Este documento describe un estudio que investiga si el cotransportador fosforilado de cloruro de sodio (PNCC) y la prostasina en exosomas urinarios pueden servir como biomarcadores para el hiperaldosteronismo. Se utilizaron dos modelos animales de aldosteronismo y pacientes con aldosteronismo primario. En los animales, la infusión de aldosterona aumentó PNCC y prostasina en los exosomas urinarios. Una dieta baja en sodio también aumentó PNCC. En los pacientes con aldosteron

1. El cotransportador fosforilado de Cloruro de sodio en
exosomas urinarioes superior a prostasina como marcador
de Aldosteronismo
Nils van der Lubbe , Pieter M. Jansen , Mahdi Salih , Robert A. Fenton ,Anton H. van den
Meiracker , AH ene Danser , Robert Zietse ,Ewout J. Hoorn
Abstracto
Exosomas urinarios son vesículas derivadas de células epiteliales tubulares renales. Los
exosomas a menudo contienen varias proteínas asociadas a la enfermedad y por lo tanto
son objetivos útiles para la identificación de biomarcadores de la enfermedad. En este
caso, la hipótesis de que la forma fosforilada (activa) del cotransportador de cloruro de
sodio (PNCC) o prostasina podría servir como biomarcadores para el
hiperaldosteronismo. Pusimos a prueba esta en 2 modelos animales de aldosteronismo
(infusión de aldosterona o una dieta baja en sodio) y en pacientes con aldosteronismo
primario. Exosomas urinarios fueron aisladas de orina de 24 horas o muestra de orina
usando ultracentrifugación. En ratas, una normal o una dosis alta de aldosterona para 2, 3,
o 8 días aumentaron PNCC 3 veces en exosomas urinarios ( P <0,05 para todos).Una dieta
baja en sodio también aumentó PNCC en exosomas urinarios aproximadamente 1,5 veces
después de las 4 y después de 8 días de tratamiento.Los efectos de estas maniobras en
prostasina en exosomas urinarios fueron menos claros, que muestra un aumento de 1,5
veces significativa sólo después de 2 y 3 días de la infusión de alta aldosterona. En
exosomas urinarios de pacientes con aldosteronismo primario, PNCC era 2,6 veces mayor
( P <0,05), mientras que prostasina era 1,5 veces mayor ( P = 0,07) que en los pacientes
con hipertensión esencial. PNCC exosomal urinaria y, en menor medida, prostasina son
prometedores marcadores para aldosteronismo en animales de experimentación y los
pacientes. Estos marcadores se pueden usar para evaluar la actividad biológica de la
aldosterona y, potencialmente, como biomarcadores clínicos para aldosteronismo
primario.
Introducción
Proteínas urinarias se originan a partir de diversas fuentes. Ellos se pueden derivar de
filtración glomerular, secreción tubular, vertimiento, desprendimiento de proteína
anclada glycosylphophatidylinositol (por ejemplo, proteína de Tamm-Horsfall), o la
secreción de exosoma. 1 exosomas son vesículas de membrana de baja densidad que se
originan a partir de los cuerpos multivesiculares. Exosomas urinarios han despertado el
interés como biomarcadores potenciales para la enfermedad humana. 1 - 3 La presencia
de exosomas urinarios y un método reproducible para su aislamiento se reportaron en
2004 por Pisitkun y colegas. 4 El análisis proteómico de estos exosomas mostró que
contienen muchas enfermedades relacionadas con proteínas 4 , 5 , sin embargo, la

2. cuestión se mantuvieron si la presencia de una proteína dada en exosomas urinario podría
proporcionar información sobre los procesos fisiológicos o enfermedad en el riñón. Los
estudios que abordan esta cuestión analizaron exosomas urinarios en pacientes con
enfermedades monogénicas, lo que resulta en la inactividad o la hiperactividad de las
proteínas de transporte de sodio renal. Por ejemplo, en el síndrome de Bartter y Gitelman,
en la que el cotransportador de cloruro de sodio y potasio y el cotransportador de cloruro
de sodio (NCC) son inactivados genéticamente, también se encontró que estas proteínas a
