células que soportan la producción del vector retroviral Células diana Células productoras del vector Células diana infectadas Expresión del gen terapéutico Integración del vector en el genoma de la célula diana Células diana modificadas Expresión estable del gen terapéutico Células diana modificadas Expresión estable del gen terapéutico Células diana modificadas Expresión

1. Sesión II:
Terapia Génica
Eva García Alegría

2. Sumario
CAPITULO I
 HISTORIA
 CONCEPTOS PREVIOS
Ingeniería genética
Técnica del ADN recombinante
Transferencia Génica
Eficacia de Transfección
Genes integrados/ no integrados
 TERAPIA GENICA
 OBJETIVOS
 COMPONENTES

3. Sumario
CAPITULO II
 TIPOS DE TERAPIA
En cuanto a las células diana
En cuanto a la técnica empleada
 VECTORES
Características de elección
Marcaje celular
Clasificación de los vectores.
Vectores no virales
Vectores virales

4. Sumario
CAPITULO III
 Estrategias con Ácidos nucleicos
Terapia antisentido
Reparación génica
Ribozimas
 Aplicaciones de la terapia génica
Enfermedades monogénicas
Cáncer
VIH
 Jurisprudencia y ética en Terapia génica

5. HISTORIA
•Enero 1989 Estados Unidos aprueba el protocolo
clínico para insertar un gen extraño en las células del
sistema inmunitario de pacientes de cáncer. la
“tecnología para insertar genes en humanos había
llegado”.
•Septiembre de 1990, se aprobaba el primer ensayo
clínico de auténtica terapia génica, introducir el gen que
codifica para la enzima adenosin desaminasa (ADA) en
niños que padecen una inmunodeficiencia combinada
severa (SCID). Febrero 1991 se autorizó también en
Italia
•En 1995 ambos grupos de investigación publicaban los
resultados de su experimentación clínica: eficacia de la
técnica de TG ex vivo en los “niños burbuja”.

6. HISTORIA
•A partir de 1990 los protocolos experimentales de
TG aumentaron en un progreso continuo.
El RAC estimaba 567 pacientes incluidos en los 106
experimentos aprobados de los que sólo una pequeña
fracción de ellos están encaminados a la corrección
de genes defectuosos, la mayor parte están diseñados
para inducir en células específicas, proteínas que
hagan a estas células vulnerables al ataque por el
sistema inmune de los pacientes.

7. Conceptos previos
Ingeniería genética
La manipulación de la información genética, con miras
al análisis genético o al mejoramiento de una especie.
Técnica de ADN recombinante
Transferencia génica
Técnicas de genética molecular que permiten intercalar un
También conocido como Transducción ó tranfección:
segmento de ADN extraño en un ADN receptor. una
es la introducción de material genómico en
célula
Eficacia de transferencia:
Factor que determina si los genes introducidos en la
células se expresan en cantidad adecuada. Dependerá
en gran manera de la integración

8. Conceptos
Genes integrados en el cromosoma.
Perpetuarse por replicación cromosómica pasando a la
progenie expresión estable a largo plazo.
Interesante en células madre, población inmortal de
células que se perpetúan a sí mismas y de las que derivan
el resto de células de un tejido.
Inserción al azar. Enorme variabilidad de
localización, pudiendo no expresarse.
 Puede provocar la muerte celular por integrarse en
la secuencia de un gen crucial inactivándolo.
 Riesgo de cáncer por variar los patrones de
expresión de los genes de proliferación celular.
Inactivación gen supresor ó activación de un oncogen

9. Conceptos
Genes no integrados:
Quedan en la célula como elementos extracromosómicos
(episomas).
 En células en división activa puede darse una
segregación diferente en las células hijas del gen
introducido. Varia la expresión a largo plazo.
 Difícil curar enfermedades que requieran una
expresión estable, pero efectivo en terapias como la del
cáncer que persiguen una acción del gen hasta la
eliminación del tumor.

