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MÉTODOS DE ESTUDIO DE
AGENTES INFECCIOSOS
Patricia Durán Ospina
2021
DIAGNÓSTICO
➢Identificar el agente causal
➢Confirmar diagnóstico clínico
➢Confirmar mejoría clínica
➢Buscar portadores
➢Tipificación
IDENTIFICACIÓN AI
(POSTULADOS DE KOCH)
➢El agente infeccioso debe encontrarse
en todos los casos de enfermedad
➢Debe aislarse y obtenerse en cultivo puro a
partir de lesiones
➢Debe reproducir la enfermedad cuando se
inocula a partir de un cultivo puro, en un
animal de experimentación susceptible
TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN
TÉCNICA MICROORGANISMO TIEMPO
OBSERVACIÓN DIRECTA BACT HONGOS
VIRUS (ME)
10 MINUTOS
TINCIONES BACTERIAS HONGOS 30 MINUTOS
CULTIVOS BACTERIA HONGO
VIRUS
48 HORAS A
2 MESES
DETECCIÓN DE
ANTÍGENOS
Virus 10 minutos
DETECCIÓN ÁCIDOS
NUCLÉICOS
Bacterias, virus 1 hora
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
➢Según examen solicitado
➢Precauciones universales
➢Manual toma de muestras
➢Rotulación del recipiente
➢Nombre
➢Procedencia
➢Tipo de muestra
➢Fecha
REQUISITOS DE UNA BUENA MUESTRA
➢Muestra antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
➢Desde el sitio más representativo de la
infección
➢Toma aséptica
➢Identificada
➢Transporte seguro al laboratorio
MEDIOS DE CULTIVO
OBSERVACION DIRECTA 10x MICROSCOPIO
VIALES PARA TRANSPORTE
PROCEDIMIENTOS AUTOMATIZADOS
TIEMPOS DE PROCESO PROLONGADOS
ALTA CAPACITACIÓN TÉCNICOS
MUESTRAS SIN REEMPLAZO
“MUESTRAS PRECIOSAS”
SOSPECHA CLÍNICA BACTERIANA
TINCIÓN
DIAGNÓSTICO
SIEMBRA EN CULTIVOS
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
DETECCIÓN ÁCIDOS NUCLÉICOS
TINCIONES
• Gram
• Ziehl Neelsen
• Tinta china
GRAM
GRAM
• Permite plantear hipótesis de agente causal
• Orientación comenzar terapia
• Debe ser solicitada en toda muestra para
estudio microbiológico
Para interpretación es necesario recordar
• Cantidad mínima de microorganismos que es
capaz de detectar 100.000 bacterias/ml de
muestra
• Sensibilidad clínica del test
• LCR 75%
• Líquido pleural 50 – 80%
• Líquido peritoneal 25 – 50%
• Líquido articular50%
• Líquido Correlación urocultivo (+)
GRAM
• Infecciones mixtas
• Bacterias aeróbicas o anaeróbicas
• Tinción: dos al cultivo sólo uno ?
Violeta de Gram
Lugol
Alcohol Acetona
Fuscina de Gram
Ziehl Neelsen
Sensibilidad clínica según la muestra
• Sensibilidad clínica del test
• LCR 20 - 40%
• Líquido pleural 50 %
• Líquido peritoneal 25 %
• Líquido articular 20%
• Orina No es diagnóstica
CULTIVOS
• Técnica de referencia en el diagnóstico
• Identificación del agente etiológico
• Estudio de susceptibilidad
• Requiere microorganismos vivo
• Rendimiento depende de
• Muestra representativa en el sitio infección
• Momento toma de muestra
• Uso antibióticos
• Medios de cultivo
CULTIVOS
MUESTRA
TINCIÓN CULTIVO
ANTIBIÓTICO
EMPÍRICO
+
IDENTIFICACIÓN SUSCEPTIBILIDAD
ADECUAR Tx
ANTIBIÓTICO
24 HORAS
24 HORAS
MEDIO DE CULTIVOS
• Aislamiento primario
• Medios selectivos
• Medios diferenciales
• Medios selectivos diferenciales
• Pruebas bioquímicas
SUSCEPTIBILIDAD
• In vitro
• Terapia apropiada par el clínico
• Correlación in vitro y clínica
• Factores
• Farmacocinético
• Unión proteínas plasmáticas
• Bacteriostático o bactericida
• Concentración en el sitio
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/14agquimicos.htm
http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=
S0036-36342009000500011
ANTIBIOGRAMA
Agar Müller Hinton
0 – 14 mm 14 - 21 mm + 21 mm
R I S
ejemplo
FACTORES DEL HUÉSPED
• Virulencia
• Alta concentración de MO
• Infección mixta
• Desarrollo de resistencia durante el
tratamiento
Indicaciones del antibiograma
• Determinar la susceptibilidad del agente
infeccioso
• Precisar la susceptibilidad
• Permitir evaluar a nivel local la epidemiología
• Evaluar la nueva susceptibilidad a nuevos
antibióticos
A cuáles MO se les hace antibiograma?
