1) El cultivo de embriones in vitro ha permitido estudiar el desarrollo morfológico y la expresión génica de los embriones, pero es difícil recrear las condiciones del oviducto y útero. 2) El cultivo en el oviducto de ovejas mejora la calidad de los embriones producidos in vitro. 3) Se requiere más investigación para entender completamente la interacción entre el desarrollo temprano del embrión y su paso por el oviducto y útero.

1. El arte de estudiar el desarrollo embrionario temprano: Avances y desafíos
en el cultivo de embriones de rumiantes

2. Introducción
Retos y desafíos
Entender completamente lo que pasa
en los primeros 3 a 4 días de
desarrollo puesto que es difícil de
acceder porque este desarrollo se da
en el oviducto
Tratar de cultivar post- Blastocito ,
cultivando estepas desarrollo embrión ,
reconocimiento materno gestación difícil de
recrear in vito
El cultivo in vitro brindó una serie de posibilidades para explorar
como se da el desarrollo morfológico de los embriones y estudios
de transcriptómica y proteómica que controlan el desarrollo.

3. EFECTO DE LA THERIOGENOLOGY EN EL CAMPO DE CULTIVO DE
EMBRIONES
 Contribuyó al desarrollo de
tecnologías en diversas áreas
de reproducción influyendo
en el cultivo de embriones.
 Desde el año 1974 se
publican artículos que
brindan la oportunidad de
entender y conocer procesos
en la producción in vitro de
embriones.

4. Autonomía y dependencia del embrión y el
tracto reproductivo
 Embrión de 6 a 8 días relativamente autónomo
 No necesita del contacto materno
 Se puede desarrollar con éxito in vitro.
 Basado en esto en los embriones in vitro y los
recuperados de donantes superovuladas se infiere
que el tracto reproductivo no necesita la exposición
del embrión antes del día 7 (e incluso hasta el día 16)
para una preñez establecida
Blastocito eclosionado
 El embrión depende de sustancias del lumen del
útero , histotrofo que provienen del endometrio
(glándulas uterinas) Crecimiento – Desarrollo.
 No se producen in vitro.
 La preparación de el útero para la implantación
genera alteraciones especificas de expresión génica
en el endometrio.

5. Interacción entre el desarrollo del embrión
y su recorrido por el oviducto
 Se requieren mas estudios para entender como son las condiciones del
desarrollo in vivo (oviducto y útero).
 Modificaciones
morfológicas del
embrión
 Activación del genoma
 El oviducto tiene efectos
positivos en la calidad
del embrión
 El embrión es autónomo
 El tracto reproductivo
debe tener exposición al
embrión al día 7 (puede
llegar hasta día 16)

6. 1. Fecundación
• Se da en el ámpula
• El oocito fecundado viaja por el cuerno 4 a 5 días hasta el
útero
2. Implantación (Útero)
• Hay perdida de la zona Pelúcida
• El oocito tiene nutrición histótrofa
• Se da la implantación del blastocisto al día 6 -7 en el
endometrio
3. Elongación
• Se da posterior a la implantación, al día 13
4. Reconocimiento materno
• Se da al día 16 por la secreción de Interferón Tau por parte del
embrión
• Ya no hay nutrición histótrofa
Proceso de implantación, elongación y
reconocimiento materno

7. Proceso de implantación, elongación y
reconocimiento materno
IMPLANTACIÓN
RECONOCIMIENTO MATERNO
ELONGACIÓN
 Hay interacción del embrión y el endometrio

8. Interacción entre el desarrollo del embrión
y su recorrido por el oviducto
Cultivo en el Oviducto
( ovejas, ganado , conejos, ratones)
Mejor calidad de embrión
 Mejor calidad
morfológica
 Mejor expresión génica
 Criotolerancia
 Mejor tasa de preñez
 El transcriptoma del epitelio del oviducto bovino inicia 3 días
después del estro.
 En regiones del istmo se tomaron embriones de 8 células y en
el oviducto oocitos no fecundados: se observan grandes
diferencias en la expresión génica entre istmo y ámpula
 Los embriones de 8 células no tuvieron efecto sobre el
transcriptoma del istmo .