10. Transferencia génica realizada en células de
individuos humanos con el fin de corregir
deficiencias heredadas ó adquiridas y
obtener así un beneficio terapéutico

11. OBJETIVOS
Complementar ó sustituir el defecto en la función
del gen introduciendo una copia del gen normal en
estas células. “Inserción génica ó cirugía génica”
Inhibir ó bloquear el funcionamiento de genes que
contribuyen al desarrollo de la enfermedad. Ej.
Terapia del cáncer frente a oncogenes.
“Modificación génica”
Introducir la información que permita a la célula
sintetizar una proteína con efecto terapéutico. Ej:
estimulación del sistema inmune

12. Componentes
• Gen de interés terapéutico
• Célula diana: célula a la cual va dirigida la
transferencia génica.
• Fuertes para resistir la manipulación
• Susceptibles de ser extraídas del organismo humano y
reintroducidas en él con facilidad
• Larga vida mejor toda la vida del paciente, (médula ósea,
la piel e hígado las que más se ajustan a estos criterios, son
las más firmes candidatas para la terapia génica).
• Vector: sistema ó vehículo utilizado para transferir
el material genético al interior de la célula diana

14. Tipos de Terapia Génica

15. Atendiendo a la célula diana
Terapia génica germinal:
Dirigida a modificar el acervo genético de las
células germinales, implicadas en la formación de los
gametos y por tanto transmisibles a la descendencia.
Terapia génica somática:
Dirigida a modificar las célulcas somáticas que
constituyen un organismo. Dicha modificación no es
transmisible a la descendencia. Actualmente UNICA
TERAPIA CON ENSAYOS CLINICOS

16. Atendiendo a la metodología aplicada
• In vivo:
El material genético es introducido mediante vectores
directamente en las células diana del individuo a
través del torrente circulatorio. No hay extracción
previa ni manipulación in vitro.
• In situ:
La modificación genética de las células del
paciente se realiza introduciendo el ADN
directamente en el propio órgano defectuoso del
individuo (fibrosis quística, distrofia muscular de
Duchenne o la supresión de tumores por “suicidio”
celular)

17. • Ex vivo:
Las células a tratar son previamente extraídas,
aisladas y crecidas en cultivo realizando la
transferencia génica in vitro. Se devolverán al
paciente solo las poblaciones celulares
seleccionadas del cultivo en las que se ha
comprobado la integración y correcto
funcionamiento del transgen. Ej. “Niños Burbuja”

18. Qué metodología elegir
 Rasgos fisiológicos del tejido diana
 Naturaleza del tejido respecto de los genes a
transferir
 Facilidad de transferir los genes dentro de las
células
 La habilidad para llegar al tejido
 La respuesta inmune frente al método de
transfección

19. V
E
C
T
O
R
E
S

20. Características de
elección de un vector
• Buena eficiencia en la transferencia
génica.
• La expresión del transgen sea duradera.
Dependerá de el tipo de integración del
material génico.
• Tamaño del ADN capaz de transducir.
Limita mucho el desarrollo de vacunas.
• Baja inmunogeneicidad.

21. Marcaje celular
Permite identificar y seleccionar in vitro las células
diana que hayan incorporado el transgen ó
comprobar el grado de transferencia in vivo.
Marcaje simple: con gen de resistencia a antibiótico
(ej: neomicina)
Marcaje doble: cuando se requiera suspender un
tratamiento se añade al marcaje simple un gen de
selección negativa in vivo. , Ej. enzima Timidina
Quinasa del Herpes simple, capaz de fosforilar el
Ganciclovir, activando y provocando la muerte de la
célula transfectada.

22. Clasificación de vectores
Vectores No virales Vectores Virales
 Métodos químicos:
–fosfato cálcico Retrovirus
–Liposomas
– Mediados por receptores
Adenovirus
Métodos físicos
–Biolística ó disparo de Herpes virus
partículas
–Microinyección
–Electroporación Virus adenosasociados

23. VECTORES NO VIRALES
METODOS QUIMICOS
METODOS FISICOS

24.  Primeros vectores desarrollados
 ADN exógeno integrado en un plásmido que se
mantendrá de manera episómica, independiente
del genoma de la célula diana.
 Sencillos de producir y más económicos
 No tienen limitaciones de tamaño del ADN
vehiculizado
 Poca toxicidad no inmunogénicos
 Baja eficiencia de transducción
Algunos solo validos in vitro

25. Métodos Químicos
1.Fosfato cálcico:
Los iones Ca 2+ precipitan el ADN provocando su
entrada por endocitosis en el interior de la célula
 No provoca toxicidad
 Expresión transitoria del
transgen
 Eficacia de transfección del
10%
 Utilización sólo en cultivo ex
vivo

26. Métodos Químicos
2.Liposomas catiónicos:
Bolsas rodeadas de membrana lipídica capaces de
interaccionar con los fosfatos del ADN, condensándolo y
con las cargas negativas de la membrana celular mediante
enlaces electroestáticos.
 Libera el ADN en el citoplasma, evitando la
degradación lisosomal.
 El ADN compactado queda protegido de nucleasas
 No tiene límite de tamaño de ADN a transducir
 Baja inmunogenicidad
In vivo eficacia de transfección disminuida.

