bacterias

1. Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología.
Laboratorio de Microbiología General.
Determinación del Punto Térmico Mortal
(PTM) y del Tiempo Térmico Mortal (TTM)

2. Introducción
La temperatura es un parámetros ambiental importante que condicionan el crecimiento de
microorganismos, el frio tiene un efecto bacteriostático (recuperan su actividad si regresan a su
temperatura optima), por el contrario el calor puede ser bactericida (afecta las proteínas funcionales
o estructurales del MO) aunque no todos son igualmente sensibles al calor.

3. Temperatura
 La resistencia a la temperatura varia en cuanto a los diferentes microorganismos.
 La utilización de temperatura como bactericida y su eficacia depende de dos factores:
Punto térmico mortal
(PTM)
Tiempo Térmico Mortal
(TTM)

4. Factores que afectan el PTM y TTM

5. Punto térmico mortal
 Temperatura mínima para que todos los organismos de una población mueran en 10
minutos.

6. Tiempo térmico mortal (TTM)
 Tiempo mínimo de exposición requerido para lograr la muerte de una población a una
temperatura determinada (70ºC).

7. Soportes
Agua
Buen conductor de
temperatura.
Distribución de temperatura
uniforme en célula.
Leche
Aceite engloba las células
vegetativas o esporas.
Provoca menor conductividad
térmica por ser lípidos.

8. Soportes
Sacarosa
Protección de esporas por
deshidratación parcial del
protoplasma.
Jugo de naranja
El efecto del calor es
mayor si el pH es bajo.

9. Objetivo
Determinar el TTM y PTM a dos microorganismos diferentes en cuatro medios de suspensión
diferentes.

10. Material
 Tubos de 13x100 mm y de 16x150 mm
 Pipetas estériles de 1 y 5 ml
 Medios de cultivo, con gelosa nutritiva
 Baños de agua a 50, 60, 70, 80, 92 °C
 Tubos de 16x150 mm con 15ml de soluciones de soporte: Agua destilada estéril, Leche
descremada 5%, Sacarosa 50%, Jugo de naranja.
 Cepas: Cultivos de Escherichia coli y Bacillus subtilis.

11. Agregar 1 mL de alguna
de las cepas a cada uno
de los soportes
Determinación del Punto
Térmico Mortal
6 tubos, marcados y
con diferentes
temperaturas T,
50,60,70,80 y 92 °C
Añadir 1.0 mL de la
suspensión a cada
tubo
Introducir cada tubo a
baño de agua a la T
correspondiente por 10
min, el testigo
permanecerá a T.A.
Sembrar por estría
abierta en cajas de
gelosa nutritiva.
Incubar a
37 °C por
24 h.
Preparación de la
muestra

12. Determinación del Tiempo Térmico
Mortal
6 tubos, marcados y
con diferentes
tiempos (0),
5,10,15,20 y 30 min.
Añadir 1.0 mL de la
suspensión a cada
tubo
Introducir los tubo a
baño de agua a 70 °C
el testigo permanecerá
a T.A.
Sembrar por estría
abierta en cajas de
gelosa nutritiva.
Incubar a
37 °C por
24 hrs.
Retirar a los tiempos
correspondientes.

13. Resultados
Temperatura aplicada durante 10 minutos
Cepas Soporte Testigo 50 °C 60 °C 70 °C 80 °C 92 °C PTM
Escherichi
a coli
Agua + + - - - - 60 °C
Jugo de
naranja
+ + - - - - 60 °C
Leche + + - - - - 60 °C
Sacarosa + + + + - - 80 °C
Bacillus
subtilis
Agua + + - - - - 60 °C
Jugo de
naranja
+ + - - - - 60°C
Leche + + - - - - 60 °C
Sacarosa + + - - - - 60 °C

14. Temperatura aplicada 70 °C
Cepas Soporte Testigo 5 min 10 min 15 min 20 min 30 min TTM
Escherichi
a coli
Agua + - - - - - 5 min
Jugo de
naranja
+ - - - - - 5 min
Leche + + - - - - 10 min
Sacarosa + - - - - - 5 min
Bacillus
ubtilis
Agua + - - - - - 5 min
Jugo de
naranja
+ - - - - - 5 min
Leche + - - - - - 5 min
Sacarosa + - - - - - 5 min

15. Cuestionario
1. De acuerdo con los resultados ¿Cuál soporte ofrece mejor protección al microorganismo de
prueba?
Leche
2. ¿A qué se puede atribuir tal protección?
El aceite puede englobar las células vegetativas o las esporas y protegerlas de la acción dañina
del calor que le llega con dificultad debido a la menor conductividad térmica.
3. ¿De qué otros factores dependerá la determinación del TTM y PTM?
pH, concentración de solidos, tipo de microorganismo, estado fisiológico del microorganismo,
tamaño de población, medio de cultivo.

16. Bibliografía
 Villaverde Carmen. 2003. Microbiología. 1ra Edición. Editorial Thomson.
España. Página 22
 https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm
 http://academico.upv.cl/doctos/ENFE-6017/%7B44267BAB-3ED6-4037-8837-
A38A58668782%7D/2012/S1/(Texto%20Guia%20de%20Laboratorio%20de%2
0Microbiolog%C3%ADa%20UPV).pdf