1. INMUNOFLUORESCENCIA
CHICO MARTINEZ EDINSON DARIO
MANJARRES OLIVEROS CLAUDIA MARCELA
DOCENTE:
ROLDAN MENCO CONSUELO

2. INMUNOFLUORESCENCIA
es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos
unidos químicamente a una sustancia fluorescente para
demostrar la presencia de una determinada molécula y se aplica
en diagnósticos de patologías cutáneas, renales e investigación.

3. TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA
PRIMARIA O (IFD) : permite la detección de antígenos en un paso.
Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato de fluoresceína. La
reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse
con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.
SECUNDARIA O (IFI): consta de dos etapas y permite la detección de
anticuerpos circulantes.

4. ETAPAS DE LA IFI:
PRIMERA: se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato
conocido específico (células que contiene virus, T. gondii, T. pallidum, etc.) sobre él se
coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es
positiva se dará formación de complejo antígeno-anticuerpo no visible ya que el anticuerpo
no estaba marcado
SEGUNDA: se agrega una anti-inmunoglobulina humana marcada, que reaccionará con
el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.

5. INMUFLUORESCENCIA IFD - IFI

6. LIMITACIONES
Al igual que la mayoría de las técnicas de fluorescencia, un problema muy significativo
con la inmunofluorescencia es el fotoblanqueo. Es decir la pérdida de la actividad
fluorescente causada por la exposición a la luz. Esta pérdida de actividad puede ser
controlada reduciendo la intensidad o el tiempo de exposición a la luz, incrementando
la concentración de fluoróforo, o empleando fluoróforos mas robustos que sean menos
propensos al fotoblanqueo.

7. MICROSCOPIO DE IF
fuente de luz (lámpara de mercurio o
halógena)
La cual
debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta
conforma
Filtro de excitación Filtro de selección Filtro de barrera
es el de calor y está
ubicado entre la fuente
de luz y el filtro de
excitación en los
microscopios de luz
transmitida y entre la
fuente de luz y el espejo
dicrómico en los
microscopios de luz
incidente
colocado antes del
ocular para prevenir
daños retinianos que
podrían ser
causados por rayos
ultravioleta que
escapan el espejo
dicrómico
tiene por objeto
permitir el paso de
ondas de luz con
longitud que caiga en el
rango azul con el fin
que el preparado sea
alcanzado
exclusivamente por la
luz azul y produzca
emisión de luz
fluorescente.

8. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas:
• Se pueden obtener resultados rápidos.
• No es necesario realizar cultivos.
• Se puede identificar microorganismos específicos en
un grupo mixto.
• Determina la identidad de un organismo muerto. Es
sensible.

9.  DESVENTAJAS
• Costos en reactivo y equipo
• Debe ser realizado por personal muy especializado.
• Los resultados no son 100% específicos

10. APLICACIONES
• Técnicas analíticas (cuali-y cuantitativas) en Química y Bioquímica.
• Métodos inmunológicos de diagnóstico médico.
• Procedimientos microscópicos en Microbiología, Genética,
Histología, Histoquímica, Biología Celular, Biología Molecular,
Biología del Desarrollo, Patología (sondas vitales, ensayos de
viabilidad, indicadores,inmunofluorescencia, FISH).
• Análisis poblacional de células (citofluorimetría de flujo).

11. APLICACIONES
Treponema Pallidum
agente etiológico de la
Sífilis. Determinación
por inmunofluorescencia
donde se observa la forma
de espiroqueta
Anticuerpos anti
Toxoplasma gondii, agente
etiológico de la
toxoplasmosis. El sustrato
antigénico utilizado es una
suspensión
de Toxoplasma gondii.
Detecta antígenos de
membrana .
Virus respiratorios Virus
Influenza B (IFD detección de
antígeno)

12. GRACIAS