Este documento describe un estudio que evaluó la fosforilación del cotransportador de sodio-cloruro (pNCC) y la prostasina en exosomas urinarios como marcadores potenciales de hiperaldosteronismo. Se administraron diferentes dosis de aldosterona a ratas y se midieron pNCC y prostasina en exosomas urinarios. Los resultados mostraron que pNCC en exosomas urinarios es un marcador superior de hiperaldosteronismo en comparación con la prostasina, lo que sugiere que pNCC podría usarse como una

1. Cloruro en orina.
Docentes:
T.M. M. Cs. Elba Leiva
T.M M. Cs. Roxana Orrego
T.M. M. Luis Guzmán
Universidad de Talca
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Tecnología Médica
Integrante:
José Miguel Chávez Montecinos.
27 de agosto 2013.

2. Medición de cloruro en orina.
 Importante para el equilibrio de los electrolitos.
 Importante para mantener el equilibrio acido-básico de nuestro cuerpo.
Valor de referencia:
 El rango normal varia de 110-250(mEq/día).
Recolección:
 Orina 24hrs.
Tabla 1. Filtración, reabsorción y excreción de diferentes sustancias por los riñones.

3. Tipos de transporte a través de los túbulos renales.
 Solutos:
 Vía Transcelular: - Transporte activo.
- Difusión pasiva.
 Vía Paracelular : - Difusión pasiva.(arrastre del
disolvente).
 Agua: -Osmosis (vía transcelular o vía paracelular).
 Transporte del cloruro será el resultado de dos razones principalmente, por un
potencial eléctrico o un gradiente de concentración.
Fig. 1. Mecanismos de reabsorción.
Aumento de la cloruria. Disminución de la cloruria.
Enfermedad de Addison. Diabetes Insípida.
Aumento en la ingesta de sal. Disminución en la ingesta de sal.
Uso de antidiuréticos. Alcalosis metabólica.

4. Reabsorción del cloro en la nefrona.
 Túbulo Proximal.
 Reabsorción alrededor del 65% de agua, sodio, potasio, cloro y
bicarbonato.
 Asa de Henle.
 Segmento descendente fino. (20% del agua)
 Segmento ascendente fino.
 Segmento ascendente grueso.(25% de sodio, cloro y potasio).
 Túbulo distal.
 Primer segmento del T.D.
 Segundo segmento del T.D.
 Túbulo Colector.
 Células Principales.
 Células Intercaladas.
Fig. 3 Reabsorción del cloro en la nefrona.

5. Laboratorio.
 Fundamento: Reacción de Mohr.
 Titulación de los cloruros de la orina, con una solución valorada de nitrato de plata, en
presencia de un indicador.
AgNO3 + NaCl AgCl + NaNO3
2AgNO3 + K2CrO4 Ag2CrO4 + 2KNO3
Titulación con AgNO3.
Teóricamente:
1ml de AgNO3 2,906 g/L
reacciona con 1ml de NaCl 1 g/L.
Titulación de orina.
PMCl: 35g/mol.
PMNa: 23g/mol.
Se considera que :
170 g de AgNO3 reaccionan con 58,5 g NaCl
y 2,906g AgNO3 reaccionan con 1g de NaCl

6. The Phosphorylated Sodium Chloride Cotransporter
in Urinary Exosomes is Superior to Prodtasin as a
Market for Aldosteronism.
Universidad de Talca
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Tecnología Médica
 Docentes:
 T.M. M. Cs. Elba Leiva
 T.M M. Cs. Roxana Orrego
 T.M. M. Luis Guzmán
Nils van der Lubbe, Pieter M.Jansen, Mahdi Salih, Robert A. Fenton, Anton H. vanden Meiracker, et al.
Fecha de publicación: 30 de julio 2012.
Integrante:
José Miguel Chávez Montecinos.

7. Introducción.
 Exosomas urinarios.
 Cotransportador NaCl/K y cotransportador de NaCl (NCC). Exosoma urinario.
 Cotransportador de NaCl Exosomas urinario.
 En el riñon, NCC y ENaC (canal de Na epitelial) son activados por aldosterona.
 La forma fosforilada de NCC (pNCC) representa de mejor forma la actividad biológica de NCC.
 ENaC cantidades en exosomas urinarios. Prostasina actividad de ENaC.
Hipótesis:
El pNCC y prostasina en exosomas urinarios son marcadores de hiperaldosteronismo.
Objetivo:
Evaluar una infusión de aldosterona en distintas dosis y su efecto en pNCC y
prostasina en exosomas urinarios.

8. Metodología.
 Estadística.
 Los resultados se expresaron como una media ± error estándar.
 Se utlizo Student t, para el grupo de comparaciones y la prueba de post hoc para el análisis de
varianza.
 P ≤ 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Dosis alta de aldosterona (100μg/Kg/d).
Vehículo, a través mini bomba osmótica.
Dosis alta de aldosterona (100μg/Kg/d).
Vehículo, a través mini bomba osmótica.
Dosis normal de aldosterona (50μg/Kg/d).
Dosis normal de NaCl (0,5%).
Dosis baja de NaCl (0,001% a 0,002%).
 Tres estudios con ratas.
 1er Estudio: 10 ratas.
 2° Estudio: 15 ratas.
 3er Estudio: 12 ratas.
Las ratas fueron alojadas en
jaulas metabólicas para
recolectar la orina de 24hrs.
 Aislamiento y análisis de inmunotransferencia de exosomas urinarios.
 Aislación de exosomas urinarios por un proceso de centrifugación de 2 pasos. Primero se centrifugo a
17000g x 15min a 37°C y luego se sometieron la muestras a una ultracentrifugacion a 200000g x
105min a 37°C. El precipitado se suspendió en un tampón de aislamiento.

9. Resultados.
Primer estudio. Segundo estudio. Tercer estudio.

10. Conclusión.
 El incremento de NCC en exosomas urinarios por una dieta baja en consumo de sodio, fue
similar a un estudio realizado el 2010 por Esteva-Font y colaboradores.
 Se ha demostrado anteriormente que existen varias subunidades de prostasina, solo algunos de
los cuales son sensibles a aldosterona. (Olivieri y colaboradores, 2005).
 La prostasina es solo una de las proteínas presente en una compleja cascada de señalización
que regula ENaC. (Saudararajan R y colaboradores, 2009)
Discusión.
 En los exosomas urinarios, pNCC fue superior a la prostasina como indicador de aldosteronismo.
Por lo tanto, permite la evolución posterior de la aplicabilidad del exosoma urinario como una
herramienta de diagnostico no invasiva en un aldesteronismo.