9. Producción in vitro de embriones
Proceso de tres etapas : Maduración in vitro, fertilización y cultivo
Maduración : 90% de
oocitos inmaduros son
sometidos a maduración
Solo el 80% son
fertilizados
Solo el 30 a 40% llegan a etapa
de blastocito
Cultivo proceso critico
Oocitos de buena calidad
Componente crucial
Los rendimientos de blastocisto in vitro de oocito de animales
sacrificados rara vez supera el 40%

10. Producción in vitro de embriones
Como se menciono anteriormente el cultivo después de la fertilización es el
mas critico en la determinación de calidad de blastocisto.
Cultivo de oviducto de oveja
 Aumenta la calidad de blastocisto
(resistencia de criotolerancia,
tranferencia y total de embriones
vivos) que los madurados in vitro.
 El cultivo de cigotos de mala calidad
in vitro--- blastocisto de mala calidad.
 Cigotos de mala calidad madurados
in vivo--- alta calidad.
 Reportes evidencian que hay cambios
en expresión génica de los producidos
in vitro

11. Producción in vitro de embriones
Cultivo in vitro SOF (2 a 4 días)
Cultivo en oviducto de oveja a la
etapa de blastocisto
Los blastocistos pasan 2 días in vivo y 4 in vitro
(tasas de supervivencia baja y de criopreservación)
Los que pasaron los últimos 2 días
solo en SOF
(tasas intermedias de supervivencia)
Los que pasaron los últimos 4 días de
cultivo in vivo (tasas altas de
supervivencia) expresión de pocos
genes
La activación del genoma (EDA) es crucial para una buena calidad
embrionaria.
Estudios revelan que hay diferencias de activación del genoma tanto in vitro
como in vivo
Se requiere buscar estrategias para modificar las condiciones in vitro

12. Metabolismo embrionario
Energía ATP
Cambios en la
morfología
Los embriones de
preimplantación derivan su
ATP
A través de la
fosforilación oxidativa
Piruvato Lactato Aminoácidos
 En mórula : para generar ATP utiliza glucosa en pequeñas
cantidades y fosforilación oxidativa.

13. Metabolismo embrionario
Composición del fluido de
oviducto
Contiene:
 Sustratos de energía
 Iones y aminoácidos
 Glicina, alanina y glutamato
 La glicina la mas abundante
 Los embriones a medida de su desarrollo agotan los aminoácidos.
 Se requiere rotación de aminoácidos en etapas del desarrollo.

14. Los sistemas de cultivo de embriones
Gandolfi and Moor: el cultivo de embriones mamíferos a partir de
una sola célula hasta estado de blastocisto expandido es un
proceso incierto.
 Los embriones fecundados in vitro normalmente no llegan a
blastocisto: puede ser debido a la mala calidad del oocito en
lugar de deficiencias en el medio de cultivo de embriones.
Tervit and colleagues: fueron los primeros en reportar un cultivo
exitoso de cigotos rumiantes en la etapa de blastocisto in vitro
utilizando medio SOF basado en el fluido del oviducto ovino.
La suplementación del SOF con suero, mejoró el desarrollo de
embriones de ovejas en la etapa de blastocisto.
En los 90 el co-cultivo de embriones en oviducto de ovejas era el
método mas favorecido para el desarrollo de embriones in vitro

15. Cultivo in vivo: acceder al oviducto
Hecho relevante para el
desarrollo del cultivo in
vitro
Facilitó el estudio
Eyestone et al : fueron los primeros en desarrollar esta técnica
 Esta técnica como se mencionó anteriormente ha sido demostrada y práctica por
varios autores dando como resultado un gran numero de embriones, aunque el
rendimiento de blastocisto en cultivo in vivo no es superior a la in vitro.
 No es utilizada para diseños experimentales.

16. Medidas de resultado
 Los resultados típicos en los estudios de embriones bovinos (tasas de
fertilización, tasas de división y desarrollo embrionario) la calidad de los
blastocistos se evalúa utilizando criterios morfológicos no invasivos.
 Observando los cambios a través del tiempo para estudiar características
del desarrollo.
 El grupo de estudio de Louvain Le-Neuve en Bélgica, utilizó un lapso de
tiempo para estudiar el desarrollo del blastocisto normal en varias especies.
 Frozen, estudió el desarrollo en embriones bovinos y describe fase de
latencia en etapas de ocho células.
 Holm et al, utilizó un lapso de tiempo y determinó que los que tuvieron
clivaje tienen mas posibilidad de llegar a blastocisto.
 Otros grupos se enfocan en imágenes mas sofisticadas y algoritmos
matemáticos para predecir el desarrollo de estos .

17. Medidas de resultado
Medidas invasivas
Tinciones
Conteo de células Resistencias a criopreservación
Exámenes de expresión
génica
La expresión de los genes permitió identificar genes presentes en el desarrollo
embrionario.

18. Observaciones finales
El cultivo de embriones es uno de los retos que hay que mejorar para
incrementar las tasas de producción in vitro de embriones.
Falta conocer mas a fondo lo que sucede en la primeras etapas del
desarrollo embrionario ( la interacción entre el embrión y la madre ).
El numero de embriones bovinos en el mundo es cada vez mayor, y existe
la necesidad de optimizar las condiciones de cultivo de embriones in
vitro para maximizar la calidad del embrión.