estar ausente o reducida en exosomas urinarios. 5 , 6 A la inversa, maya y col encontrado
en la abundancia de NCC a ser mayor en los pacientes con hipertensión hipercaliémica
familiar, en el que las mutaciones en NCC-regulación de quinasas causan hiperactividad de
este cotransportador. 7 Por lo tanto, en estos grupos homogéneos, la expresión de las
proteínas de transporte de sodio en exosomas urinarios correlacionada con lo uno puede
esperar de su expresión renal. El siguiente paso en la evaluación del potencial de los
exosomas como biomarcadores urinarios es analizar su rendimiento en la enfermedad
adquirida.Por lo tanto, en este estudio, nos preguntamos si las diversas formas de
aldosteronismo dieron como resultado el aumento de expresión de las proteínas sensibles
a la aldosterona en exosomas urinarios. Para abordar esta cuestión, hemos utilizado
modelos animales de aldosteronismo primario y secundario, y también estudiaron
pacientes con aldosteronismo primario. En el riñón, los 2 principales transportadores de
sodio activados por la aldosterona son NCC y el canal de sodio epitelial (ENaC). 8 , 9 Por
tanto, parece lógico para estudiar NCC y ENaC en exosomas urinarias en diferentes formas
de aldosteronismo. Esteva-Font et al, sin embargo, no encontró ninguna diferencia en la
abundancia de NCC en exosomas urinarios de pacientes con hipertensión sensible a la
sal. 10Recientemente, se ha hecho evidente que la forma fosforilada de NCC (PNCC)
representa la forma activa de NCC y que la trata y la fosforilación de NCC se pueden
regular de forma independiente. 11 Por lo tanto, proponemos que el PNCC es un mejor
reflejo de la actividad biológica de NCC. ENaC es difícil de estudiar en exosomas urinario,
ya que está presente en cantidades muy bajas. 4 En su lugar, prostasina se ha convertido
en un interesante marcador sustituto de la actividad ENaC. 12 prostasina es una serina
proteasa que puede aumentar la actividad de ENaC y también es sensible a los
aldosterona. 13 A continuación, ponemos a prueba la hipótesis de que el PNCC y
prostasina en exosomas urinarios son marcadores de hiperaldosteronismo.
Métodos
Estudios en Animales
Todos los animales protocolos fueron aprobados por el Comité de Cuidado de Animales de
la Universidad Erasmus Medical Center de Rotterdam (127-11-01 y 127-10-11 EUR
EUR). Se realizaron tres estudios. En el primer estudio, diez ratas macho Sprague-Dawley
de 15 semanas de edad (Charles River) fueron adrenalectomizadas a través de una incisión
lumbodorsal bilateral y aleatorizados para recibir aldosterona de dosis alta (100 mg / kg /
día) o vehículo a través de minibomba osmótica ( la inserción subcutánea, Alzet). Todas las

3. ratas recibieron también el reemplazo de glucocorticoides (dexametasona, 5 mg / kg / d) y
un bloqueador del receptor de angiotensina (losartán, 10 mg / kg / d) para inhibir los
efectos de la angiotensina II sobre PNCC y prostasina. 14 , 15 El segundo estudio fue
similar a la primera, pero ahora incluyó un tercer grupo de 5 ratas que recibieron una
dosis normal de aldosterona (50 mg / kg / d). 16 Además, este estudio duró 8 días en lugar
de 3 días. En el segundo estudio, también cosechamos el riñón adecuado para el análisis
de inmunotransferencia. En el tercer estudio, 12 ratas fueron asignadas al azar para recibir
una normal (0,5%) o baja (0,001% al 0,002%), la dieta de cloruro de sodio durante 8 días
(dietas Harlan, Harlan Laboratories). En los 3 experimentos, los animales fueron alojados
en jaulas metabólicas para recoger la orina de 24 horas para el aislamiento de exosomas
urinarios. Exosomas urinarios fueron aislados en diferentes puntos de tiempo en los 3
estudios (días 1, 2 y 3 en el primer estudio, día 8, en el segundo estudio, y los días 0, 4 y 8
en el tercer estudio). Por último, al final de cada experimento, se midieron la renina en
plasma y la aldosterona, así como la orina de sodio,.
