El documento describe las diferentes fases y técnicas del proyecto genoma para mapear y secuenciar el genoma completo de un organismo, incluyendo la creación de mapas genéticos, físicos y de restricción con mayor resolución, utilizando marcadores, hibridación fluorescente y enzimas de restricción, hasta alcanzar la secuenciación completa del genoma.

1. UNIVERSIDAD TECNOLOGICA
EQUINOCCIAL

2. Conjunto de estrategias y
tecnologías empleadas
para la caracterización
molecular del genoma.
El genoma de un organismo
en su conjunto
(Contraposición a
cuestiones que afectan a
genes individuales)

3. FASES DEL
PROYECTO
GENOMA
Cartografía
Mapa genético
de ligamento
Menor resolución
Sitúa cromosomas (aprox)
Mapa físico
Asigna localizaciones a
marcadores
(Pares bases)
Mapas de restricción
Secuenciació
n
Obtención del mapa genómico en su nivel mas
detallado . Secuencia nucleotídica completa del
genoma.
Trabajo
posterior
Refinamiento
Resecuencia algunas
regiones(corregir errores/
completar tramos difíciles no
analizados)
Variabilidad
individual
Análisis del genoma (dif.
Individuos) ubicar las
posiciones(variabilidad)
Genómica
comparada
Secuenciando otras
especies/compara resultados
(observando tramos
frecuentes conservados)

4. Un mapa genético es un
tipo de mapa
cromosómico.
Muestra la ubicación
relativa de los genes y
otras características
importantes.
Se basa en el concepto
de ligamiento, el cual
significa que cuanto más
cerca estén dos genes en
el cromosoma, mayor
será la probabilidad de
que se heredan juntos.

5. Siguiendo estos patrones de
herencia, se puede establecer
la ubicación relativa de los
genes a lo largo de todo el
cromosoma.

8. • Marcadores
• Combinación de los
alelos(heredan)
• Varios análisis (individuos-
Generaciones)
Gracias al cartografiado
(Posición del gen en el
cromosoma)
Construcción del mapa
genético

9. Miden de manera directa distancias
físicas entre genes u otros
marcadores del ADN en el genoma
Unidad
cartográfica o
de mapa:
Baja
resolución
Alta
resolución
Máxima
resolución

10. Asignación de mapeo a cada
cromosoma o región . cromosómica ->
PCR

11. -Consiste en la búsqueda del marcador
(Genético o no)
-Líneas celulares hibridas
-Preparan (Contienen material genético-
origen diferente)
Métodos basados en líneas
somáticas hibridas

12. Ensayos con secuencias
de la propia secuencia
del marcador
Aplicabilidad en la
cartografía con desarrollo
de sondas fluorescentes
Sonda marca con
fluorocromo
Observación bajo
microscopia de
fluorescencia

13. La fluorescencia es un fenómeno por el
cual algunas sustancias tienen la
capacidad de absorber luz a una
determinada longitud de onda.
Por lo general en el rango ultravioleta se
emiten luz en una longitud más larga.
Se absorben fotones con una determinada
energía, y liberan fotones con menor
energía.
Este proceso es casi inmediato, la luz es
recibida y vuelta a emitir en millonésimas
de segundo.
Por lo tanto podemos decir que la
fluorescencia dura tanto como el estímulo,
ya que cuando éste cesa, también cesa el
fenómeno de fluorescencia. Esta es la
principal diferencia con el fenómeno de
fosforescencia, en el cual la luz absorbida
se vuelve a emitir luego de transcurrido un
cierto lapso.
FLUORESCENCIA

14. Permiten conseguir una
resolución inferior a 1Mb
Sirven de enlace entre
los mapas físicos
anteriores y los mapas
de resolución total o a
escala de un nucleótido
Dos tipos de abordaje :
Hibridacion
Enzimas de
restricción

15. Mapa físico por hibridación in
situ (FISH) de alta resolución
Debido al plegamiento
del ADN el orden de
varias sondas
fluorescentes no
coinciden con el orden
del genoma de las
secuencias de interés
Resolución intermedia:
distancia pequeña entre
las señales corresponde a
una separación en la
cadena de ADN
Alta resolución: distancia
pequeña entre las señales
corresponde a una
separación pequeña en la
cadena de ADN
Al estar la cadena de ADN
poco condensada y
extendida el orden de las
señales se refleja la
posición real de los
marcadores del genoma

16. Se puede obtener un mapa
físico de cualquier molécula
de ADN cortándolo en
puntos definidos cuya
distancia se puede
determinar con precisión .
Los cortes específicos son
posibles gracias a las
enzimas de restricción para
reconocer como dianas
secuencias cortas de ADN
bicatenario
Cada enzima de restricción
posee una diana particular
en el ADN bicatenario
generalmente de 4 a 6 pares
de bases .
La enzima de restricción
corta el ADN en cada punto
en el que haya secuencia
diana
Diferentes enzimas de
restricción poseen
secuencias dianas
diferentes
Mapa físico con enzimas
de restricción

17. .

18. Mapas físicos de STS y EST
Marcadores no genéticos
Mas extendidos STS EST
Regiones cortas del
genoma que se han
podido secuenciar y para
las que han desarrollado
cebadores de PCR
STS: marcadores
encontrados en el
ADN genómico
EST: se identifican en
moléculas de cDNA resultantes
de la transcripción inversa de
mRNA

19. Obtiene por el Solapamiento de
fragmentos de ADN.
Fragmentos( digestión
parcial con enzimas
de restricción-otros
fragmentos mayores)
El planteamiento de
cartografía es igual
Mapas de cóntigos

21. • Fluorescencia | La Guía de Química
http://quimica.laguia2000.com/conceptos-
basicos/fluorescencia#ixzz3wn6YDxYU
• Lewin B. (1996), Genes.pag.119-
120(Segunda Ed.).España:Reverté