En 3 oraciones o menos: Meselson y Stahl realizaron un experimento para determinar si la replicación del ADN en Escherichia coli era conservativa, semiconservativa o dispersante, marcando el ADN bacteriano con isótopos de nitrógeno pesados y ligeros y midiendo la densidad del ADN replicado. Los resultados mostraron que el ADN tenía una densidad intermedia después de una generación, lo que demuestra que la replicación es semiconservativa, con cada nueva molécula de ADN conteniendo una cadena parental y una cadena nueva. Al separar

1. The Replication of DNA in
Escherichia coli.
Messelson y Stahl (1957)
Presentación hecha por Kimberly Navarro Vélez
Estudiante de Biología
Universidad del Valle

2. Meselson y Stahl (1957) realizaron un experimento para
probar como era la replicación de Eschericia coli. Para ello
plantearon un experimento que probase si la replicación
era conservativa, semiconservativa o de tipo dispersante.
Se utilizaron dos preceptos:
*El isótopo 14N es el mas abundante del Nitrógeno y es
compatible con el ADN.
*El isótopo 15N es compatible con el ADN y es más pesado
que el 14N
Meselson, M. and Stahl, F.W. (1958). «The Replication of DNA in Escherichia coli». PNAS
44: pp. 671–82.

4. Cultivo de Cultivo de
Bacterias con Bacterias con
15N 14N
Centrifugar en gradiente de Centrifugar en gradiente de
Cesio Cesio
ADN con mayor
densidad que el ADN más ligero
de 14N

5. Gradiente de Cloruro de Cesio
• Cuando se centrifuga el Cloruro de Cesio se
crea una solución con una menor densidad en
la parte superior que aumenta hacia la parte
de abajo del tubo eppendorf
• Cuando una molécula X se adiciona a esta
solución, esta se mueve a lo largo del tubo
hasta que encuentra el punto en que su
densidad y la de la solución son iguales.
Observándose entonces una franja.

6. • Por otra parte, la absorbancia a 260 nm es
directamente proporcional a la cantidad de
moléculas de ADN.

7. En esta figura se observa la franja y el pico de absorbancia del ADN de las bacterias
cultivadas en un medio con isótopo N-14 y N-15.

8. Bacterias con
15N en su
ADN
cultivadas en
medio con
14N
Se dejó replicar media y
una generación
Se extrajo ADN y se
comparó
ADN con
densidad
intermedia

10. • Cuando se dejó replicar por una
generación, se observó una franja
(AMARILLA EN EL ESQUEMA) que no
tenía una densidad tan baja como la del
isótopo N-14 ni tan alta como la del N-15.
Esto es inconsistente con la replicación
de tipo Conservadora, ya que de ser así, a
pesar de que las bacterias estáran
expuestas al medio N-14, estas
mantendrían el isotopo N1-15 en sus
moléculas de ADN.

11. ¿Replicación semiconservadora o de tipo
dispersante?
Replicación semiconservadora Replicación de tipo dispersante
Una cadena 15N (parental) y una Las dos cadenas con fragmentos
cadena 14N (sintetizada) de 15N y14N
Densidad intermedia
Para comprobar los dos modelos de replicación, se
observó el ADN de las bacterias luego de 2 y 3
generaciones.

12. Bacterias
cultivadas en
15N se dejo
replicar varias
veces.
Se dejó replicar dos veces
en un medio 14N
Se analizó el ADN extraído

13. • Las células de la segunda generación contenían
cantidades iguales de ADN con dos densidades
distintas:
1. IGUAL a la encontrada con una sola replicación en
un medio con 14N (Densidad INTERMEDIA)
2. IGUAL a la producida exclusivamente con 14N.
(Densidad BAJA)
Inconsistente con la replicación
de tipo dispersante

14. • Si fuese de tipo dispersante, entonces:
El ADN producido tendría una densidad única e inferior
a la de una sola generación(densidad intermedia), pero
mayor que la de 14N (Densidad baja), ya que el ADN
original con 15N se habría repartido de forma uniforme
entre todos los filamentos de ADN.
Entonces, la replicación es
de tipo Semiconservativa

15. • Para re-comprobar que la replicación fuese de
tipo Semiconservativa, Messelson y Stahl
tomaron el ADN de las bacterias de la primer
generación y lo desnaturalizaron usando calor.
Luego separar las dos cadenas, se centrifugaron
en gradiente de Cloruro de Cesio y se observó
que se crearon dos franjas, una correspondiente
a la marca del isótopo N-14 y otra
correspondiente a la marca del isótopo N-15.
• De este modo se comprobó que una cadena (de
origen parental) presentaba el isótopo N-15 y la
otra cadena (sintetizada) presentaba el isótopo
N-14.

16. Las Cadenas
oscuras representan
el ADN con isótopo
N-15.
La cadena blanca
representa el ADN
con isótopo N-14