Los estudios realizados en pacientes
Cinco pacientes con aldosteronismo primario y 4 pacientes con hipertensión esencial se
seleccionaron al azar a partir de un estudio en curso sobre aldosteronismo primario. 17 En
resumen, los pacientes fueron elegibles para participar en este estudio cuando tenían
hipertensión no controlada a pesar del uso de al menos 2 fármacos
antihipertensivos. Todos los pacientes fueron sometidos a la expansión de volumen (2
litros de cloruro de sodio al 0,9% [NaCl] durante 4 horas) para analizar si la aldosterona
era suprimible. Aldosteronismo primario se define como la aldosterona plasmática
irreprimible (> 235 pmol / L) después de la expansión de volumen. Los pacientes cuya
prueba posterior aldosterona fue inferior 235 pmol / L se considera que tienen la
hipertensión esencial. En todos los pacientes, muestra de orina fue recolectada de forma
controlada para el aislamiento de los exosomas urinarios. La orina de sodio, potasio, y las
concentraciones de creatinina se midieron también.
Aislamiento y análisis de inmunotransferencia de exosomas urinario
Exosomas urinario se aislaron como se informó anteriormente 4 , 18 , 19 ; un protocolo
más detallado se proporciona como una línea de sólo Suplemento de Datos. En resumen,
todas las muestras de orina fueron tratados con un inhibidor de la proteasa antes de su
almacenamiento a -80 ° C; no se utilizaron inhibidores de la fosfatasa. Exosomas urinario
se aislaron utilizando un proceso de centrifugación de 2 pasos. En primer lugar, la orina se
centrifugó a 17.000 × g durante 15 minutos a 37 ° C para eliminar las membranas celulares
enteros y otras partículas de alta densidad. Ditiotreitol fue utilizado para interrumpir la
red polimérica de Tamm-Horsfall. Posteriormente, las muestras se sometieron a
ultracentrifugación a 200.000 xg durante 105 minutos a 25 ° C. El precipitado que se
formó durante la ultracentrifugación se suspendió en tampón de aislamiento.Finalmente,
los gránulos suspendidos fueron solubilizadas en tampón de Laemmli para el análisis de
inmunoblot. La inmunotransferencia de los exosomas urinarios y las muestras renales se
realizó como se ha descrito anteriormente (véase también sólo en línea Suplemento de
Datos). 8 El anticuerpo contra NCC fosforilada en la treonina 58 se generó por 1 de los
investigadores (RAF) y se ha caracterizado anteriormente. 20 Todos otros anticuerpos se
adquirieron: prostasina (BD Biosciences) y NCC (Stessmarq Biosciences). Para los estudios

4. en animales, se utilizó el volumen completo de la orina de 24 horas para aislar exosomas
urinarios, y, por lo tanto, no hay normalización se utilizó en el análisis.La tinción con azul
de Coomassie se utilizó para confirmar que no hubo diferencias en el contenido total de
proteínas. Por el contrario, para el estudio del paciente, la cantidad de muestra cargada
durante inmunotransferencia se normalizó por la concentración de creatinina en orina. 1
Estadística
Todos los datos se expresaron como media ± error estándar de la media. Grupo
comparaciones se realizaron utilizando el Student t examen o análisis de varianzas con
una prueba post hoc, según el caso. Para el análisis, se utilizó el logaritmo natural de la
concentración plasmática de aldosterona para producir una distribución normal. P ≤ 0,05
fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
Infusión de Tres Días de La aldosterona Aumento PNCC y prostasina en exosomas
urinarios
Ratas adrenalectomizadas fueron infundidos con dosis altas de aldosterona o vehículo
durante 3 días. Las diferencias en la concentración plasmática de aldosterona y de sodio
en orina entre los 2 grupos confirmaron que tanto la adrenalectomía y la infusión de
aldosterona tuvieron éxito ( Figura 1 A). La infusión de aldosterona aumentó
significativamente PNCC, NCC, y prostasina en exosomas urinarios en los días 2 y 3 ( Figura
1 B). La abundancia de PNCC en exosomas urinario aumentó 2,9 ± 0,4 veces el día 2 y 3,2 ±
0,3 veces en el día 3 (P <0.05 para el día 2 y P <0,01 para el día 3). La abundancia de NCC
en exosomas urinarios también aumentó 2,3 ± 0,4 veces el día 2 y 1,8 ± 0,4 veces en el día
3 ( P<0,05 para ambos). La abundancia de prostasina en exosomas urinario aumentó 1,8 ±
0,2 veces en el día 2 y día 3 ( P <0,05 y P <0,01, respectivamente, la Figura 1C).