27. Métodos Químicos
3.Mediado por receptores :
Se insertan partículas que serán reconocidas por
receptores presentes en el tipo celular diana. Permite un
interacción específica transportador/célula.
Se les asocian moléculas “fusiógenas” que actúan al
acidificarse el medio desestabilizando la membrana del
endosoma evadiendo así la acción lisosomal.
Endocitosis endosoma acidificación del
interior lisosoma degradación.

28. Métodos Físicos
1.BIOLISTICA
ADN situado en gotas de 1-3
micras de oro o tungsteno y
aceleradas por gas ó por
descarga eléctrica.
Fácil manejo.
Varias integraciones en un disparo
Muerte celular en la zona
Capacidad penetración limitada
Variable eficacia de la
expresión
Necesidad de muchas dosis.

29. Métodos Físicos
2. MICROINYECCION
ADN introducido en el núcleo de las células gracias a un
micromanipulador. Se utiliza frecuentemente en estudios
ex vivo
 Evita la degradación lisosomal y citoplasmática
Alta eficiencia en la expresión
 laborioso, necesita células aisladas.
Existen células que no sobreviven

30. Técnica del ADN desnudo
Inyección directa de la parte codificadora a un tejido. In
vivo
ADN introducido con una solución salina y administrado
intramuscularmente. Se desconoce el mecanismo por el
cual entra en la célula.
Método directo, simple, económico
Baja toxicidad
Utilización en Vacunas al alcanzar respuesta
inmunológica
Baja eficacia transfección. No se integra en el genoma
Expresión génica corta (días)

31. Métodos Físicos
3.ELECTROPORACION
Apertura de los poros de membrana mediante la
aplicación de corriente eléctrica, permitiendo la
entrada del gen.
 Células pueden ser
aisladas y sometidas a
control. Selección de las
mejores, cultivadas antes de
implantarlas al paciente.
 Muchas células no soportan
el choque eléctrico. Indicado
en células con alta tasa de
proliferación

32. V
I
R
A
L
E
•RETROVIRUS S
•ADENOVIRUS
•ADENOASOCIADOS
•HERPEXVIRUS

33. Formación de virus defectivos:
Eliminación de 1 ó mas genes virales
imprescindibles para la replicación y sustitución
por el gen terapéutico.
Mantendrá la capacidad de infectar pero no la
replicación y virulencia.
Las secuencias necesarias para la replicación se
añaden en células ayudantes que soportan la
producción del vector, funcionando en trans.
 Vectores más utilizados actualmente.
 Elevada eficacia de transfección ( incluso 100%)

34. Limitaciones de su uso:
Tamaño del gen terapéutico en función del
tamaño del virus.
Transferencia y expresión de genes virales
Transferencia no deseada del virus nativo
Activación de un virus patógeno
Activación de un oncogen por recombinación
génica con el genoma del huésped
Reacción inmunitaria in vivo por muerte de las
células modificadas.

35. RETROVIRUS

36. Características
Genoma es ARNss y durante su ciclo vital utiliza la
maquinaria replicativa de la célula huésped para lo
cual se retrotranscribe a ADNds integrándose en el
genoma.
Organización del genoma: 10Kb que codifican 3 genes
gag: antígenos, proteínas de cápsida y matriz
pol: transcriptasa inversa, proteasa e integrasa
env: proteínas de la envoltura del virus
LTRs: Extremos del genoma (ADN ya) con actividades
promotoras y secuencias para la integración.

37. Vector retroviral
Virus defectivo para genes
de proteínas estructurales,
gag, pol y env.
Extremos LTRs
Secuencia de
empaquetamiento
Unidad transcripcional con
el gen de interés.
Línea de células envase: contiene copias integradas de
los genes virales pero no la señal de empaquetamiento,
permite así el desarrollo del vector.

