auxonograma zimograma

1. UNIVERSIDAD NACIONAL
“PEDRO RUIZ GALLO”
PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DEL GENERO
Candida
INTEGRANTES:
DOCENTE:
CURSO:
SEMESTRE ACADEMICO:
• Piedra Alcalde Jefferson Alberto .
• Rojas Rojas Maicol Sleiter.
Msc. Fransk Amarildo Carrasco Solano.
Microbiologia General.
2020 – II.

2. IDENTIFICACION BASADA EN METODOS DE ASIMILACION DE
NUTRIENTES
AUXONOGRAMA CONVENCIONAL:
Se fundamenta en la aplicación por separado de diferentes nutrientes,
hidrocarbonados o nitrogenados, sobre un medio sintético base para apreciar el
crecimiento selectivo de una levadura en la cercanía de los nutrientes
necesarios para su desarrollo.
Para su realización pueden emplearse soluciones acuosas esterilizadas por
filtración, cilindros de Oxford en pocillos hechos en el agar o bien discos de
papel absorbente empapados con el nutriente. Sin embargo, las pruebas de
asimilación en medios líquidos no ofrecen ninguna ventaja adicional sobre los
medios sólidos, resultando mucho más laboriosas y costosas
.

3. MEDIO DE CULTIVO BASE
Se prepararan según la técnica habitual y no necesitan ajustar
el pH. Se expenden deshidratados como medios base de
levaduras. Los más utilizados son los siguientes:
MEDIO SIN CARBONO MEDIO SIN NITROGENO
Sulfato amónico (5 g/l)
Fosfato monopotásico (1 g/l)
Sulfato de magnesio (0,5 g/l),
Agar (20 g/l)
Glucosa (20 g/l)
Fosfato monopotásico (1 g/l)
Sulfato de magnesio (0,5 g/l)
Agar (20 g/l).

4. PROCEDIMIENTO
 1. La levadura en estudio se siembra previamente en caldo glucosado de Sabouraud más
cloranfenicol a 28 °C durante 48 h.
 2. Agitar para mezclar el cultivo y tomar 1 ml como inóculo del medio sintético fundido. Enfriar a
50 °C, mezclar y verter en placa.
 3. Preparar las soluciones estériles de los nutrientes, los azúcares al 10% y las sustancias
nitrogenadas al 1%.
 4. Una vez solidificado el agar, y con la ayuda de un tubo de cristal, agujerear 5-6 pocillos por
placa. Sobre cada pocillo se vierten dos gotas de los distintos nutrientes en estudio.
 5. se utilizan discos de papel absorbente, deben confeccionarse de distintos colores o rotularse
previamente. Una vez esterilizados, y antes de su empleo, se empapan con dos gotas de las
soluciones acuosas de los nutrientes (al 20% para los azúcares y al 2% para los substratos
nitrogenados). Se secan en estufa y se aplican sobre el medio con pinzas estériles.
 6. Incubar a 28 °C. (2-4 días).

5. INTERPRETACION
En la zona circulante a los
pocillos o los discos, crecen
abundantes colonias de
levaduras si utilizan el
nutriente correspondiente;
por el contrario, no aparecen
en los contornos de los no
utilizados

6.  ZIMOGRAMA CONVENCIONAL
Esta prueba permite determinar la capacidad de fermentar distintos azúcares, la prueba más
importante y al mismo tiempo la más rápida para identificar levaduras. Consiste, en sembrar un medio
básico al cual se agrega un glúcido y un indicador de pH. La fermentación se evidencia con la
producción de acidez y de gas.
MEDIO DE CULTIVO PARA ZIMOGRAMA g/l
extracto de levadura, 4.5
peptona, 7.5
púrpura de bromocresol 6%, 2ml
100 ul de una solución al 20% de los siguientes azúcares: glucosa, maltosa, galactosa, lactosa y
trehalosa

7. TECNICA
1- Distribuir en tubos de hemólisis con campanitas Durhan, 2ml de medio para zimograma
2- Expulsar el aire colocando los tubos en baño María hasta la ebullición durante unos minutos
y dejar enfriar.
3- Sembrar 50 ul de una suspensión de levaduras con opacidad equivalente al tubo Nº3 de
Mac Farland.
4- Incubar a 28ºC durante dos semanas.

8. INTERPRETACION
La fermentación
positiva se observa
por la acumulación de
gas (CO2) en la
campanita y el viraje
del indicador del
violeta al amarillo.

9. METODOS ENZIMATICOS:
Se detectan 2 enzimas: L- prolina aminopeptidasa y βgalactosaminidasa mediante métodos
Fluorogenicos y Cromogenicos.
 Tienen una buena sensibilidad y especificidad.
 Lectura entre 5 min – 48 hr de incubación.
 Cromogénicos:
Se trata de medios diseñados para aislar e identificar simultáneamente especies del género
Candida, tras 24-48 h de incubación a 35-37ºC.

10. 1. (CHROMagar)

11. 2. Candida ID (bioMérieux)

12. 3. Albicans ID2 (bioMérieux)
4. Cromogen Albicans (Biomedics): 5. CandiSelect (BioRad):

13.  Fluorogénicos: Facilitan la
identificación de C. albicans en los
cultivos primarios:
1. Fluroplate Candida (Merck):
1. Agar SDCA-MUAG (Biolife):