Figura 1.
Efectos de la infusión de aldosterona crónica en ratas en
las abundancias de la forma fosforilada de cloruro de
sodio cotransportador (PNCC) y prostasina en exosomas
urinarios. Adrenalectomizadas ratas fueron tratadas con
aldosterona de alta dosis (Aldo-H, 100 mg / kg / día) o
vehículo (control) durante 3 días. Un , plasma y orina de
sodio aldosterona. B , PNCC y NCC
enurinarios exosomas. C , prostasina en exosomas
urinarios. * P <0,05, ** P<0,01, *** P <0,001
por estudiante t prueba .

5. Efectos de una infusión de 8 días de la aldosterona en PNCC y prostasina en riñón y
urinarios exosomas
Ratas adrenalectomizadas fueron infundidos con vehículo, una normal o una dosis alta de
la aldosterona durante 8 días. Las concentraciones de aldosterona en plasma fueron
significativamente diferentes entre los 3 grupos ( Figura 2 A). Tanto la dosis normal y alta-
aldosterona aumenta la abundancia de PNCC y NCC en exosomas urinarios ( Figura
2 B). PNCC aumentó 3,0 ± 0,4 veces con la dosis normal y 2,5 ± 0,5 veces con la dosis alta
( P <0,01 y P <0,05, respectivamente); NCC sólo aumentó con la dosis normal (1,5 ± 0,2
veces, P <0,05 ). Aunque PNCC y NCC en exosomas mostraron respuestas similares a la
aldosterona en comparación con la abundancia de estas proteínas en el riñón, 21 no se
observó una correlación directa (datos no mostrados). En contraste con la infusión de 3
días ( Figura 1 C), la 8-día de infusión de aldosterona no aumentó prostasina en exosomas
urinario ( Figura 2 C). En el riñón, sólo la dosis alta-aldosterona aumentó
significativamente prostasina (1,5 ± 0,1 veces, P <0,05).
Figura 2.
Efectos de la infusión normal y alto-aldosterona en
ratas durante 8 días en la aldosterona plasmática, la
forma fosforilada del cotransportador de cloruro de
sodio (PNCC) y prostasina en exosomas urinario y del
riñón. Ratas adrenalectomizadas fueron infundidos
con vehículo (control), normal (Aldo, 50 mg / kg / d),
o de alta dosis (Aldo-H, 100 mg / kg / d) aldosterona
durante 8 días. A , las concentraciones de
aldosterona en plasma. B , PNCC y NCC en exosomas
urinarios. C , abundancia prostasina en exosomas
urinario y del riñón. * P <0,05, ** P <0,01,
*** P <0,001 mediante análisis de varianza y prueba
post hoc.

6. Una dieta baja en sal Aumento PNCC pero no prostasina en exosomas urinarios
Para inducir un aumento fisiológico de la aldosterona plasmática, 2 grupos de ratas fueron
alimentadas con una dieta normal de sodio, después de lo cual el grupo 1 se cambió a una
dieta baja en sodio. La dieta baja en sodio causó una mayor actividad de la renina
plasmática y aldosterona plasmática más alta después de 8 días ( Figura 3 A). Cuando
ambos grupos estaban en la dieta de sodio normal, la abundancia de PNCC y NCC en
exosomas urinario fue similar ( Figura 3 B). La dieta baja en sodio aumenta PNCC en
exosomas urinarios en el día 4 (1,7 ± 0,2 veces) y el día 8 (1,4 ± 0,1 veces, p <0,05 en
ambos casos). La dieta baja en sodio aumenta NCC en exosomas urinarios en el día 4 (1,5 ±
0,1 veces) y el día 8 (2,0 ± 0,3 veces, p <0,05 en ambos casos). En contraste, no causó
cambios significativos en la abundancia de prostasina en exosomas urinario ( Figura 3 C).