38. Ventajas e inconvenientes
 Estrategia pionera en técnicas ex vivo.
 Eficaz transducción.Integra hasta 8 kb tamaño.
 Integración y expresión persistente
 La mayoría se integran en células que se replican
(excepto el VIH), lo cual limita su uso como vector.
 Derivación oncogénica por incorporación de
protooncogenes ó por mutagénesis insercional activando
un oncogen adyacente.
 Precaución para asegurar la ausencia de virus de
replicación competente.

39. A
D
E
N
O
V
I
R
U
S

40. Características
Genoma es ADNds lineal. Su ciclo vital requiere la
división celular y provoca una infección productiva de
células tolerantes durante la cual se acumulan en el
núcleo grandes cantidades de virus. Están asociadas
con enfermedades benignas en humanos
Organización del genoma: 35 Kb con varias unidades
de transcripción, proceso que se realiza de manera
secuencial.
Genes E1 activa otros genes tempranos
Genes E2 proteínas involucradas en la replicación ADN
Genes E3 funciones para detener mecanismos de defensa
Genes E4 funciones regulan la transcripción entre las fases
primaria y secundaria del ciclo viral

41. Vector adenoviral
Deficientes para
replicarse por lo que
necesitan un sistema
celular de
complementación que
produzca los elementos
E1 que han sido
suprimidos. Línea
celular humana 293 que
aporta las proteínas.

42. Ventajas e inconvenientes
 Puede insertar 20Kb
 Capaces de transferir el gen en amplia cantidad
de células y tejidos
 Fáciles de producir en grandes cantidades
 Infecta células en reposo ó en división
 Expresa varias proteínas virales inmunogénicas,
separándose más rápido el vector de las células por
la repuesta del hospedador. limitando la duración de
la expresión y la capacidad de repetir la dosis

43. ADENOASOCIADOS “AAV”

44. Características
Genoma ADNs lineal. Virus muy pequeño y simple..
Requiere la coinfección con adenovirus u otros para
replicarse.
Extendido en humanos pero no asociado a enfermedad
conocida. Se integran de manera específica en el
cromosoma 19 en ausencia de virus ayudante.
Organización del genoma muy simple, solo 2 genes
rep: proteinas involucradas en replicación e
integración
cap: 3 proteínas estructurales
Extremos TR

45. Vector AAV
Vectores muy simples
con solo las secuencias
TR.
Lleva consigo la
introducción de un
plásmido que codifica
rep y cap para proveer
de las funciones de virus
ayudante.

46. Ventajas e inconvenientes
 Expresión a largo plazo en células que no se dividen.
 Estructuralmente simples.
 Provocan menor respuesta del hospedador
 Tamaño solo de 4 Kb
 Transducen células infectadas por Adenovirus
 Difíciles de desarrollar en grandes cantidades
Se están realizando nuevos VAA que combinen la
habilidad de integrarse con mayores fragmentos ADN

47. HERPESVIRUS

48. Características
Genoma ADNds lineal. Virus de 100-250Kb.
 Gamma: infección latente en células en división,
replicándose con la célula y siendo heredado.
 Alfa: no pueden mantener la infección latente en células
en división. Puede mantenerse de manera episómica
indefinidamente en células de larga duración (ej: neuronas
sensoriales en HSV) Tropismo específico por el SNC
 Beta: desconocimiento de la naturaleza de la infección
latente
Organización del genoma 2 trozos de ADNds unidos
llamados molécula L y molécula S, las cuales se unen por
sus secuencias terminales TRL y TRS. Pueden unirse de
4 formas diferentes “isómeros”

49. Vector Herpesvirus
Gran variedad en función
del tipo de herpes virus.
El más conocido es el del
herpes simple HSV con
los promotores LAT
como elementos promesa
para dar expresión
suficiente en diferentes
tipos de neuronas.
Los genes virales
eliminados se introducen
en trans en la célula
ayudante.

