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Indice
Introducción………………………………………………………………….. 3
Métodos cualitativos…………………………………………………………. 4
Valoración de antisueros……………………………………………………. 5
Valoración de anticuerpos “incompletos”………………………………… 6
Aglutinación pasiva………………………………………………………….. 6
Bibliografía…………………………………………………………………… 9

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 Introducción
Se denomina aglutinación a la interacción secundaria in vitro de un antígeno “particulado”
con su anticuerpo específico. Si el antígeno (proteína, hidrato de carbono, etc.) se
encuentra presente en la superficie de células, bacterias u otras partículas naturales el
fenómeno se denomina aglutinación directa. Cuando el
antígeno con el que interacciona el anticuerpo específico no
forma parte de la estructura nativa de la partícula, sino que
se incluye artificialmente en su superficie, la aglutinación
que tiene lugar se denomina genéricamente aglutinación
pasiva o indirecta. Las partículas utilizadas como soportes
pueden ser inertes (partículas de látex) o bien glóbulos
rojos, en cuyo caso el método recibe el nombre de
hemoaglutinación pasiva o indirecta. La aglutinación
pasiva se denomina “directa” cuando se inmoviliza el
antígeno a la partícula inerte o “reversa” cuando se inmoviliza el anticuerpo.
A bajas diluciones del suero la aglutinación puede estar ausente, debido a un exceso de
moléculas de anticuerpo, este fenómeno
se denomina efecto de prozona.
Las metodologías de aglutinación son
ampliamente utilizadas en el laboratorio
clínico para la detección serológica de
anticuerpos en diferentes patologías
infecciosas y para la tipificación de grupos
sanguíneos.
Es importante recordar que el anticuerpo a investigar por aglutinación debe ser por lo
menos funcionalmente bivalente. Aquellos anticuerpos que poseen un solo paratope útil
de alta afinidad se denominan anticuerpos incompletos o asimétricos (funcionalmente
monovalentes). Para poder evidenciarlos utilizando reacciones de interacción secundaria
es necesario recurrir a otras pruebas como la reacción de Coombs. Ésta se utiliza
frecuentemente, entre otras aplicaciones, para la detección de anticuerpos anti-Rh (anti-
antígeno D) en el suero de pacientes Rh negativo. Esta reacción se basa en la
aglutinación de anticuerpos anti-inmunoglobulina humana (suero de Coombs) para

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producir la aglutinación luego de la interacción del antígeno con los anticuerpos
incompletos.
 Métodos cualitativos
Son muy utilizados en serología diagnóstica con el objeto
de identificar bacterias, en las determinaciones de grupos
sanguíneos, etc. Estas reacciones se efectúan en
portaobjetos mezclando suspensiones de las bacterias o
hematíes para identificar con antisueros diferentes. La
formación de grumos indicará la especificidad del sistema
reaccionante.

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 Valoración de antisueros
Los métodos son semicuantitativos y consisten en determinar cuál es la máxima dilución
del suero para analizar capaz de aglutinar al antígeno específico. Las diluciones
generalmente se hacen en razón 2 y el título se expresa por la inversa de la máxima
dilución aglutinante. Si la dilución 1/1024 aglutina y no lo hace la dilución 1/2048, el título
será 1024. Es una metodología de singular importancia diagnóstica, ya que, efectuada en
forma seriada, la variación del título de anticuerpos puede ser muy útil para seguir la
evolución de una infección bacteriana o de una isosensibilización por antígenos
hemáticos.
Título = inversa de la máxima dilución aglutinante
Fenómeno de prozona: cuando se valora un antisuero, la disminución de los anticuerpos
por dilución hace que decrezca la aglutinación hasta hacerse nula. No obstante ello, en
algunos sueros se observa un comportamiento particular, caracterizado por ausencia de
aglutinación en los primeros tubos de la serie, en los que la concentración de anticuerpos
es máxima, con aglutinación positiva a diluciones mayores. A este fenómeno se lo llama
prozona. Existiendo un marcado exceso de anticuerpo con respecto a los determinantes
antigénicos de la superficie celular, estadísticamente es muy poco probable que los dos
sitios activos del anticuerpo puedan unirse a grupos receptivos específicos ubicados en
células diferentes.