Figura 3.
Una dieta baja en sal aumenta forma fosforilada del
cotransportador de cloruro de sodio (PNCC), pero no
prostasina en exosomas urinarios de ratas. A, la
actividad de la renina plasmática y aldosterona
plasmática. B , PNCC y NCC en exosomas urinarios. C ,
prostasina en exosomas urinarios. * P <0,05 por
Student t prueba.
PNCC y prostasina se incrementan en exosomas urinarios de pacientes con
hiperaldosteronismo primario
Las características de los 5 pacientes con aldosteronismo primario y 4 pacientes con
hipertensión esencial se muestran en la Figura 4 . Ambos grupos tuvieron un grado similar
de hipertensión, pero tenía diferencias significativas en cuanto a la relación de
aldosterona a renina en plasma y la relación de sodio a potasio de la orina. La abundancia
de PNCC en exosomas urinarios de pacientes con aldosteronismo primario fue mayor en
los pacientes con hipertensión esencial (2,6 ± 0,3 veces, p <0,05, Figura 4 ). La abundancia
de prostasina en exosomas urinario mostró una tendencia a ser mayor en los pacientes
con aldosteronismo primario (1,5 ± 0,3 veces, p = 0,07).

7. La Figura 4.
Los pacientes con aldosteronismo primario espectáculo aumentó la abundancia de la
forma fosforilada del cotransportador de cloruro de sodio (PNCC) y prostasina en
exosomas urinarios. A Características de los pacientes con hipertensión esencial (EH) o
aldosteronismo primario (PA). B , los pacientes con PA muestran una mayor abundancia
de PNCC y prostasina en exosomas urinarios. * P <0,05 por Student t de prueba o Mann-
Whitney.
DISCUSIÓN
En este estudio, preguntamos si NCC y la prostasina en exosomas urinarios pueden ser
usados como marcadores para aldosteronismo primario y secundario. En este estudio,
nos pregunta si NCC y prostasina en exosomas urinarios pueden utilizarse como
marcadores para aldosteronismo primario y secundario. En nuestras manos, tanto NCC
total y fosforilada fueron superiores a prostasina como un marcador para aldosteronismo.
De hecho, la abundancia de prostasina en exosomas urinarios aumentó solo durante altas
dosis, a corto plazo tratamiento con aldosterona (figura 1C), mientras que la abundancia
de PNCC en exosomas urinario fue mayor durante aldosteronismo, independientemente
de la duración, dosis, o estímulo (Figura 5). Debido a los cambios en el PNCC fueron más
pronunciados que en NCC, PNCC aparece como el mejor marcador. Además, PNCC fue
significativamente mayor en los exosomas urinarios de pacientes con aldosteronismo
primario en comparación con los pacientes con hipertensión esencial (Figura 4). Por el
contrario, el aumento en la abundancia de prostasina en exosomas urinarios de pacientes
con aldosteronismo primario fue de significación marginal.

8. Figura 5.
Resumen de la actuación de prostasina exosomal urinaria y la forma fosforilada de
cotransportador de cloruro de sodio (PNCC) como marcadores de aldosteronismo. Se
muestran los valores de densitometría de los análisis de inmunotransferencia. Un valor de
1 representa ninguna diferencia en comparación con el grupo de control. * P <0,05,
** P <0,01 vs control.urinaria prostasina exosomal y la forma fosforilada de cloruro de
sodiocotransportador (PNCC) como marcadores de hiperaldosteronismo. Se muestran los
valores de densitometría de los análisis de inmunotransferencia.Un valor de 1 representa
ninguna diferencia en comparación con el grupo de control. *
Varias observaciones en relación con la dinámica de excreción de PNCC y prostasina n en
exosomas urinarios durante aldosteronismo en este estudio merecen discusión. Por
ejemplo, los resultados de la infusión a corto plazo de la aldosterona en ratas sugieren
que se necesitan al menos 1 día, tanto para PNCC y prostasina para aumentar en
exosomas urinario (Figura 1). Esto puede estar relacionado con el tiempo que tarda la
aldosterona para aumentar la transcripción o la modificación postraduccional de estas
proteins.(22 )La infusión a largo plazo de la aldosterona en ratas mostró que una dosis
más baja (fisiológica) de la aldosterona ya era suficiente para aumentar PNCC (Figura 2B) .