50. Ventajase inconvenientes
 Capaces de llevar grandes secuencias de ADN.
 Pueden provocar infección latente de larga duración
sin integrarse (episoma). Gran variación dentro de esta
familia.
 Baja eficiencia transducción
 Expresión transitoria del gen.
 Gamma: asociados a daños proliferativos, incluso
malignidad. Identificar los genes responsables y
eliminarlos

51. Sumario
CAPITULO III
 Estrategias con Ácidos nucleicos
Terapia antisentido
Reparación génica
Ribozimas
 Aplicaciones de la terapia génica
Enfermedades monogénicas
Cáncer
VIH
 Jurisprudencia y ética en Terapia génica

52. ESTRATEGIAS
CON ACIDOS
NUCLÉICOS
 Terapia antisentido
 Reparación génica
 Ribozimas

53. TERAPIA ANTISENTIDO
Oligonucleótidos complementarios a secuencias
específicas de un determinado ARNm (secuencia sentido)
bloqueando su traducción mediante la formación de
heteroduplex y estimulando la Ribonucleasa H.
Se han desarrollado también secuencias antigen
“tríplices” que interaccionan con ADN formando triples
hélices que bloquean la transcripción..
 Potencial terapéutico en enfermedades autoinmunes,
el cáncer y el SIDA
 Corta vida media en la circulación sistémica
 Dificultad para acceder funcionalmente al
citoplasma y al núcleo celular. Se cambian grupos
fosfato para dejarlos sin carga y que penetren mejor.

54. TERAPIA ANTISENTIDO

56. REPARACIÓN GÉNICA
Objetivo: reparar genes alterados por mutación
puntual conocida.
Método: la activación de los mecanismos celulares
de reparación del ADN.
Técnica: diseño de oligos específicos para
secuencias genómicas adyacentes a la mutación y
que llevan un agente capaz de lesionar el ADN

57. RIBOZIMAS
ARN con actividad enzimática
catalizan reacciones de rotura y ligamiento en
lugares específicos de un ARN diana gracias a
secuencias guía internas (IGS) que pueden ser
variadas cambiando la especificidad del ribozima
 Requieren de un metal
con carga divalente para
la reacción química (ej;
Mg 2+ ).
 Capaces de cortar las
dianas y repetir el ciclo de
unión, rotura y
disociación.

58. RIBOZIMAS
Optimizar la función a nivel intracelular:
• Reparto a las células apropiadas: lo más
utilizados son los vectores retrovirales y los AAV
• Expresión intracelular: elección del promotor
• Co-localización con el ARN diana, aumentando
la eficacia.
•Reciclaje del substrato

59. RIBOZIMAS

60. RIBOZIMAS

61. APLICACIONES EN TERAPIA
GÉNICA HUMANA

62. ENFERMEDADES CANDIDATAS
• Amenazar gravemente la vida del paciente
• Órganos tejidos y tipos celulares afectados deben estar
bien caracterizados.
• Versión normal del gen defectuoso ha de estar aislada
y clonada.
• Gen normal debe poderse introducir en una fracción
significativa del tejido afectado ó bien en un tejido
accesible que revierta indirectamente en el curso de la
enfermedad
• Gen debe poder expresarse de manera que genere
suficiente proteína normal.

63. Deficiencia de la Adenosin Desaminasa
“Niños Burbuja”
Disfunción de las células T y B provocando muerte
por infección masiva generalizada. Niños con
esperanza de vida limitada al carecer de respuesta
inmunitaria. 25% de los casos de SCID.
Tratamiento actual: transplante medula osea de
donante HLA idéntico, lo cual reduce mucho las
posibilidades y además la operación tiene una alta
mortandad. También inyecciones con ADA sintética.
Terapia Génica: introducción del gen ADA normal
por transfección con vector retroviral en linfocitos
T aislados del paciente
Problemas: resultados variables y posible mutagénesis

64. FIBROSIS QUISTICA
Gen de la FQ es el CF
ADNc del gen de la conductancia transmembrana
CFTR construido y clonado en vector retroviral.
Células CF- eran infectadas y seleccionadas
posteriormente por un gen de resistencia.
Las células transfectadas adicionando estimulador de
la adenilato ciclasa expresaban el gen, detectándose
funcionamiento de los canales de Cloro
La terapia génica de la FQ es también realizada
mediante métodos químicos con liposomas
catiónicos que llevan el gen CFTR.

