después
de la manipulación,
y que comprende
fijación, inclusión,
corte y coloración
¿Y, LA IMAGEN
EQUIVALENTE?
7. 1. La propiedad denominada constancia: la imagen equivalente
ha de observarse en todo los tejidos idénticos obtenidos de
distintos individuos de su misma especie animal.
2. Su reproductividad en todas las preparaciones histológicas
obtenidas a partir de dichos tejidos independientes del
proceso de fijación empleado.
8. 1. No existe un método universal de fijación.
2. No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido.
3. Un defecto de fijación jamás puede ser corregido.
4. Es inútil realizar un estudio histológico sobre un material con
graves defectos de fijación.
9. • Fijación Histológica o Citológica: esta pretende
principalmente la conservación de la arquitectura y estructura
de los tejidos y cedulas, sin considerar los cambios moleculares
inducidos sobres sus componentes bioquímicos
• Fijación histoquímica: para esta es mas trascendental
preservar la composición molecular y bioquímica de los tejidos
que conservar los propios detalles morfológicos celulares.
10. • La fijación inicial o primaria, que es la realizada sobre el
tejido fresco.
• La fijación secundaria o refijacion, que consiste en colocar un
tejido ya fijado en un segundo fijador para demostrar algún
componente tisular específico o simplemente para intensificar
la fijación inicial.
11. Fijadores por métodos físicos
Es el método de elección para realizar
estudios morfológicos o funcionales en los que
se requiera conservar intacta la estructura
antigua del tejido o se contenido enzimático,
en este se emplea el enfriamiento por
congelación del tejido como método para
detener la autolisis y putrefacción tisular.
Fijadores por métodos
químicos
En este los agentes fijadores,
generalmente en forma liquida,
actúan desnaturalizando e
insolubilizando las proteínas
tisulares lo cual bloquea la autolisis
por inactivación enzimática. Además
algunos de estos líquidos fijadores
impiden el crecimiento bacteriano.
12. CRIODESECACION (liofilización)
Fijación
instantánea por
congelación en
nitrógeno liquido
Desecación por
sublimación directa
de agua congelada
a vapor en una
bomba al vacío.
CRIOSUSTITUCION
Congelación lenta y progresiva del
agua congelada de un tejido por
un liquido fijador, en ocasiones
puede actuar simultáneamente
como medio de inclusión.
13. 1. Capacidad para bloquear de inmediato la autolisis
2. Efecto microbicida
3. No provocar reacciones o distorsiones
4. Inducción de cambios en la textura y composición tisular
14. 1. Para evitar la autolisis, el tejido debe ser colocando lo mas
rápidamente posible en el liquido fijador.
2. El tejido debe estar seleccionado
3. El volumen necesario de fijador esta determinado por el del
tejido que se va a fijar.
4. La presión osmótica del líquido fijador y la del tejido serán
equivalente.
5. El pH del líquido fijado debe aproximarse al pH fisiológico,
salvo que su composición deba contener ácidos.
6. El tiempo de fijación es especifico para cada fijador.
15. Se realiza con los siguientes objetivos:
1. Limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el
tejido.
2. Impedir el contacto del fijador con los medios de
inclusión utilizados para proseguir el tratamiento de
la muestra.(porque existe incompatibilidad química
entre ambos)
16. 1. FIJADORES POR DESHIDRATACIÓN TISULAR
Los principales agentes fijadores por deshidratación son los alcoholes
esencialmente el metílico, y el etílico, la acetona, y el cloroformo. Los
únicos que se utilizan como fijadores simples son: el alcohol etílico y la
acetona.
2. FIJADORES POR CAMBIO EN EL ESTADO COLOHIDAL DE LAS
PROTEINAS.
Todos los fijadores contemplados en este grupo son de carácter acido,
se emplean formando parte de mezclas fijadoras y poseen una gran
velocidad de penetración en los tejidos y algún poder de
decalcificación.
17. 3. FIJADORES QUE ACTUAN POR FORMACION DE SALES CON LOS
TEJIDOS
Por lo general todos los agentes de este grupo poseen una gran
velocidad de fijación ya que la formulación de las sales se produce
instantáneamente. La precipitación metálicas por el tejido provoca un
notable endurecimiento, lo que obliga a emplearlo en mezclas fijadoras
que amortigüen este efecto.
4. FIJADORES QUE ACTUAN POR RETICULARIZACION DE LAS
PROTEINAS.
Los principales agentes fijadores que actúan por este mecanismo son los
aldehídos o potentes oxidantes como el tetróxido de osmio.
18. A. Formolsalino
B. Formalina neutra
C. Formol tamponado
D. Formalina acida
E. Formol calciso, solución de beaker
20. Instrumento mecánico con el
cual se realizan secciones
tisulares para la observación
en el microscopio.
http://www.youtube.com/watch
?v=twPmE-
4py2c&feature=player_embe
dded
21. El micrótomo se encuentra conformado por:
Porta bloques
• Porta cuchillas clásico
Mecanismo de avance del portabloques sobre la
cuchilla
• Rueda micrométrica
22.
