Proyecto de fin de ciclo

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Catedra de Inmunología - Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí.
Catedra de Inmunología, Escuela de Laboratorio clínico, Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí.
Alergia, tos recurrente, covid-19, dolor articular, asma, artritis,artrosis, dr. Jorge cañarte alcivar, defensas, inmunólogo,
Técnicas de diagnósticos en inmunología
(Nadya Rodríguez Zambrano)1
, (Karen Demera Pico)1
, (Julissa Mendoza Mantuano)1
, (Antonella
Arguello Cedeño)1
,1
, Jorge Cañarte Alcívar2-3
1Estudiante de la Escuela de Laboratorio clínico. Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí, Portoviejo
– Manabí – Ecuador
2Docente Investigador. Facultad Ciencias de la Salud. Universidad Técnica de Manabí. Portoviejo – Manabí – Ecuador
3Medico especialista en Inmunología Clínica, StemMedic, Manta – Manabí – Ecuador.
Resumen.
Las técnicas inmunológicas, también llamados
inmunoensayos, son pruebas serológicas y
bioquímicas basadas en detección, cuantificación
y el estudio de anticuerpos o antígenos generados
contra un organismo infeccioso. Estos métodos se
pueden diagnosticar de forma directa (utilizando
los anticuerpos específicos para detectar al
antígeno) o de forma indirecta (utilizando los
antígenos específicos para detectar el anticuerpo).
Usualmente los laboratorios emplean estas
técnicas mediante anticuerpos artificiales que
reaccionan a los antígenos del organismo
proveniente de la muestra del paciente. De acuerdo
a las características, naturaleza y cualidades del
antígeno y del anticuerpo, además de las
condiciones de la reacción, podemos obtener
diferentes tipos de reacciones serológicas. Se
utilizan medios químicos para manifestar la
reacción entre el antígeno- anticuerpo, para esto se
han desarrollado varias pruebas inmunológicas
que se encuentran clasificadas en primaria y
secundarias según su tipo de unión.
En las técnicas basadas en antígeno-anticuerpo
primaria no se observan productos que demuestren
si la reacción se ha realizado. se requiere de
indicadores (llamados marcadores) que se unan a
los antígenos o anticuerpos mediante enlaces de
unión covalente, lo cual ocasionara la reacción.
Las técnicas utilizadas son de
Inmunofluorescencia y las técnicas de Western
blot. Mientras que en las técnicas basadas en
antígeno-anticuerpo secundarias los complejos
agregados son perceptibles visualmente y se
producen con enlaces no covalentes, en estas
pruebas encontramos las técnicas de aglutinación
directa e indirecta, las técnicas de precipitación en
medio líquido y en gel, y las técnicas de fijación
del complemento.
Palabras claves.
Técnicas – Antígeno – Anticuerpo – Reacción –
Muestra

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Introducción y desarrollo.
La tecnología de detección de antígenos inmunes
puede identificar la presencia de microorganismos
o fragmentos de estos en muestras clínicas. El
desarrollo de estas tecnologías se inició con el
objetivo de acelerar el diagnóstico de
enfermedades infecciosas y buscó superar ciertas
deficiencias de las técnicas convencionales, en
particular su lentitud. No hay duda de que los
resultados rápidos ayudarán en el manejo clínico y
terapéutico de los pacientes.2
Estas técnicas son especialmente útiles cuando el
organismo responsable del crecimiento es lento o
no crece en el medio. Además, estos resultados no
se vieron afectados por el uso previo de
antibióticos.2
Cabe señalar que, un gran inconveniente es que no
proporcionan información sobre la susceptibilidad
de los microorganismos detectados a los agentes
antibacterianos, y en algunos casos no alcanzan el
mismo nivel de sensibilidad y especificidad
deseada.2
Desde que Hargraves explicó el vínculo entre los
fenómenos de las células LE y el lupus eritematoso
sistémico (LES), la investigación de anticuerpos
asociados con enfermedades autoinmunes se ha
vuelto importante. Actualmente, la asistencia de
laboratorio en el diagnóstico de enfermedades
autoinmunes incluye una serie de tecnologías que
permiten la identificación e identificación de
antígenos específicos reconocidos. Además, este
tipo de tecnologías han evolucionado
considerablemente durante las últimas décadas a
medida que se han desarrollado pruebas más
específicas y sensibles. Las técnicas más utilizadas
son la inmunofluorescencia indirecta (IFI), el
ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
(ELISA), ensayos múltiples y electrohilado (EIT),
métodos bioquímicos y enzimáticos, reducción de
colorantes, identificación de ácidos, ácido
nucleico, filtración por membranas. Aunque cada
uno es diferente, presentaremos las funciones más
importantes de estas pruebas, ya que comparten el
hilo conductor del reconocimiento de unión
antígeno-anticuerpo.2
Aplicación de tecnicas basadas en reacciones de
antigenoanticuerpo primario:
Técnicas de inmunofluorescencia
La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es una de
las técnicas que se utilizan más en la investigación
autoinmune porque es fácil de manipular y
estandarizar. Sin embargo, la lectura y la
interpretación requieren una gran experiencia.
Esta tecnología se basa en el reconocimiento de
anticuerpos que reconocen la estructura del
antígeno celular natural. Las interacciones se
demuestran mediante anticuerpos de