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 Valoración de anticuerpos “incompletos”
Estos anticuerpos, además de no aglutinar, al ser puestos en presencia de las
correspondientes partículas antigénicas las bloquean e impiden su aglutinación por el
anticuerpo específico bivalente.
Su investigación y valoración son muy corrientes en clínica hematológica, en especial en
isosensibilizaciones maternofetales por antígenos del sistema Rh.
Su valoración puede hacerse por el método de Coombs: para esta determinación es
necesario disponer de un antisuero específico contra la gammaglobulina de la especie
animal de la que provienen los anticuerpos que se han de investigar. Si los anticuerpos
bloqueantes fuesen humanos, la antigammaglobulina (suero de Coombs) será específica
para la gammaglobulina humana. El método consiste en mezclar el antígeno con
diluciones del suero que contiene los anticuerpos “incompletos” e incubar las mezclas a
37 °C durante una hora. Si bien no hay aglutinación, hay fijación del anticuerpo al
antígeno, lo que significa que éste se cubre de moléculas de gammaglobulina. Si después
de lavar tres veces con solución salina tamponada se añade a todos los tubos suero de
Coombs, como éste es específico para los determinantes antigénicos de la
gammaglobulina, en todos aquellos tubos en que exista anticuerpo “incompleto” fijado al
antígeno habrá aglutinación. El título corresponderá a la inversa de la máxima dilución del
suero en examen que de aglutinación.
 Aglutinación pasiva
Cantidades de anticuerpos contra un antígeno soluble no pueden detectarse por
precipitación si su concentración no excede los 20 µg/ml. Teniendo en cuenta que la
aglutinación es más sensible se ha procurado fijar antígenos solubles a partículas, de
modo de transformar la precipitación en aglutinación. A la reacción que resulta del empleo
de glóbulos rojos como soporte se la llama hemaglutinación pasiva, y simplemente
aglutinación pasiva cuando se utilizan otros. Generalmente las uniones de los antígenos a
los soportes son no covalentes y la fijación se obtiene por mezcla directa o previo
acondicionamiento de la superficie de las partículas. En el caso de los hematíes, la

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fijación de hidratos de carbono no necesita intermediarios; en cambio para las proteínas
es necesario el tanado previo o tratamiento con aldehídos simples como el fórmico,
pirúvico o glutárico.
La aglutinación pasiva es un método semicuantitativo que permite determinar
concentraciones relativas de anticuerpos sobre la base de la máxima dilución aglutinante.
Es cuatro veces más sensible que la aglutinación y mucho más aún que la precipitación.
Ello es consecuencia del tamaño de las partículas antigénicas que intervienen en la
reacción. En la precipitación, el antígeno es molecular y se necesitan muchos complejos
antígeno-anticuerpo agregados para que la reacción se visualice, en tanto que en la
aglutinación pasiva se lo ha transformado en una partícula de gran tamaño, capaz de dar
aglutinados con pocas de ellas.
Esta técnica es muy
utilizada en serología
diagnóstica, ya sea bajo la
forma de aglutinación
pasiva directa o midiendo
su inhibición. Esto sirve
para investigar hormonas
y antígenos solubles
diversos en sangre, orina
y otros fluidos y
especialmente para el
diagnóstico temprano del
embarazo, puesto que en estos casos hay marcado aumento de gonadotrofina urinaria: si
se mezcla un antígeno constituido por partículas inertes a las que se les ha fijado la
gonadotrofina y suero antigonadotrofina bivalente, habrá aglutinación. Mezclando dicho
suero con la orina a analizar, en caso de que esta contenga gonadotrofina, el anticuerpo
será neutralizado, y si luego se añade el antígeno fijado al soporte inerte, no habrá
aglutinación. Ello significa que el anticuerpo fue totalmente neutralizado en la primera
etapa y que por lo tanto la concentración de gonadotrofina urinaria es alta, lo que permite
hacer diagnóstico temprano de embarazo.

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Ver en: http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-
28-articulo-identificacion-rapida-icandida-dubliniensis-i-mediante-13111184

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Bibliografía
 Guía de Trabajos Prácticos: Inmunología Ciclo Superior Bioquímica; Facultad de
Farmacia y Bioquímica.
 Inmunología e Inmunoquímica. Margni y col. 5° Ed., 1996. Editorial Médica
Panamericana (en español).
 Página Web http://www.slideshare.net/doctorrao/agglutination-tests-and-
immunoassys
 Página Web http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-
microbiologia-clinica-28-articulo-identificacion-rapida-icandida-dubliniensis-i-
mediante-13111184