65. DISTROFIA MUSCULAR DE
DUCHEME
Mioblastos individuales “células satélite”capaces de
fusionarse con otras para la regeneración muscular.
Ideal como vector.
Se logró un ADNc del gen de la distrofina y se clonó en
un vector retroviral, con el cual se transfectaron las
células.
Comprobaron por anticuerpos que se producía la
molécula correcta y se localizaba en la membrana
celular.
Queda mucho para que tenga aplicación clínica

66. HEPATOCITOS
Enfermedades metabólicas hereditarias como la
Hipercolesterolemia familiar y Hemofilia afectan a este
tejido por lo que se han desarrollado técnicas a partir de
aislar y cultivar hepatocitos.
Hipercolesterolemia
provocada por la
mutación en el
receptor de la
lipoproteína de baja
densidad LDLR

67. HEMOFILIA B
Inyección de un AAV que contiene el gen que
codifica para el factor IX. Se suspendió el tratamiento en
mayo de 2004 por tener resultados aislados en pocos
pacientes.
PARKINSON
Inyección de un AAV con el gen que codifica el
enzima GAD en el cerebro de pacientes afectados.
Produce estimulación del ácido GABA Primer
experimento de la fase clínica en esta enfermedad,
comenzó en agosto 2003.
HEMOFILIA A
Inyección con células del pacientes una vez
transformadas in vitro con un plásmido que contiene
el gen que codifica para el factor VIII plasmático. Los
pacientes mostraron una modesta mejora.

68. DIABETES
AAV transformado con el un cDNA que codifica
para insulina sintética. Se añade un promotor, activo
únicamente en células del hígado, y que estimule por la
presencia de glucosa.
También se ha adicionó un “enhancer” aumentando la
expresión y una señal que permita que la insulina sea
secretada al medio.
ESCLEROSIS LATERAL AMIOTROFICA
Enfermedad con degeneración en las neuronas
motoras. Experimentos en ratones portadores del gen
humano mutado de la enzima superóxido dismutasa.
Transfectados con AAV mostraron una menor
destrucción de las neuronas.

69. FIBROBLASTOS DE PIEL
Vehículos para transferir genes. Se obtienen fácilmente,
crecen in vitro y son infectados por vectores retrovirales.
Mucopolisacaridosis (enfermedad hereditaria
caracterizada por deficiencia de enzimas lisosomales).
Enfermedad de Gaucher (deficiencia del enzima
glucocerebrosidasa)
Deficiencia de Adenosin desaminasa
Hemofilia B: causada por déficit del factor IX
plasmático.

70. Células hematopoyéticas
Células madre medulares que dan lugar a todas las
células hematopoyéticas, utilizadas como vector
para transportar genes al paciente.
Fáciles de obtener
Crecer bien in vitro
Soportar la infección retroviral
Fácil de devolver al paciente
Continuar viva varios meses
Dificultades: bajo nivel de expresión del gen introducido

71. Clonación del producto terapéutico
Proteínas Humanas clonadas en cultivos celulares de bacterias y
levaduras y crecidas in vitro las seleccionadas con el transgen .
 Insulina (para la diabetes)
 Factor VIII (para hemofilia A)
 Factor IX (Hemofilia B)
 Hormona de crecimiento GH
 Eritropoyetina ( para tratar la anemia)
 Interferones e Interleukinas distintas
 Adenosin desaminasa (tratar la inmunodeficiencia severa
combinada)
 Angiostatina y Endostatina (drogas contra el cáncer)……...

72. TERAPIA
GENICA DEL
CANCER

73. Estrategias
Sustitución de oncosupresores defectuosos
Inhibición de la expresión de oncogenes por
terapia antisentido
Inserción de vectores suicidas. Adenovirus
oncolíticos
Inmunotoxinas
Vacunas tumorales: Aumenta la immugenicidad
del tumor introduciendo antígenos foráneos
Aumentar la actividad antitumoral de células
inmunes por medio de Citoquinas.

