Prueba IFAT (inmunofluorescencia directa e indirecta)

1. IFAT
(inmunofluorescencia directa e indirecta)
Universidad de la Salle Colombia
Facultad de ciencias agropecuarias
Medicina Veterinaria
Bogotá-Colombia
Luis G. Perez
Yeili Álvarez Niño
Andrés Ricardo Avellaneda

2. CONCEPTOS CLAVES
• ANTÍGENO (Ag): Un antígeno es aquella
sustancia que siendo reconocida como
extraña por el sistema inmune, es capaz de
inducir en este una respuesta específica
encaminada a su neutralización.
• ANTICUERPO (Ac):Sustancia segregada por
los linfocitos de la sangre para combatir una
infección de virus o bacterias que afecta al
organismo.

3. ¿QUÉ ES ?
La inmunofluorescencia es una técnica utilizada para
visualizar la distribución de una proteína o antígeno
específico en células o secciones de tejido utilizando la
especificidad de los anticuerpos por su antígeno para
dirigir marcadores fluorescentes a las biomoléculas
dianas de forma específica.
Tomado de http://goo.gl/YCMIkK

4. TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA
• INMUNOFLUERESCENCIA DIRECTA:
el marcaje directo en el que el anticuerpo primario está marcado con
un marcador fluorescente.
• INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA:
el marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado
con un fluorocromo se utiliza para reconocer un anticuerpo primario.
NOTA: Las muestras marcadas inmunofluorescentemente se examinan bajo
un microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal.

5. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
• Usa una unión covalente entre fluoróforo con el
anticuerpo primario.
• Requiere de una etapa de incubación con el
antígeno y una sola etapa de lavado.
PROCEDIMIENTO
• El marcador fluorescente produce una sustancia
colorada que identifica si el antígeno está presente.
(En caso de no estar presente el antígeno, la
fluorescencia no identificara nada.).

6. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
Tomado de http://goo.gl/jgO6TO

7. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
• Se divide en dos etapas:
1. El anticuerpo primario no marcado, se une
con el antígeno diana.
2. El anticuerpo secundario, lleva el fluoróforo,
identifica al anticuerpo primario y se une a
él.
Nota: varios anticuerpos se pueden unir al
anticuerpo primario y la señal aumentaría.

8. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
Tomado de http://goo.gl/jgO6TO

9. Tomado de http://goo.gl/jgO6TO

10. APLICACIONES CLÍNICAS:
• La prueba IFAT, ayuda a reconocer el
diagnóstico de sífilis por medio de la
bacteria Treponema pallidum.
• La prueba de IFAT se puede utilizar en:
Renibacterium Salmonirarum.
Vibrio Ordalii
Ehrlichia Canis

13. • Introducción. El diagnóstico de la leptospirosis es difícil debido al amplio espectro
de síntomas clínicos que presenta. Varias pruebas diagnósticas serológicas se han
desarrollado, pero su aplicación y utilidad en Colombia no han sido determinadas.
• Objetivos. Evaluar la prueba de inmunofluorescencia indirecta para el diagnóstico
de leptospirosis humana y determinar así los anticuerpos de las clases
inmunoglobulina G y M producidos contra Leptospira.
• Materiales y métodos. Se establecieron tres grupos de estudio. El primero incluyó
19 muestras positivas para leptospirosis de pacientes con diagnóstico clínico y
prueba de microaglutinación positiva; el segundo, 40 muestras de personas sin
antecedentes de leptospirosis y con microaglutinación negativa, y el tercero con 96
muestras de pacientes con otras enfermedades diferentes a leptospirosis. Todas las
muestras fueron procesadas por inmunofluorescencia indirecta.
• Resultados. Se determinó que la inmunofluorescencia indirecta tiene sensibilidad
de 89,47%, especificidad de 100%, valor predictivo negativo de 95,2% (IC95%82,6 a
99,2) y valor predictivo positivo de 100%. En forma paralela, un estudio exploratorio
en 27 muestras de suero que habían sido remitidas para diagnóstico de diferentes
síndromes febriles encontró que 11% de ellas fueron positivas por
inmunofluorescencia indirecta para anticuerpos IgM contra Leptospira.
• Conclusiones. La inmunofluorescencia indirecta es una alternativa que
complementa el diagnóstico de leptospirosis y los estudios seroepidemiológicos. La
presencia de anticuerpos dirigidos contra Leptospira en las muestras de síndrome
febril del estudio indica que la leptospirosis es una de las causas de este síndrome
que el clínico debe explorar.

14. BIBLIOGRAFÍA
• . Kassirer JP. Our stubborn quest for diagnostic certainty. A cause of excesive
testing. N Engl J Med 1989; 320: 1489-91.
• http://encontroiberico.no.sapo.pt/docs/Serologia_UHofle.pdf
• http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/tema-14.pdf
• Eguiarte L. et all., Ecología Molecular. México 2007; cap. 17: 517-40
• Merchant. I.A. & Packer, R. (1980). Bacteriología y Virología Veterinarias. Zaragoza :
Acribia.
• Anaya, Elizabeth, Morón, Cecilia, Arias, Patricia, Chauca, Johann, Román, Raúl.
EVALUACIÓN DE PRUEBAS DE ELISA E INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA
LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IgM CONTRA RICKETTSIOSISRevista Peruana de
Medicina Experimental y Salud Pública [en linea] 2008, 25 (Sin mes) : [Fecha de
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