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inmunoglobulinas humanas producidas en
conejos, cabras o cobayas contra una fracción
constante (Fc) de inmunoglobulina IgG, IgA y / o
IgM. Este anticuerpo contra la inmunoglobulina
humana se une o se une a un fluoróforo
(generalmente isotiocianato de fluoresceína
[FITC]). La detección de antígenos por
autoanticuerpos en suero, plasma u otros fluidos se
evalúa mediante microscopía de fluorescencia. La
IFI se utiliza actualmente en estudios autoinmunes
para detectar anticuerpos contra ADN bicatenario
(DNACD) o ADN nativo (ADNn) utilizando
Crithidia luciliae como sustrato. Las líneas de
células epiteliales humanas, como las células
HEp2 y las células HeLa, se utilizaron como
sustratos para la detección de anticuerpos que
reconocen antígenos.3
Para los anticuerpos contra los componentes de
granulocitos principales y específicos de
leucocitos polimorfonucleares o anticuerpos
anticitoplasma de neutrófilos (ANCA), se utilizan
neutrófilos fijados con formalina y etanol. Para los
anticuerpos que reconocen antígenos específicos
de órganos, se utilizan como sustratos secciones de
tejido específicas (tiroides, esófago, estómago,
glándulas suprarrenales, salivales, etc.).1
Técnica de western blot .
El Western Blot es una técnica analítica
ampliamente utilizada para estudiar proteínas.
Este método permite detectar una única proteína
en una muestra biológica. La especificidad de la
transferencia de la técnica mencionada se consigue
mediante el uso de anticuerpos que reconocen y se
unen a un solo epítopo de la proteína de interés.4
Básicamente, las transferencias Western son una
herramienta útil siempre que desee obtener
información sobre la expresión de proteínas en una
muestra. Puede usarse para indicar si una muestra
expresa la proteína de interés o para comparar
cuantitativamente los niveles de proteína entre
diferentes muestras o grupos de tratamiento. Dado
que la reactividad cruzada se ve fácilmente en las
transferencias de Western, es útil probar la
especificidad del anticuerpo cuando el objetivo
final es usarlo en inmunohistoquímica o
inmunocitoquímica.4
Para realiza la técnica Western Blot se deben llevar
seguir los siguientes pasos:2
1. Preparación de la muestra
2. Electroforesis
3. Transferencia a una membrana
4. Inmunotinción
5. Detección de las bandas
Aplicación de técnicas basadas en
reacciones de antígeno- anticuerpo
secundario:

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Técnica de aglutinación y técnica de
precipitación en medio liquido
La unión del antígeno-anticuerpo es una
interacción reversible en que se involucran enlaces
no-covalente. Dentro de la interacción secundaria
antígeno-anticuerpo, las técnicas inmunológicas se
evidencian la interacción Ag-Ac a través de una
reacción secundaria (aglutinación o precipitación)
son las más económicas y sencillas que aquellas
que permiten visualizar la interacción primaria.5
Técnica de aglutinación
Es la técnica as sensible que la de precipitación. Es
utilizada cuando el Ag es particulado por ejemplo
la bacteria. En el caso concreto de Ag ligados a
eritrocitos, se habla de hemaglutinación, además
algunos virus pueden aglutinar específicamente
eritrocitos de mamíferos y aves y es lo que puede
usarse para su identificación.6
La aglutinación
puede utilizarse como ensayo cualitativo o
semicuantitativo dependiendo de la cantidad de
Ac. La aglutinacion directa cuantitativa solo
permite una estimulación aproximada de los Acs.
• Aglutinación cualitativa denominada
como aglutinación rápida esta consiste en
mezclar el Ag y Ac, y poder observar la
aglutinación. Por ejemplo, la prueba de
aglutinación rápida para la brucelosis.
• La aglutinación cuantitativa denominada
como aglutinación lenta es para la
titulación de un suero y se diluye el suero
y se enfrenta a una cantidad fija de Ag.
• La aglutina pasiva es la conversión de una
prueba de precipitación en una de
aglutinación, uniendo químicamente Ag
solubles a partículas inertes como
bacterias, látex o eritrocitos.7
Técnica de precipitación en medio líquido.
Son técnicas poco utilizadas, se emplean
generalmente para determinar la presencia de Ags.
Disponiendo de los antisueros específicos por
ejemplo el diagnostico de carbunco en animales
muertos, determinación de grupos serológicos
bacterianos, identificación de manchas de sangre
en medicina legal.8
Técnica de precipitación en gel
Consiste en provocar la reacción del antígeno con
el anticuerpo correspondiente en un gel que sirve
de medio de difusión. Se trata de un procedimiento
que confiere a la prueba de floculación
precipitado/anticuerpo un alcance que amplía sus
ya extraordinarias condiciones analíticas.
Son precisamente estas características que el gel
presta a las reacciones de precipitación las que
permiten un análisis más completo, dilucidando el
número de sistemas de reactivos implicados y, con

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técnicas más desarrolladas, la comparación entre
dos o más reacciones realizadas simultáneamente.9
Difusión en Gel: técnica de uso frecuente y son:
• Doble difusión en tubo
• Difusión simple en tubo
• Doble difusión en placa10
La técnica de fijación del complemento
Detecta la presencia de anticuerpos de Brucella en
el suero sanguíneo a través de la capacidad de
unión del complemento en la reacción antígeno-
anticuerpo.
Para evitar la presencia de complemento libre en
el suero de prueba, el suero se calienta a 60±2°C
durante 30 minutos, lo que destruye el
complemento. Se realiza una primera incubación
del suero de prueba con antígeno (estandarizado)
y complemento (también estandarizado). Si el
suero de prueba contiene anticuerpos contra
Brucella, se realiza la unión con el antígeno y el
complemento añadidos.11
Conclusiones.
Las técnicas de inmunología cumplen un papel
fundamental en el diagnóstico de las
enfermedades, además de permitir la detección de
un conjunto de anticuerpos de formas simultánea
en muestras con volúmenes pequeños. Los
métodos actuales proporcionan un alta
sensibilidad y especificidad, debido a esto y se han
convertido en técnicas estándar en inmunología
diagnóstica. Las técnicas de Western blot consta
de tres variaciones: el ensayo de
inmunotransferencia recombinante (RIBA) (el
cual que utiliza antígenos sintéticos o
recombinantes), el inmunoensayo lineal (LIA), y
el ensayo inmunocromatográfico (evalúa
rápidamente las muestras para detectar los
anticuerpos o los antígenos específicos del
paciente), siendo este el más utilizado de los tres y
el más fácil de hacer. Sin embargo, aún existen
ciertas excepciones que opacan las cualidades de
estos métodos. Las pruebas de aglutinación son
una opción rápida, pero carecen de sensibilidad en
comparación con los otros métodos y las pruebas
de precipitación son limitadas y requieren una
amplia cantidad de anticuerpos y antígenos, lo que
ocasiona una baja sensibilidad.
Anteriormente, el uso de los anticuerpos dependía
de las cualidades y capacidades del anticuerpo y
del antígeno específico para formar grandes
inmunocomplejos, ya sea en medios de solución o
en geles, que podían detectarse mediante diversos
métodos ópticos. Estos métodos tuvieron mucha
importancia en los primeros estudios, pero ahora
han sido sustituidos casi por completo por métodos
más sencillos basados en anticuerpos o antígenos

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inmovilizados que pueden detectar, purificar y
cuantificar antígenos.
Bibliografía.
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https://www.fmed.uba.ar/sites/default/file
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[Online]; 2021. Acceso 21 de 08de 2021.
Disponible en:
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7. Sistema de Gestion de la Calidad de Los
laboratorios. FES. [Online]; 2017. Acceso
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https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
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11. Maria Luisa Garcia Masaya de Lopez
MIA, editor. Determinación de la ¡
sensibilidad y especificidad de la
inmunodifusion (d) y la fijac¡on de
complemento (fc), ufil¡2ando antigenos
fungicos pfoducioos en el sebvicio de
micologia. Vol. 10. Instituto de
investigacion quimicas y biologicas; 2016.

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