23. 1. Micrótomo de oscilación o balanceo:
2. Micrótomo de rotación o tipo Minot
http://www.youtube.com/watch?v=GIlF3AW3uhU
3. Micrótomo de desplazamiento
3.1De portabloques deslizante o tipo leitz
3.2 De cuchilla móvil o tipo reichert-jung
3.3 Tipo tetrander
24.
25.
26.
27.
28.
29. Es un micrótomo básicamente derivado del Minot pero con
mejoras:
• Sistema de iluminación.
• Platina portacuchillas
• Sistema óptico con microscopio.
30.
31. • La selección y cuidado del las cuchillas era para confeccionar
buenas preparaciones histológicas.
• Actualmente se usan dispositivos de cuchillas desechables ,
desplazando las cuchillas permanentes.
• Cuchilla planocóncavas : Tipo A y B
• Biplana, en cuña o de tipo c
• Biplana con faceta o tipo D
32.
33. La confección de cortes en parafina consta de seis pasos:
1. Talladado y enfriamiento del bloque.
2. Fijación al portabloques.
3. Orientación del bloque.
4. Orientación de la cuchilla del micrótomo y devastado del
bloque.
5. Selección del espesor del bloque
6. Realización de las secciones.
7. Estirado de los cortes y confesión de las preparaciones
8. Secado de las preparaciones histológicas
34. Comprende varias operaciones sucesivas:
1. Conservación ,tallado y fijación de bloques al micrótomo.
2. Orientación de la cuchilla
3. Obtención y manipulación de cortes
35. Corte en el micrótomo de congelación.
1. Congelación del bloque
2. Obtención de secciones
3. Confección de preparaciones
Técnica de corte en el criostato
1. Congelación del material
2. Realización de las secciones
3. Soluciones adherentes para portaobjetos
36. Corte en el micrótomo de congelación
1. Congelación del bloque
2. Obtención de secciones
3. Confección de preparaciones
Técnica de corte en el criostato
1. Congelación del material
2. Realización de las secciones
3. Soluciones adherentes para portaobjetos
37. Técnica de corte y manejo de la secciones en microscopia
eléctrica.
1. Espesor de los cortes ultra finos
2. Cuchillas de ultramicrotomo
3. Técnica de corte ultramicrotomia
39. • Sustancia que puesta en contacto con un soporte adecuado,
se une a el de forma perdurable transmitiéndole su color
• Pueden emplearse para distinguir entre diferentes tipos de
células o para revelar la presencia de determinados
constituyentes de la célula
40. NATURALES ARTIFICIALES
Se obtienen a partir del
extracto de plantas e insectos
•Colorantes nucleares:
Hematoxilina
Carmín
•Colorantes citoplasmáticos:
Safranina
Orceina
Obtienen a partir del carbón y
en la actualidad se sintetizan
en el laboratorio
Su gama aumenta
continuamente
41. Los colorantes naturales y artificiales presentan un soporte
químico que son :
LOS ANILLOS AROMATICOS
Derivados del
benceno
Gran diversidad de
derivados del benceno y
por ende de colorantes
de anilina
42. GRUPOS CROMOFOROS
Radicales químicos responsables de la
modificación molecular a la que se debe
la aparición del color
CROMÓGENO: Conjunto formado por el grupo cromoforo mas anillo aromático
No es un colorante No se liga con los tejidos
43. COLORANTES SEGÚN SUS GRUPOS
CROMOFOROS
FUNCION
GRUPO CROMOGENO
•Colorantes nitrados y nitrosados
•Colorantes azoicos
•Colorantes derivados de la
antraquinona
•Colorantes derivados de la acridina
•Colorantes derivados de iminas quinonicas
•Colorantes derivados del difenilmetano
•Colorantes derivados del xanteo
•Colorantes derivados de la ftalocianinas
44. GRUPOS AUXOCROMOS Dotados de carga
eléctrica,
es decir,
poseen
carácter ácido o
básico
Son responsables de que el colorante tenga mayor o menor
afinidad por la estructura que se va a teñir, es decir que fija
eficazmente el colorante
45. CLASIFICACION DE LOS COLORANTES SEGÚN SUS
GRUPOS AUXOCROMOS Y APETENCIA TISULAR
•COLORANTES BASICOS
•COLORANTES ACIDOS
•COLORANTES NEUTROS
•COLORANTES INDIFERENTES
•COLORANTES METACROMATICOS
46. MECANISMOS GENERALES
DE COLORACION
•Mecanismos de carácter físico
•Mecanismos de carácter
fisicoquímico o histoquímico
Combinados explican
las particularidades
de las principales
técnicas de tinción e n
anatomía patológica
47. COLORACIONES NUCLEARES
Entre ellos están colorantes básicos como:
•Galocianina
•El verde de metilo
•El azul de azilarina S
•La fucsina básica
•El violeta de cresilo o rojo nuclear extra
Entre los de mayor importancia que son de origen natural están:
•El carmín
•La safranina
•La hematoxilina
Que es el colorante nuclear por excelencia
48. COLORANTES
CITOPLASMATICOS
En general son menos específicos que los
nucleares, pues se fijan a los componentes
extracelulares de los tejidos provocando su
tinción simultanea
•COLORANTES XANTENICOS:
Eosina
Floxina
•CROMOTROPO 2R