De hecho, la expresión de PNCC en exosomas urinarios fue ligeramente inferior a la dosis
alta. Esto sugiere que se ha producido el efecto estimulador de la aldosterona en PNCC en
exosomas ya sea saturados o urinarios que la aldosterona de escape, un mecanismo de
defensa conocido para reducir NCC en el kidney.23 Aunque la inducción de
aldosteronismo secundario por una dieta baja en sodio también aumentó en PNCC
exosomas urinario (Figura 3B), la magnitud de este efecto fue menor que con la infusión
de aldosterona (Figura 5). Uno podría haber predicho aún mayor PNCC en exosomas
urinarios durante una dieta baja en sodio porque esta maniobra es probable que aumente
el plasma de angiotensina II y aldosterona . Recientemente, hemos mostrado que la
angiotensina II puede aumentar PNCC renal de forma independiente de la aldosterona y
que la combinación de la angiotensina II y aldosterona conduce a un efecto aditivo. 15,21
Al parecer, otros factores limitan la excreción PNCC en exosomas urinarios durante una
dieta baja en sodio. Por otra parte, las diferencias en las concentraciones plasmáticas de
aldosterona en los grupos de control se deben tomar en consideración (virtualmente
ausente en las ratas adrenalectomizadas frente_ 100 pg / ml en ratas con una dieta
normal de sodio, las figuras 1A y 3A). De interés, el aumento de los NCC en exosomas

9. urinarios que observamos en este estudio con una dieta baja en sodio fue similar al
incremento Esteva-Font et al encontraron para NCC en un estudio separado.(10)
Nuestro estudio sugiere que PNCC era mejor que prostasina como un marcador de
aldosteronismo, lo que podría explicarse por varios factores. En primer lugar, aunque
prostasina es sensible a la aldosterona y puede activar ENaC, esto no necesariamente lo
convierte en un marcador directo de la actividad ENaC y, como tal, puede que no sea un
marcador directo de la reabsorción de sodio distal.12, 13 Prostasina es sólo una de las las
proteínas presentes en la compleja cascada de señalización que regula ENaC.(24) En
segundo lugar, porque prostasina también está presente en las células epiteliales de la
próstata, exosomas urinario pueden también contener prostasina de esta fuente. (25)
Esto puede haber limitado la especificidad de prostasina como un marcador para las
acciones de la aldosterona en el riñón, especialmente en los hombres. En tercer lugar,
mediante el uso de electroforesis en 2 dimensiones, Olivieri y sus colegas han demostrado
anteriormente que existen varias subunidades de prostasina, sólo algunos de los cuales
son sensibles aldosterona. (12) prostasina Nuestros resultados difieren de los reportados
por Narikiyo y compañeros de trabajo. (13) Se encontró que las ratas continuaron
aumentando prostasina urinaria durante 7 días de la infusión de aldosterona (desde 1,5 a
4 veces), mientras que fuimos incapaces de detectar aumentó prostasina en exosomas
urinarios después de 8 días de tratamiento (Figura 2). Esta diferenciapuede explicarse por el
uso de una dosis 3 veces más alta de aldosterona en el estudio anterior y que su análisis de
prostasina se realizó en toda la orina en lugar de exosomas urinarios.