74. SUSTITUCIÓN DE ONCOSUPRESORES
Oncosupresor: Gen que actúa inhibiendo la
proliferación celular y cuya pérdida puede implicar la
génesis tumoral.
Los más conocidos: rb, p53, dcc,fap,nf1,nf2,wt1 y p16
Terapia genética mediada por vector retroviral que
lleve la copia intacta del oncosupresor.
Eficacia mejorada al introducir en el tumor varios
oncogenes y oncosupresores a la vez, que corrijan las
alteraciones acumuladas

75. INHIBICION DE ONCOGENES
Oncogenes: genes capaces de producir transformación
maligna al expresarse inadecuadamente por una
mutación o ampliación
Protooncogenes: genes normales con importante papel
en la proliferación y diferenciación celular y susceptibles
de mutación convirtiéndose en oncogenes. Más de 50
identificados actualmente.
Terapia génica antisentido para regular su expresión
bloqueando la formación de las proteínas.
Éxito in vitro en varios oncogenes, comprobando en
animales la desaparición de tumores sin recidivas ni
secuelas.

76. INSERCION DE VECTORES SUICIDAS
Virus defectivos cuyos genes han sido sustituidos por
un gen de selección (neomicina) y otro capaz de
inducir su propia muerte (tk de herpes virus).
En ratas se ha constatado la muerte de las células
tumorales infectadas con retrovirus defectivos al
administrar ganciclovir.
Humanos: se encuentra en fase de ensayo clínico
en tumores cerebrales produciendo, en algunos casos
la disminución del tumor.
Actualmente se trabajan con promotores específicos
de tumor para evitar la muerte de células no
tumorales.

77. INMUNOTOXINAS
“BOMBAS BIOLÓGICAS” ó balas mágicas: Acoplar
anticuerpos tumorales específicos a toxinas mortales
actuando como proyectiles dirigidos a células
cancerosas.
El anticuerpo monoclonal da especificidad al estar
dirigidos contra un parte especifica de la proteína.
 Requisitos de la inmunotoxina:
Antígeno en la superficie celular; receptores y
carbohidratos de membrana
Penetración eficaz del complejo antígeno - anticuerpo en
el citoplasma celular
Que reconozcan las formas mutadas pero no las normales,
o por lo menos se expresen menos en estas.

78. INMUNOTOXINAS
Las toxinas más utilizadas son: Ricina T. Diftérica y
exotoxinas de Pseudomonas. Su modo de acción es
inhibir la síntesis protéica a nivel ribosomal.
Efecto antitumoral más rápido que el desarrollo de la
respuesta inmunológica.
 No llegan a todas las células cancerosas, sobre todo
en tumores sólidos.
 Pueden reaccionar con cualquier célula provocando
toxicidad no específica.

79. VACUNAS
Moléculas con capacidad para provocar
respuesta inmune frente a antígenos propios específicos
de tejido.
2 tipos de antígenos reconocidos por células T
citotóxicas:
 Proteínas aberrantes de los oncogenes exclusivas
de células tumorales y diferentes a las de
protooncogenes.
 Productos de genes embrionarios que no se
expresan en células adultas.
Primeros tratamientos con pequeña respuesta.

80. LINFOCITOS MODIFICADOS
Linfocitos infiltrantes en tejidos (TILs): se
infiltran en tumores siendo capaces de matar células
tumorales al administrarlos con el factor de
crecimiento Interleukina 2.
Estrategia terapéutica ex vivo, introducidos en
células aisladas de tumor, transfectadas por vector
retroviral y marcadas con resistencia a neomicina
para comprobar el grado de eficiencia.
El porcentaje de eficiencia en la transferencia y la
pérdida posterior de los linfocitos modificados
hacen necesarias más pruebas.

81. TERAPIA
GENICA
DEL VIH

82. CICLO VITAL

83. OBJETIVOS
 Protección de las células no infectadas
 Destrucción de las células infectadas
 Reducción de la infección en pacientes
 Evitar la propagación

84. ESTRATEGIAS
I. Estimular sistema inmune al transferir un gen del virus.
II. Introducir genes inhibidores de la replicación vírica
(interferón).
III. Transferir genes de proteínas víricas mutantes que
compiten con las normales dificultando el ensamblaje ó la
replicación.
IV. Secuestro de proteínas víricas reguladoras por señuelos
de ARN, evita que se unan a sus puntos de acción.
V. Terapia antisentido: Ribozimas y Oligonucleótidos
VI. Introducción de anticuerpos frente a proteínas del VIH,
inmunización intracelular.

85. Estimulación del sistema inmune
Vacunas génicas mediante la expresión
de proteína viral por inyección directa de
ADN plasmídico que lleva genes virales.
Problema: elevada tasa de mutación que
le permite escapar de la respuesta inmune.

