Este documento presenta un estudio que reexamina el modelo de replicación mitocondrial en mamíferos mediante el uso de microscopía de fuerza atómica y electroforesis bidimensional. Los autores encontraron evidencia de orígenes alternativos de la cadena liviana del ADN mitocondrial, lo que contradice modelos previos que proponían una replicación asimétrica. Esto sugiere que la replicación ocurre por desplazamiento de hebras con orígenes alternativos de la cadena liviana, en lugar de un mecanismo acoplado de

1. REPLICATION OF
MITOCHONDRIAL DNA
OCCURS BY STRAND
DISPLACEMENT WITH
ALTERNATIVE LIGHT-STRAND
ORIGINS, NOT VIA STRAND-
COUPLED MECHANISM
Thimothy A. Brown, Ciro Cecconi, Ariana N.
Tkachuk, Carlos Bustamante y David A. Clayton
Cornaglia Schaffer, Mayra

2. Estudios nuevos propusieron un modelo
de replicación bidireccional en tejidos
Puso en duda el modelo de
replicación por desplazamiento
Objetivo: demostrar lo contrario

3. COMPARACIÓN ENTRE AMBOS
MODELOS PROPUESTOS

4. PAPERS ANTERIORES
 Re-examinan el modelo de replicación
mitocondrial en mamíferos, contradiciendo toda
evidencia previa.

5. ¿QUÉ DETECTARON?
 Usando electroforesis bidimensional de agarosa,
se encontraron con y-arcs entre las dos
secuencias de origen, concluyendo que era
inconsistente con el modelo asimétrico.

6. ¿CÓMO JUSTIFICAN?
 Atribuyen resultados anteriores a errores
experimentales, que llevan a la
degradación preferencial de la cadena
retrasada por un contaminante en las
muestras con actividad RNasa.

7. Estudios Electroforesis 2D
Anteriores
-Microscopía de
Fuerza Atómica
Estrategia (AFM)
-Electroforesis 2D
-Sólo se evidencia la
replicación por
Resultado desplazamiento
s -Se reveló la presencia de
orígenes alternativos de la
cadena liviana (L)

8. AFM (ATOMIC FORCE MICROSCOPE)
 Instrumento mecánico
óptico que permite el
mapeo topográfico de una
muestra, con altísima
resolución (del orden de los
nanometros)

9. PROTOCOLO DE PREPARACIÓN DE
MUESTRAS PARA SU REVELADO
POR AFM
 Con el objetivo de mejorar la visibilidad
de los segmentos de DNA de simple
cadena al microscopio, se propuso incubar
las muestras con SSBp.
 El protocolo demostró ser funcional en
muestras de M13 (B).
 Se aplicó entonces el mismo protocolo a
las muestras de mtDNA (C).
 Se demostró además que el protocolo no
afecta a la correcta interpretación de los
resultados.

10. VISUALIZACIÓN DIRECTA DEL
MTDNA POR AFM

11. INTERMEDIARIOS REPLICATIVOS
DEL MTDNA
Azul: hebra parental
Rojo: ssDNA + SSB
Celeste: cadena H
naciente
Verde: cadena L
naciente

12. LONGITUDES PERCEPTIBLES DE
LAS REGIONES DESPLAZADAS DE
EXP-D Y GPC

13. POSIBLES ORÍGENES DE LA
CADENA LIVIANA
Azul: hebra parental
Rojo: ssDNA + SSB
Celeste: cadena H
naciente
Verde: cadena L
naciente

14. ANÁLISIS POR ELECTROFORESIS 2D:
Y-ARCS

15. ¡¡Muchas gracias
por su atención!!
 ¿Alguna pregunta?