2. QUE ES
• La electroforesis es una técnica para la separación
de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico.1 La
separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un
soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de
celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en
gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la
técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la
carga eléctrica de las moléculas y a su masa. la electroforesis se usa
en una gran mayoría en la materia del adn recombinan-te ya que nos
permite saber la carga que poseen los polipeptidos, y separar los
diferentes polipeptidos resultantes de las variaciones del
experimento del adn recombinante
3. FUNDAMENTOS DE LA
TECNICA.
• Alta sensibilidad, resolución y versatilidad.
• Método de separación de
– Ácidos nucleicos, Proteínas, Otras biomoleculas
• Entrega criterio de pureza
• Separa mezclas complejas
4. • Permite determinar
– El peso molecular de una proteína
– Punto isoeléctrico.
– Número de cadenas polipeptídicas de una proteína
• Migración de solutos en un campo eléctrico
5. • • Se mueven las partículas en base a:
– Su carga neta.
– Peso molecular
– Estructura tridimensional
6. • • La Movilidad electroforética (Me)
– Es un caso particular de la migración de un ión.
– En un campo eléctrico de 1V/cm
– Su signo es igual al de la carga de la partícula.
• La velocidad de Migración electroforética
– Carga de la molécula
– Voltaje aplicado
• Exceso de voltaje = Incremento del calor.
• Bajo voltaje = pobre separación(por difusión)
– Porosidad del gel
7. • Las biomacromoléculas.
– Poseen carga eléctrica.
– Grupos catiónicos y aniónicos disociables.
• La carga neta de una molécula
– pH del medio
– La interacción con otras pequeñas moléculas de
iones.
8. CLASES DE ELECTROFORESIS
• Electroforesis en geles de gradientes
• Electroforesis en geles de agarosa
• Electroforesis capilar
• Isoelectroenfoque
• Electroforesis bidimensional
• Electroforesis en gel poliacrilamida
10. REACTIVOS USADOS Y SU FINALIDAD
• TAE (Tris+acetico+EDTA): permite mantener las moléculas de DNA
con una carga negativa uniforme y constante.
• Tris:es el agente tamponante que mantiene el pH.
11. • EDTA: secuestro DE Mg++ evita la degradación
del DNA durante la preparación y la electroforesis.
• Azul de bromofenol: marca el "frente de avance".
permite detener la electroforesis con la confianza
de que las moléculas han sido capturadas.
12. • Xileno-cianol: permite detener la electroforesis con
la confianza de que las moléculas grandes de DNA
no se hayan salido del gel.
• Bromuro de etidio: se utiliza para "teñir" el
DNA, para revelar su posición en el gel.
13. INTERPRETACION DE RESULTADOS.
• Las proteínas fijadas en geles de poliacrilamida se
observan como bandas azules de diferentes pesos
moleculares.
14. • puede ser determinado comparando la
banda con un patrón de proteínas estándar
de peso conocido denominado marcador de
peso molecular.
• La distribución de las proteínas depende de
la concentración del gel, por lo tanto, el
operador deberá seleccionar el marcador de
peso molecular más adecuado.
• Algunas proteínas suelen migrar
anómalamente y muchas veces aparecen
con un mayor peso del esperado
15. • Las proteínas degradadas (desnaturalización
de las proteínas por causa de un agente
químico catalizador, ejm: proteasas)
