Desarrollo de una cepa mutante con mayor produccion de acetoina

1. Vázquez Sánchez Jorge

2. Objetivo
 Producción específica y mejorada de acetoína por la cepa
mutante de Bacillus subtilis.
 A través de la fermentación , se confirmó que la cepa mutante,
TH-49, no era capaz de utilizar acetoına como su fuente de
energía para el crecimiento después de haber consumido la
glucosa

3. Introducción
 La Acetoína es un compuesto orgánico producido de forma
natural por las levaduras del género saccharomyces durante
la fermentación alcohólica. Es precursor en la biosíntesis del 2,3butadieno y el diacetílo.

4. Método de obtención

En comparación con la síntesis química y enzimática, la fermentación microbiana es el
método más competitivo en la producción a escala de Acetoína.

5. Materiales y métodos.
 B. subtilis N-12 .
 Medio de cultivo apropiado.
 Incubador agitador
 Irradiación de rayos UV
 Aislamiento de las cepas mutantes.
 Tratamiento por mutagenesis (NTG).
 2 Aislamiento

6. Radiación ultravioleta (UV)
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de
producción de Acetoína

9. Tratamiento por mutagenesis con
Nitrosoguanidina (NTG)
Los mutantes fueron seleccionados en base a la velocidad de
producción de Acetoína

12. Tratamiento compuesto
los mutantes de alto rendimiento fueron seleccionados de acuerdo a
la tasa de producción de Acetoína

14. Estabilidad de el mutante del
mutante TH49
16
43.8

15. Fermentación a escala de banco
de la cepa mutante TH-49

16. Análisis GC de los productos de
fermentación de mutante
cepa TH-49

17. Análisis GC-MS de productos de
fermentación del mutante
cepa TH-49

18. Agentes mutagénicos
Radiación
ultravioleta
MUTÁGENOS FÍSICOS
• Radiaciones ionizantes
Pueden provocar la rotura de los cromosomas y modificar las bases nitrogenadas.
• Radiaciones no ionizantes
Provocan la formación de enlaces covalentes entre dos bases pirimidínicas
contiguas, dando origen a dímeros.
MUTÁGENOS QUÍMICOS
Los dímeros distorsionan la conformación
del ADN inhibiendo la replicación
• Ácido nitroso
Transforma la citosina en uracilo y la adenina en hipoxantina provocando incorporación de bases erroneas en la replicación
del ADN.
• Agentes alquilantes
Añaden grupos etilo o metilo a las bases nitrogenadas alterando la replicación del ADN.
Enlace de
hidrógeno
• Sustancias análogas a las bases nitrogenadas
Sustituyen a las bases nitrogenadas del Adn y provocan
transiciones.
• Sustancias intercalantes
EMS
Guanina
Se intercalan entre las bases de una cadena dando origen a
inserciones o delecciones de un solo par de bases.
6-Etilguanina

19. Mutación en el DNA
 Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación (Luria & Delbrück)
19

20. Mutación en el DNA
 Aleatoria vs dirigida: test de fluctuación
20

21. Mutación en el DNA
Tasas y frecuencias de mutación espontáneas
Frecuencia por gen (gameto o replicación) (10-4-10-8)
Por nucleótido (10-8 - 10-9)
Frec. Mutación: 2/8
Tasa mutación: 1/7
21
(número de divisiones celulares = número células finales - 1)