86. Inhibición por Interferones
ADNs copia de interferones insertados
en vectores y transfectadas células diana.
Provoca la inducción de algunas proteínas
celulares que interactúan con estructuras
virales inhibiendo la expresión de proteínas
víricas necesarias para la replicación

87. TERAPIA ANTISENTIDO
Oligonucleótidos: ARN antisentido
vehiculizado por un AAV produce reducción
de más de un 90% de la replicación.
Necesitan estar en un numero muy elevado.
Ribozimas: ARN que cataliza ARN
viral, son expresados establemente en células
pudiendo inhibir la replicación. No
necesitan tanta cantidad porque los
ribozimas se regeneran.

88. Interrumpir procesos virales
 Modificación de
la molécula CD4 no
pudiendo infectar la
célula.
 Introducir
proteínas mutantes
 Secuestro de
proteínas por señales
de retención del
retículo plasmático.

89. JURISPRUDENCIA
Y ETICA EN LA
TERAPIA GÉNICA

90. LEGISLACION
• Ley de 28 de diciembre de 1988: prohibiciones y
sanciones sobre clonación y utilización de embriones y
fetos humanos.
• Artículos 159 al 162 del código penal de 1995. El 159
protege la integridad de la especie su desarrollo. El 161
defiende la intangibilidad del patrimonio genético
humano y la identidad genética de los ciudadanos.
• Ley sobre Técnicas de Reproducción Asistida: admite la
terapia génica en línea germinal (embriones y fetos en el
útero) solo si cumplen ciertos requisitos, entre ellos el de
una enfermedad en los que la terapia sea posible
científicamente y no se influya en los rasgos hereditarios
no patológicos ni se busque selección de individuos.

91. LEGISLACION
• Ley sobre Técnicas de Reproducción Asistida:
El gobierno del PP el año pasado delimitó el uso
de embriones destinados a investigación a los
congelados antes del 2003 y también el número de
embriones susceptibles de implantación en el útero.
Actualmente se está llevando a cabo por el gobierno
socialista una nueva reforma que permitirá además de
la investigación de los embriones sobrantes la selección
preimplantaciónal de un determinado embrión frente a
otro con el fin de obtener un fin terapéutico a un
tercero (ej: un hermano con enfermedad hereditaria
que podrá ser transplantado con medula ó cordón
umbilical del futuro niño).

92. LEGISLACION
• Declaración de l a UNESCO sobre genoma Humano y
derechos Humanos (199 art. 24 invita a identificar
aquellas prácticas contrarias a la dignidad humana en
clara alusión a la TG germinal.
•Convenio Europeo de Bioética 1997. Art 13:
únicamente podrá realizarse intervenciones que tengan
como objeto modificar el genoma humano por razones
preventivas, diagnósticas ó terapéuticas siempre que no
tengan como finalidad la introducción de una
modificación en el genoma de la descendencia.
•Parlamento Europeo y del Consejo (1998) Art. 6.2b
se considera no patentables los procedimientos de
modificación de identidad genética germinal del ser
humano.

93. ETICA
El fin ultimo de la terapia es obtener un beneficio
para el paciente, intentando que lleve una vida normal.
Hay peligros potenciales derivados de la técnica y
peligros de índole menos noble y más humana.
En cuanto a la técnica empleada:
Posibilidad de despertar alelos defectivos y genes
reprimidos que conlleven incluso mortalidad.
Reacciones inmunológicas contra una proteína
nueva provocando incluso la muerte.
Seguridad de evitar que los vectores vuelvan a ser
virus de replicación competente. ¿Están realmente bajo
nuestro dominio seres con alta capacidad de mutación?

94. ETICA
Riesgo de la Terapia en línea germinal: cualquier
modificación se transmite, nuestros descendientes serían
genéticamente distintos.
El desafío a la ley natural de selección cribando
los más adaptados es una puerta al juego, cuanto menos
peligroso, de provocar ventajas adaptativas que
mejorasen la especie, bajo excusas nobles de salvar
vidas.
Hay que pensar siempre en las consecuencias posibles de
todas las terapias que se administran, y en este caso
especialmente porque pueden influir a toda una especie.
Por otra parte el negocio de la salud y la búsqueda de
los beneficios de todos estos avances hace al hombre
más peligroso que muchos virus, olvidando que la salud
es un derecho de todos.