1. TEN YEARS OF EXPERIENCE IN
MOLECULAR PRENATAL DIAGNOSIS
AND CARRIER TESTING FOR SPINAL
MUSCULAR ATROPHY AMONG
FAMILIES FROM SERBIA
Marijana Miskovic , Tanja Lalic , Danijela Radivojevic , Sanja Cirkovic,Slavica
Ostojic , Marija Guc-Scekic.
María Alejandra Gómez Otálvaro
Daniela Hincapié Tabares

2. 1. INTRODUCTION

3. MUSCULAR ATROPHY

4. SPINAL MUSCULAR ATROPHY
Affects Anterior
Horn Cells Of The
Spinal Cord
Autosomal
Recessive
Hereditary
Disease
Neuromuscular
Disease

5. SPINAL MUSCULAR ATROPHY
Alteration in
SMN1 gene
Homologous
gene SMN2Locus: 5q13

6. SMA TYPES
I
In neonatal
period or
early
infancy
-Muscle
weakness
-Arreflexia
-Flared
thorax
-Globular
belly
They are
unable to sit

7. SMA TYPES
II
6-18 Months
-Some walk
-Most wheelchair
-Quake in hands
-Scoliosis
Respiratory
complications

8. SMA TYPES
Tremor Weakness
Inability to run Frequent falls
III
From 18 months Usually reaches adulthood

9. SMA TYPES
IV
Recurrent
falls
In the
second or
third decade
of life
Symptoms
worsen
over time
Tremor
Hypotonia

10. Set of techniques available to know the proper
training and correct development of the fetus
before its birth.
PRENATAL DIAGNOSIS

11. PRENATAL DIAGNOSIS
NON-INVASIVE TECHNIQUES
CLINIC
DNA TEST
MATERNAL FETAL
BLOOD
ANALYTICAL
ULTRASOUND
INVASIVE TECHNIQUES
BIOPSY*
AMNIOCENTESIS*
FUNICULOCENTESIS

12. RELATIONSHIP
SMA
SMN1 gene
PRENATAL
DIAGNOSIS

13. 2. GENERAL OBJECTIVE

14. GENERAL OBJECTIVE
To describe ten years of experience of prenatal analysis of
spinal muscular atrophy (SMA).

15. 3. MATERIALES Y MÉTODOS

16. DATOS GENERALES
The Mother
and Child
Health Care
Institute of
Serbia Dr.
Vukan Cupic
44 Familias
Serbias con 1
individuo con
SMA
Enero 1 de
2003-
Diciembre 31
de 2013
Análisis
prenatal en 66
embarazos de
alto riesgo

17. Los estudios
familiares se
dividieron en:
Grupo 1: 36 familias con al menos un niño afectado con
deleción homocigótica de los exones 7 y 8 del gen
SMN1.
Grupo 2: 5 familias con al menos un niño afectado sin
confirmación molecular genética de la enfermedad.
Grupo 3: 3 familias en donde uno de los padres debía
tener historia familiar de un individuo afectado con
deleción homocigótica del gen SMN1.

18. EXTRACCIÓN DEL DNA
1. Lisis
celular
2.
Tratamiento
con RNAsa
3.
Precipitación
de proteínas
4.
Precipitación
de DNA
5.
Almacenami
ento en TE

19. PCR
• Es una técnica
desarrollada
por Kary Mullis.
• Amplificación
directa de un
gen o un
fragmento de
DNA o
indirecta de un
RNA.

20. REACCIÓN EN CADENA DE LA
POLIMERASA-PCR
Desnaturalización: calentamiento 90-
97°.
Alineamiento: hibridación de DNA
con primer´s y DNTp´s (37-65°).
Síntesis: amplificación (72-75°).
Replicación en dirección 5´-3´.

23. 1. Conocer la secuencia que
rodea al sitio de restricción.
2. La PCR amplifica la
secuencia con el sitio de
restricción.
3. Se corta con enzimas de
restricción.
PCR-RFLP
Los productos se ven
con electroforesis en gel
de agarosa con LUV.

24. PCR-RFLP

25. BAYESIAN ANALYSIS
• Is a method of combining
probabilities and which is
used to calculate the
probability of having or not
having a disease causing
mutation after a negative
test is obtained.

