Prueba PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

1. PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa)
Universidad de la Salle Colombia
Facultad de ciencias agropecuarias
Medicina Veterinaria
Bogotá-Colombia
Luis G. Pérez
Yeili Álvarez Niño
Andrés Ricardo Avellaneda

2. Conceptos Claves
Cebador, es una cadena de ácido nucleico o
de una molécula relacionada que sirve como
punto de partida para la replicación del ADN.

3. ¿Qué es?
Es una técnica que permite amplificar rápidamente muestras pequeñas
de DNA, es decir, aumentar su cantidad de modo que sea suficiente
para poder analizarlas.
Si se comienza con un fragmento de DNA del tamaño de un gen la PCR
puede utilizarse para formar literalmente miles de millones de copias
en solo unas horas.
https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=
lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

4. Tipos de PCR
PCR in situ: permite la detección de ADN en el mismo lugar de la
muestra, sin tener que procesarla primero con técnicas de laboratorio.
Se suele utilizar para biopsias o raspados de células.

5. • PCR múltiplex: Es un método alternativo de la PCR de amplio
espectro para la detección de patógenos múltiples. En los ensayos
simples o múltiples, hay grupos de cebadores múltiples que se
utilizan en una PCR múltiple, cada uno de los cuales suele dirigirse a
un patógeno particular.
https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=
lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

6. • PCR con transcriptasa inversa, Se unas un ARN como molde inicial en
vez de un DNA, y emplea una transcriptasa para realizar la síntesis de
un DNA complementario al ARN

7. • PCR en tiempo real, Permite cuantificar la cantidad de DNA o ARN
presentes en la muestra original, o para identificar con una muy alta
probabilidad, muestras de DNA especificas a partir de su temperatura
de fusión.
• PCR anidada: consigue amplificar muestras mínimas de ADN a miles
de millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos
minúsculos.

8. Procedimiento

9. Como funciona
https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=
lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

10. https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=
lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

11. Resultados
• Como resultado, el proceso sigue una curva de crecimiento
exponencial. Todos los reactivos necesarios se agregan a un tubo, que
se coloca en un termociclador. Este aparato permite fijar las
temperaturas, los tiempos y el número de ciclos deseados. El empleo
de un termociclador automático es posible gracias al uso de DNA
polimerasa obtenida de baterías termófilas como Thermus aquaticus;
la enzima de estos microorganismos puede soportar la fase de
calentamiento sin destruirse. Luego de treinta ciclos, completados en
sólo unas horas, la cantidad de DNA diana aumentara más de diez mil
millones de veces.

12. Utilidad
• Solo puede utilizarse para amplificar secuencias especificas de DNA
relativamente pequeñas determinadas por la elección de los
cebadores. No puede emplearse para amplificar un genoma completo
• Huella digital genética, permite identificar a una persona comparando
su DNA con el de la muestra obtenida, la PCR permite aumentar la
cantidad de DNA amplificando ciertos segmentos polimórficos.
• Detección de enfermedades hereditarias, los genes en estudio
pueden ser fácilmente amplificados por PCR para determinar alguna
mutación.

13. Identificación de Bordetella spp. Por PCR en
tiempo real
• Introducción: México lanzo una alerta epidemiológica en 2009 por
brotes de tos ferina en su región norte, el resurgimiento de la tos
ferina y sus cambios en la epidemiologia son diversos. El objetivo del
estudio fue identificar el agente causal de tos ferina en muestras de
exudados faríngeos y nasofaríngeos por rPCR en pacientes de Oaxaca.
• Se extrajeron ácidos nucleicos totales y se sometieron al protocolo
multiplex para la identificación de Bordetella spp por PCR.

16. Bibliografía
• Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. 2007. Introducción a la microbiología. México, Médica
Panamericana.
• Noriega-Bautista m, Arellanes-Velasco MF, Urbieta-Mendez E, Vásquez-Gómez EM, Velasco-Aquino VM,
Ramírez- Palacios LR. Identificacion molecular de Bordetella spp. Por PCR en tiempo real. Avan C Salud Med
2014; 2(1): 4-15.