En losúltimosaños,el potencial de utilizarproteínas en exosomas urinarios como marcadores de
enfermedades que afectan al riñón ha atraído mucho interés. (1-3,26) El progreso ha sido algo
obstaculizado por problemas técnicos y de normalización, pero la propuesta de protocolos
uniformeshasidounpasoen ladireccióncorrecta.(18,27) Creemosque la fuerza de este estudio
fue la de combinarunentornoexperimental controlado con un entorno clínico para el análisis de
exosomas urinarios en aldosteronismo. Debido a las acciones bien caracterizadas de la
aldosteronaenel transporte de sodiodel tubulodistal, el aldosteronismo parece especialmente
adecuado para el análisis con exosomas urinarios. Clínicamente, aldosteronismo primario es
importante porque los estudios recientes sugieren que es una condición común entre los
pacientes con hipertensión resistente que es a menudo difícil de diagnosticar. (28) Nosotros
enfatizamos,sinembargo,que el objetivoprincipal de esteestudioesproporcionarunapruebade
principiode que la abundancia de proteínas sensibles a la aldosterona en exosomas urinarios se
incrementa durante el aldosteronismo. La pregunta de si PNCC en exosomas urinario tiene
potencial diagnóstico en pacientes con aldosteronismo primario sigue sin determinarse. Esto
requerirá grupos más grandes y bien caracterizadas de los pacientes a ser sometidas a ensayo
frente aun estándarde oro. Además,lasdiferenciasglobalesenNCCyPNCCentre lascondiciones
eran relativamente leve, incluso en condiciones experimentales controladas. Incluso si la
sensibilidad y la especificidad de PNCC en exosomas urinarios serían mayores que las pruebas
existentes,talescomoel ARR,el métodoactual de aislamientode exosomanoesadecuadoparael
uso clínico. (29) En su lugar,el desarrollode uninmunoensayoligadoaenzimas para la PNCC sería
una atractiva alternativa.
Este estudio sugiere varias direcciones para la investigación futura. Un obvio próximo paso será
evaluar cómo PNCC y prostasina en pacientes con aldosteronismo primario responden al

10. tratamientoconlosantagonistasdel receptorde mineralocorticoides o adrenalectomía. Narikiyo
et al demostraronque prostasinaurinariadisminuyóen 3 pacientes con aldosteronismo primario
que se habían sometido adrenalectomía. (13) Del mismo modo, Olivieri et al demostraron que
prostasinadisminuyó en sujetos normotensos con el aldosteronismo debido a una dieta baja en
sodio que posteriormente fueron tratados con espironolactona. (12) También sería informativo
para sabersi otrosfármacos antihipertensivos más utilizados, como diuréticos, inhibidores de la
enzimaconvertidorade laangiotensinaobloqueadoresde losreceptoresde angiotensina afectan
la excreción urinaria de exosoma. Debido a que el total de NCC también aumentó, sería
importante para saber si el ARNm del NCC también está presente en exosomas urinarios y si se
comportade manerasimilar.Si es así, podría ser un marcador más sensible debido a que la señal
puede ser amplificada. En el riñón, sin embargo, los estudios anteriores encontraron que la
abundancia de proteínas y mRNA del NCC no siempre se correlacionan. (21, 23) Por último,
teniendo en cuenta los últimos conocimientos sobre los efectos de la angiotensina II sobre el
transporte de sodio del tubulo distal, 14,15, sería importante para comparar PNCC exosomal
urinaria y prostasina en pacientes con aldosteronismo primario y secundario.
En conclusión,enexosomasurinarios de animales y pacientes, PNCC fue superior a la prostasina
como unmarcador de el aldosteronismo. Estos resultados justifican la evaluación adicional de la
aplicabilidad del exosomas urinario como una herramienta de diagnóstico en aldosteronismo
primario y, posiblemente, otras formas de hipertensión. Además, PNCC y, en menor medida,
prostasinapuede ser utilizado experimentalmente como un método no invasivo para analizar la
acción biológica de la aldosterona en el riñón.
PERSPECTIVA
En la hipertensión, exosomas urinarios podrían aplicarse como una prueba de diagnóstico para
aldosteronismo primario, para evaluar la sensibilidad a la sal o la respuesta a los fármacos
antihipertensivosque actúansobre el riñón.Nuestroestudiopuedeser considerada como prueba
de losprincipiode que el análisis de los exosomas urinario se puede aplicar a el aldosteronismo.
Estudiosde validaciónposterioresseránnecesariosparadefinirsuusoenestudiosexperimentales
o clínicos. (30)