26. MAPAS GENÉTICOS
Representación gráfica
de la ordenación y
ubicación de los genes
en cada cromosoma.

27. MAPEO/RFLP
Se basa en la detección de aquellas variaciones
de la secuencia del DNA que tienen como
consecuencia un cambio en un sitio de
restricción.
RFLP- polimorfismos en la
longitud de los fragmentos de
restricción.

28. MLPA
• Detección de variación en el número de copias de múltiples secuencias de ADN en una única
reacción (más de 50 secuencias génicas o genes)
Multiplex
Ligation
Dependent
Probe
Amplification
Técnica
descrita por
Schouten JP et
al en 2002.
Procedimiento
de
cuantificación
relativa basado
en la PCR.
Detección de
variación en el
número de
copias de
secuencias de
DNA.
Detección de
deleciones o
inserciones
que afectan un
exón o más.

29. 4. RESULTADOS

30. 66
MUESTRAS
FETALES
13 CON DELECIÓN
HOMOCIGÓTICA EN GEN
SMN1
12 CASOS:
DELECIÓN EN
AMBOS EXONES
1 CASO:
ELIMINACIÓN DE
UN SÓLO EXÓN
RESULTADOS
7 8 7
1 caso Embarazo
dicigótico->ambos hijos
afectados

31. 5 Control (-)
6 Control (+)
Gen homocigoto*
RESULTADOS

32. RESULTADOS
Control
Hermano
Papá
Mamá
Tío

33. RESULTADOS
Control
Mamá
Papá

34. 5. DISCUSSION

35. AUTOR QUOTE AGREE DISAGREE
Wirth B. [7] Because 94% of clinically typical SMA
patients have the homozygous deletion in
SMN1.  .
Miskovic M et al [13] Among the second group of families
with at least 1 affected child without
molecular genetic confirmation of the
disease, prenatal diagnosis was offered
on the basis of data from a previous study
showing that 81% of Serbian individuals
affected with SMA had the homozygous
SMN1 deletion that causes the disease.
 .
DISCUSSION

36. AUTOR QUOTE AGREE DISAGREE
Somerville MJ et al [16] False negative results might be
expected in cases of individuals who are
compound heterozygous or (very rarely)
homozygous for small mutations in the
SMN1 gene.
 .
Wirth B et al [17] Another concern in the prenatal
prediction of SMA is that the SMN1 locus
has a high rate of the novo deletions and
rearrangements, which are found in 2%
of affected individuals.
 .
DISCUSSION

37. 6. CONCLUSSIONS

38. • Genetic mapping was really useful for this study because it can
locate the gene which is responsible of a hereditary disease,
even without knowing the identity of the gene or the molecular
basis of the disease. This technique can be used in a lot of
inherited disorders such as SMA, with the purpose of
decreasing the morbidity and mortality rate of the disease by
doing prenatal diagnosis on the fetuses.
CONCLUSSIONS
Daniela Hincapié Tabares

39. • PCR, RFLP and genetic mapping like MLPA, are laboratory
techniques with a huge utility in the field of medicine,
especially in the discovery of genetic diseases because these
methods give an amplification of the DNA which allows a
more detailed observation.
CONCLUSSIONS
Daniela Hincapié Tabares

40. • By understanding the mechanisms affected by the absence of
the SMN1 gene, we will be able to design effective
therapeutic strategies to prevent neuronal degeneration and
death in patients with SMA.
CONCLUSSIONS
Maria Alejandra Gómez Otálvaro

41. • Early diagnosis of any congenital defect in the fetus is of vital
importance as it would help to avoid unnecessary risks to the
mother and child and try to improve the quality of life of the
newborn.
CONCLUSSIONS
Maria Alejandra Gómez Otálvaro

42. 7. MAPAS CONCEPTUALES

43. Daniela Hincapié Tabares

44. Maria Alejandra
Gómez Otálvaro

45. 8. BIBLIOGRAFÍA

46. BIBLIOGRAFÍA
• Martínez L.M., Vargas N., Toro A.E., Pamplona A.P., Quevedo
E. Biología molecular. 7°edición. Medellín, Colombia: UPB;
2012.
• Gómez J.E., González A., Castaño J.C., Patarroyo M.A.
Biología molecular: principios y aplicaciones. Medellín,
Colombia: CIB; 2011.