• Susceptibilidad variable Gram negativos
• Susceptibilidad predecible
• S pyogenes, S pneumoniae
• Emergentes con patrón d eersistencia
• MRSA
• VRSA
• Esquemas nacionales
• M tuberculoso
REQUISITOS
• Antibióticos seleccionados
• Método
• Kirby Bauer
• Automatizados
• Fluorometría
• E-test
• CIM
• 16 a 18 horas de incubación 35°C
RESISTENCIA NATURAL: inactivdiad del antibiótico. Ejemplos:
Resistencia natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la
colistina. Resistencia natural de la Klebsiella pneumoniae a las
penicilinas (ampicilina, amoxicilina).
RESISTENCIA ADQUIRIDA: naturalmente sensible, cuyo patrimonio
genético ha sido modificado por mutación o adquisición de genes, son
evolutivas
RESISTENCIA CRUZADA: Resistencia a la oxacilina en los estafilococos
se cruza con todas los ß-lactámicos). Resistencia por impermeabilidad
a las ciclinas se cruza con la resistencia al cloranfenicol y al
trimetoprima).
RESISTENCI ASOCIADA: estafiolococos a la oxacilina va
frecuentemente asociada a las quinolonas, aminoglicósidos,
macrolidos y ciclinas.
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
http://microbiologiaseminario4.blogspot.com/2009/05/intro.html
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
DNA
Lawrence Livermore National Laboratory dispositivo de tres pulgadas que puede detectar
hasta 3.000 tipos diferentes de virus y bacterias en sólo 24 horas. El bio-detector,
llamado Lawrence Livermore Microbial Detection Array (LLMDA), escala deslizante de cristal
que podría pasar por un porta-muestras normal Pero más allá de ese pequeño objeto de
vidrio se asientan, en un patrón de tablero de ajedrez, 388.000 sondas para buscar más de
2.000 tipos de virus y 900 tipos de bacterias.
MUESTRAS CLÍNICAS
• Hemocultivos
• Urocultivos
• Líquidos
• Líquidos de cavidades
• Muestras respiratorias
• Deposición
MICRO-SCAN SIEMENS LABPRO
http://www.elsevier.es/es/revistas/revista-clinica-espa%C3%B1ola-65/manejo-clinico-microbiologico-los-hemocultivos-positivos-
staphylococcus-coagulasa-90004659-actualizacion-clinica-2011
http://www.japi.org/may_2011/article_02.html
http://www.ecomeds.ru/upload/iblock/74e/74
eb3a45f22574dc23771fdc1e361eda.pdf
ANTIBIOGRAMA KIRBY BAUER
DIAGNÓSTICO DE ESPECIE
DIAGNÓSTICO DE ESPECIE
CÁMARA DE FLUJO LAMINAR
MANOS 5 MOMENTOS LAVADO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
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INFECCIONES HOSPITALARIAS
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AGENTES ETIOLÓGICOS
TIPO NOSOCOMIAL CRITERIOS
CONTROL DE INFECCIÓN
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RESPONSABILIDAD CONTROL INFECCIÓN
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PREVENCIÓN DE INFECCIÓN
PREVENCIÓN DE INFECCIÓN
PREVENCIÓN DE INFECCIÓN
USO ANTIMICROBIANOS
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BLEFARITIS SEBORREICA
COLLARETES DE FIBRINA
ACNE ROSACEA
NEISSERIA GONORROEA
SECRECION MUCOPURULENTA
BLANCA BRILLANTE ESPUMOSA
SINDROME OCULOGLANDULAR DE PIRANAUD: BARTONELLA CHLAMYDIA
ARUÑAZO DE GATO
QUERATOCONJUNTIVITIS ADENOVIRICA
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SECRECION MODERADA
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TOMA DE MUESTRA
TOMA DE MUESTRA
QUERATITIS MICOTICA FILAMENTOSA
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